保健食品中總皂苷的測(cè)定

1、附件：、保健食品中大蒜素的測(cè)定1 范圍本方法適用于以大蒜及其制品為原料的保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，GH0S3）的含量測(cè)定。本方法最低檢出濃度為 0.0430mg/mL;取100mg式樣，提取定容5.0mL時(shí)，試樣中大蒜素 最低檢出質(zhì)量濃度為 0.20g/100g 。本方法最佳線性范圍：0.320mg/mL3.00 mg/mL。2 原理：根據(jù)大蒜素為揮發(fā)性油成分，經(jīng)有機(jī)溶劑提取，用氣相色譜儀分析，采用外標(biāo)法3試劑除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純。3.1無(wú)水乙醇3.2正己烷3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取0.1000g標(biāo)準(zhǔn)品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，該溶液中含大蒜素濃度為10.0mg/mL

2、。此溶液可在冰箱中保存七天。取該溶液1.0mL,置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素濃度為 1.0mg/mL。4 儀器4.1 氣相色譜儀：附氫火焰（FID）檢測(cè)器4.2 數(shù)據(jù)處理機(jī)或積分儀4.3 分析天平：萬(wàn)分之一4.4 超聲清洗機(jī)4.5 離心機(jī)： 3000r/min5 分析方法5.1 試樣提取5.1.1 固體試樣：稱(chēng)取試樣適量（相當(dāng)于含大蒜素5mg精確至0.001g ）,加無(wú)水乙醇適量,密塞，超聲70min，取出冷卻，加正己烷定容（調(diào)節(jié)大蒜素含量約為1mg/mL）,振搖，靜置分層后，取上層溶液進(jìn)樣。5.1.2 液體試樣 吸取試樣適量（相當(dāng)于含大蒜素5mg精確至0.001g

3、 ）,置于分液漏斗中，加5mL正己烷振搖提取1min，靜置(或離心)分層后，取上層溶液進(jìn)樣。5.2氣相色譜參考條件5.2.1色譜柱HP-5(30mX 0.25mm)5.2.2柱箱溫度：100C( 3min)10C/min 150C 20C/min 200C(10min)5.2.3進(jìn)樣口溫度：220 C5.2.4檢測(cè)器溫度：250 C5.2.5載氣：:氮?dú)?1mL/min)5.2.6氫氣：40mL/min;空氣：400mL/mi n5.2.7進(jìn)樣量:1 i L5.3定性分析:在參考操作條件下，以對(duì)照品與試樣比較保留時(shí)間定性。5.4疋量分析:試樣中大蒜素色譜峰面積或峰高與標(biāo)準(zhǔn)的色譜峰面積或峰高比較

4、定量5.5結(jié)果計(jì)算W =A1 C V X100A m 1000式中:W大蒜素的含量， g/100g (g/100mL)；A試樣使用液色譜峰面積或峰高；A 標(biāo)準(zhǔn)使用液峰面積或峰高；C標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度， mg/mL;V試樣定容體積，mLn試樣量，g ( mL。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。、保健食品中蘆薈苷的測(cè)定1 范圍 本方法適用于以蘆薈及其制品為原料的保健食品中蘆薈苷含量的測(cè)定。 本方法的最低檢出量 10ng。本方法的最佳線性范圍： 0100卩g/mL2 原理：用甲醇 +水（ 55+45）作為溶劑，提取試樣中的蘆薈苷，經(jīng)高效液相色譜儀C18 柱分離，在紫外 293nm 波長(zhǎng)下檢測(cè)，以蘆薈苷保留時(shí)間定

5、性，峰面積定量。3 試劑除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合 GB/T 6682-2008 一級(jí)水要求。3.1 甲醇：色譜純3.2 蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)品：純度98%3.3 蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱(chēng)取蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg，加流動(dòng)相甲醇+水（55+45）溶解并移入100m容量瓶中，定容至刻度。精密移取5mLi 10mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度。4 儀器設(shè)備4.1 高效液相色譜儀：附二極管陣列或紫外檢測(cè)器4.2 色譜柱：Ci8（以十八烷基鍵合硅膠填料為填充劑）或具同等性能的色譜柱，150mmK 6mm54.3 超聲波清洗器4.4 C 18凈化富集柱G8預(yù)柱裝量0.5g :分配型4.5 離心機(jī)：

6、 3000r/min5色譜參考條件5.1流動(dòng)相：甲醇 +水=55+455.2流速：1mL/min5.3柱溫：40 C5.4檢測(cè)波長(zhǎng)： 293nm5.5靈敏度：0.016AUFS5.6進(jìn)樣量：10卩L5 分析步驟5.1 試樣制備：將固體試樣粉碎成粉末狀，混勻，稱(chēng)取適量試樣（相當(dāng)于含蘆薈苷2.5mg,精確至O.OOIg ）于50口1容量瓶中，加檢測(cè)用流動(dòng)相 30mL,混勻，經(jīng)超聲振提5min,加流動(dòng)相 定容50mL離心沉淀，上清液經(jīng)濾膜（0.45m）過(guò)濾，蘆薈汁飲料直接經(jīng) 0.45卩m濾膜過(guò) 濾。5.2 測(cè)定步驟：分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液101 L注入高效液相色譜儀，依上述色譜條件，以保留時(shí)

7、間定性，用外標(biāo)法計(jì)算試樣中蘆薈苷的含量。7結(jié)果計(jì)算X 一A m式中：X試樣中蘆薈苷含量，mg/g （mg/mL）;A 試樣中蘆薈苷的峰面積或峰高；C標(biāo)準(zhǔn)液的質(zhì)量濃度，mg/mL；A標(biāo)準(zhǔn)液中蘆薈苷的峰面積或峰高；V試樣定容體積，mLm-試樣的質(zhì)量，g （mL。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。、保健食品中紅景天苷的測(cè)定1范圍本方法適用于以紅景天為原料的保健食品中紅景天苷的測(cè)定。本方法的檢出限：0.5 .g/mL。本方法的線性范圍：0.010.50mg/mL。2原理：混勻的保健食品試樣經(jīng) 70%乙醇超聲波提取，聚酰胺柱凈化后，以0.01mol/L NHAc-甲醇為流動(dòng)相（80 : 20）,采用高效液相色譜

8、法，紫外檢測(cè)器，根據(jù)保留時(shí)間定性，標(biāo)準(zhǔn)曲 線法定量檢測(cè)。3試劑試驗(yàn)用水為重蒸水。3.1 乙酸銨：分析純3.2 甲醇：色譜純3.3 乙醇：分析純3.4 柱層析用聚酰胺粉（粒度：3060 目）3.5 紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱(chēng)量紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品0.0200g，加入甲醇溶解并定容至10mL。此溶液每毫升含2.0mg紅景天苷。4儀器4.1 高效液相色譜儀：附紫外檢測(cè)器（UV4.2 超聲波清洗器4.3 離心機(jī)4.4 聚酰胺凈化柱：用 5mL玻璃注射器（長(zhǎng) 75mm內(nèi)徑為12mn）作層析柱，底部放少許脫脂棉，內(nèi)裝層析用聚酰胺粉1.0g。5分析步驟5.1 試樣處理5.1.1 固體樣品：取20粒以上片劑或膠囊試樣進(jìn)

9、行粉碎、混勻，準(zhǔn)確稱(chēng)取適量試樣（精確至0.001g ），用70%乙醇超聲波萃取 30min，定容至25mL。混勻，靜置后，取10.00mL上清 液于蒸發(fā)皿中，于沸水浴上揮干溶劑，用3mL水（分34次）溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至聚酰胺柱上，待過(guò)柱后再用10mL水分?jǐn)?shù)次洗脫柱中吸附的紅景天苷，控制洗脫液流速為0.50.8mL/min，收集所有的洗脫液，定容至10.00mL，混勻后經(jīng)0.45卩m濾膜過(guò)濾，供液相色 譜分析用。5.1.2 液體樣品：根據(jù)樣品中紅景天苷的含量，準(zhǔn)確吸取一定量搖勻后的試樣（110mL于蒸發(fā)皿中去除溶劑（若試樣中不含乙醇，則可直接過(guò)聚酰胺柱），其余步驟同上。5.2 色譜參考條件5.2.

10、1 色譜柱：C18柱，4.6 x 250mm,5 卩 m=5.2.2 柱溫：25C5.2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm5.2.4 流動(dòng)相：甲醇-0.01mol/L 乙酸銨溶液=20:805.2.5 流速：1.0mL/min5.2.6 進(jìn)樣量：10L5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：分別配制濃度為 0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50 mg/mL紅景天 苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進(jìn)行液相色譜分析，以紅景天苷的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的色 譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或進(jìn)行線性回歸。6測(cè)定：取10卩L標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰面積與 標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。7結(jié)果計(jì)算

11、CXVX =mx 1000式中：X試樣中紅景天苷的含量，mg/g （mg/mL）;C由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測(cè)樣液中紅景天苷的濃度（乜/mL）;V樣品的定容體積，mL;m樣品量，g （mL）。計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字。四、保健食品中肉堿的測(cè)定1 范圍 本方法適用于以肉堿為主要原料的保健食品中肉堿的測(cè)定。本方法最低檢出量為0.27卩g。本方法最佳線性范圍：0.050mg/mL2.0mg/mL。2 原理： 試樣中的肉堿以 0.5mmol/L 的鹽酸超聲提取， 反相色譜分離， 與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間 比較定性，以峰面積外標(biāo)法定量。3試劑除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T 6682-2008

12、一級(jí)水要求。3.1磷酸氫二鉀3.2辛烷磺酸鈉3.30.50mmol/L 鹽酸3.4肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液： 精密稱(chēng)取干燥至恒重的肉堿標(biāo)準(zhǔn)品（含量 98% 0.0200g ,用 0.50mmol/L鹽酸溶解并定容為10.0mL，此溶液濃度為2.0mg/mL。4 儀器4.1 高效液相色譜儀：配有二極管陣列或紫外檢測(cè)器和色譜工作站或記錄儀4.2 超聲波提取器4.3 溶劑微孔過(guò)濾器：帶 0.45卩m水相濾膜。5 分析步驟5.1 試樣預(yù)處理：稱(chēng)取粉碎并混合均勻的試樣適量（相當(dāng)于含肉堿約40mg,精確至0.001g），液體試樣取5.0mL，于 50mL容量瓶中，加入 0.50mmol/L 鹽酸約35mL，超聲提取1

13、0min，用 0.50mmol/L鹽酸定容，混勻，過(guò)濾，棄初濾液數(shù)毫升，收集濾液，過(guò)0.45卩m水相濾膜，為試樣處理液。供 HPL（分析。5.2 試樣分析5.2.1 色譜參考條件： Shim-pakCLC ODS柱, 4.6 x 200mm 10 卩 m=5.2.2 流動(dòng)相：水相 0.05mol/L（ 8.7g ） 磷酸氫二鉀溶液， 0.002mol/L （ 0.4325g ）辛烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)至 pH2.5- 乙腈=90:105.2.3 流速： 0.8mL/min5.2.4 檢測(cè)波長(zhǎng)： 210nm5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.25、0.50、1.0、2.0、2.5、5.

14、0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.4 )于5mL容量瓶中，用0.50mmol/L鹽酸稀釋并定容為5.0mL，分別進(jìn)樣20兒進(jìn)行色譜分析。用標(biāo)準(zhǔn)濃度一峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4 試樣測(cè)定：取20.iL試樣處理液(5.1 )注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，面積定量。5.5 結(jié)果計(jì)算CX VX =m式中：X為試樣中肉堿的含量，mg/g;n為試樣質(zhì)量，g;C為試樣處理液中肉堿的濃度，mg/mL；V為試樣處理液體積，mL。結(jié)果保留三位有效數(shù)字。五、保健食品中人參皂苷的高效液相色譜測(cè)定1 適用范圍 本方法適用于以人參為主要原料的保健食品中人參皂苷含量的測(cè)定。 本方法的六種皂苷的最低檢出量為 10mg/kg 。本方法的六種

15、皂苷的最佳線性范圍：0.1mg/mL1mg/mL2 原理：將試樣中的人參皂苷溶解、提取，經(jīng)凈化處理后，使用梯度洗脫反相高效液相色 譜進(jìn)行分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)， 根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性， 外標(biāo)法定量， 適用于保健食品 中人參皂苷Re Rgi、Rb、Rc、Rb、Rd的同時(shí)定量分析。3 試劑 除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合 GB/T 6682-2008 一級(jí)水要求。3.1 乙腈：色譜純，200nm吸光度值為0.0213.2 甲醇3.3 D101 大孔吸附樹(shù)脂3.4 高效液相色譜流動(dòng)相：梯度淋洗A液為乙腈，B液為水。3.5 人參皂苷Re Rg、Rb、Rc Rb、Rc標(biāo)準(zhǔn)品：含量大于 9

16、8% （HPLC3.6 人參皂苷Re Rg、Rb、Rc、Rb、Rd標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：配制人參皂苷Re Rg、Rb、Rc、Rb、Rc標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度分別為 10mg/mL；再以此儲(chǔ)備液配制成混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，濃度范 圍為0.1mg/mL1mg/mL;所有標(biāo)準(zhǔn)溶液均用甲醇配制。4 儀器設(shè)備4.1高效液相色譜儀：附二極管陣列或紫外檢測(cè)器4.2超聲波清洗器4.3離心機(jī)4.4水浴鍋5 分析步驟5.1 固體試樣處理：取試驗(yàn)研成粉末，并過(guò)20目篩。稱(chēng)取該粉末樣適量（相當(dāng)于含總?cè)藚⒃碥占s75mg,精確至O.OO1g ），于50mL具塞試管中，加水50mL于超聲波清洗器中超聲提取 30 分鐘，取出，待溶液恢復(fù)常溫

17、后，準(zhǔn)確取出10mL,通過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂凈化柱（大孔吸附樹(shù)脂使用前先經(jīng)甲醇浸泡，水洗，裝成10cm長(zhǎng)小柱），小柱先用10mL水沖洗，棄去水液之后，用70%甲醇25mL洗脫皂苷，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ葜?mL該樣液離心后過(guò)0.5卩m膜，濾液進(jìn)行色譜分析。5.2 液體試樣處理：取一定量的試樣于水浴上蒸干，殘?jiān)?0mLK超聲提取30分鐘，余下步驟與5.1相同。5.3 測(cè)定5.3.1 液相色譜參考條件5.3.1.1 色譜柱：反相 C18柱, 4.6 X 250mm 5卩 m5.3.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm5.3.1.3 梯度淋洗條件時(shí)間(min)乙腈()水()流速(

18、mL/min)梯度曲線016841.012018821.065540601.066540601.067510001.018016841.015.3.1.4 柱溫：35C5.3.2 色譜分析5.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：將混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液均取5卩L進(jìn)HPL(分析，用峰面積對(duì)濃度作各皂苷的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線。5.3.2.2 試樣測(cè)定：取5卩L試樣凈化液進(jìn)高效液相色譜分析，以絕對(duì)保留時(shí)間定性，用峰面積通過(guò)各皂苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，計(jì)算試樣中人參皂苷Re Rg、Rb、Rc、Rb、Rc的含量。6結(jié)果計(jì)算CX 5X 5X 100試樣中各人參皂苷的含量(g/l00g )=mx 1000式中：C試樣溶液中各人參皂苷的

19、含量，mg/mLn試樣量，g (ml)。試樣中總?cè)藚⒃碥盏暮?=CRe+ CRg+ CRb+ CR外CRb+ CRd式中：CRe-試樣中 Re 的含量，g/100g ( g/100mL);CRg試樣中 Rg1 的含量，g/100g (g/100mL);CRb試樣中 Rb1 的含量，g/100g (g/100mL);CRc-試樣中 Rc 的含量，g/100g ( g/100mL);CRb試樣中 Rb2的含量，g/100g (g/100mL);CRd-試樣中 Rd的含量，g/100g ( g/100mL)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字六、保健食品中核苷酸的測(cè)定1 范圍本方法規(guī)定了保健食品中核苷酸的高

20、效液相色譜測(cè)定方法。本方法檢出限：胞嘧啶核苷（CMP 0.04卩g/mL、脲嘧啶核苷（UMP 0.05卩g/mL、腺嘌呤核苷（AMP 0.05卩g/mL、鳥(niǎo)嘌呤核苷（GMP 0.06卩g/mL。本方法線性范圍：胞嘧啶核苷（CMP 0.99212.4卩g/mL、脲嘧啶核苷（UMP 1.1714.6卩g/mL、腺嘌呤核苷（AMP 1.0112.6卩g/mL、鳥(niǎo)嘌呤核苷（GMP 0.94812.3卩g/mL。2 原理： 將試樣溶解、去除蛋白后， 使用氨基固相萃取柱對(duì)核苷酸進(jìn)行凈化富集， 根據(jù)高效液相色譜紫外檢測(cè)器在 254nm處的響應(yīng)進(jìn)行定性定量。3 試劑除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合

21、 GB/T 6682-2008 一級(jí)水要求。3.1甲醇：優(yōu)級(jí)純3.2乙酸3.3磷酸二氫鉀3.4磷酸氫二鉀3.5季銨鹽固相萃取柱3.6核苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)量經(jīng)100 C干燥4h處理的標(biāo)準(zhǔn)品胞嘧啶核苷 （CMP100mg,脲嘧啶核苷（UMP、腺嘌呤核苷（AMP、鳥(niǎo)嘌呤核苷（GMP各40mg,加水定容至100mL。3.7核苷酸標(biāo)準(zhǔn)使用液：將核苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液用 0.25mol/L , pH=3的磷酸二氫鉀稀釋100倍。4 儀器設(shè)備：高效液相色譜儀（附二極管陣列或紫外檢測(cè)器5 分析步驟5.1 試樣處理5.1.1 稱(chēng)取試樣適量（相當(dāng)于含核苷酸約6.5mg，精確至0.001g），于100mL容量瓶中

22、，加入約50 C熱水80mL,徹底混勻。當(dāng)試樣液達(dá)到室溫后用水定容至刻度。5.1.2 準(zhǔn)確吸取10mL試樣溶液至100mL容量瓶中，加入0.5 %乙酸5mL、水10mL,混勻后靜置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度，混勻后過(guò)濾，棄去數(shù)毫升初濾液后收集約30mL濾液。5.1.3 將季銨鹽固相萃取柱先用 10mL甲醇、10mL水活化后，再將20mL試樣濾液過(guò)濾，以1mL水清洗萃取柱，用0.25mol/L , pH=3.5磷酸二氫鉀溶液洗脫出 5ml濾液。全部過(guò)程需要控制流速1滴 / 秒。5.2 液相色譜參考條件5.2.1 色譜柱：C18 柱 3.9 x 150mm522柱溫：25 C5.2.3 檢

23、測(cè)波長(zhǎng)： 254nm5.2.4 流動(dòng)相： 0.01mol/L 磷酸二氫鉀 -0.1mol/L 磷酸氫二鉀 =480:205.2.5 流速： 0.6mL/min5.2.6 進(jìn)樣量：10卩L5.2.7 色譜分析：量取10卩L標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別配制濃度為1.0、2.0、5.0、10.0、16.0卩g/mL的4種核苷酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進(jìn)行液相色譜分析，以峰高或峰面積對(duì)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。6 結(jié)果計(jì)算h1xCx Kx 5x100X = h2x mx 1000式中：X試樣中核苷酸的含量，mg/100g;h1

24、 試樣峰高或峰面積；C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，卩g/mL ；K稀釋倍數(shù)；h2 標(biāo)準(zhǔn)溶液峰高或峰面積；n試樣量，g。試樣中總核苷酸的含量為胞嘧啶核苷（CMP、脲嘧啶核苷（UMP、腺嘌呤核苷（AMP、鳥(niǎo)嘌呤核苷（GMP含量之和。檢測(cè)結(jié)果保留三位有效數(shù)字。七、保健食品中洛伐他汀含量測(cè)定1 范圍 本方法適用于以紅曲為原料的保健食品中洛伐他汀含量的測(cè)定。 本方法的最低檢出量 2.0mg/kg 。本方法的最佳線性范圍 2.00300卩g/mL。2 原理：將酸性介質(zhì)中的試樣使用三氯甲烷進(jìn)行提取，揮干提取溶劑，以流動(dòng)相定容，根 據(jù)高效液相色譜紫外檢測(cè)器在238nm處的響應(yīng)進(jìn)行定性定量。3 試劑 除特殊說(shuō)明，所用試劑均為

25、分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合 GB/T 6682-2008 一級(jí)水要求。3.1 甲醇：色譜純3.2 三氯甲烷3.3 磷酸3.4 洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液： 準(zhǔn)確稱(chēng)量洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品 0.0400g ，加入檢測(cè)用流動(dòng)相并定容至 100mL。此溶液每毫升含0.4mg洛伐他汀。3.5 洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)使用液：將洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用流動(dòng)相稀釋10倍。此溶液每毫升含 40卩g洛伐他汀。4 儀器設(shè)備4.1高效液相色譜儀：附二極管陣列或紫外檢測(cè)器（UV）4.2超聲波清洗器4.3渦旋混勻器4.4離心機(jī)4.4真空泵5 分析步驟5.1 試樣處理5.1.1 將片劑、膠囊或紅曲發(fā)酵產(chǎn)物試樣粉碎并混合均勻，稱(chēng)取試樣適量（相當(dāng)于含洛伐他汀約

26、10mg精確至0.001g ）,于50mL試管中，加入10.0mLpH=3磷酸水溶液。超聲提取10min后再加入10.0mL三氯甲烷，置于渦旋混勻器 3min。靜置后去掉上層水相，將三氯甲烷層以 3000r/min ，離心 3min。5.1.2 準(zhǔn)確吸取上清液1.0mL至5mLL式管中，將試管置于50C左右水浴中使用真空泵減壓干燥至揮去全部溶劑。5.1.3 向試管中加入流動(dòng)相并定容至5.0mL，徹底混勻，經(jīng)0.45卩m濾膜過(guò)濾后待進(jìn)樣。5.2 液相色譜參考條件5.2.1 色譜柱：Ci8柱, 4.6 X 250mm5.2.2 柱溫：室溫5.2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm5.2.4 流動(dòng)相：甲醇-水

27、-磷酸=385:115:0.145.2.5 流速：1.0mL/min5.2.6 進(jìn)樣量：10卩L5.2.7 色譜分析：量取10卩L標(biāo)準(zhǔn)溶液系列及試樣溶液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：配制濃度為 2.0、10、50、100、300卩g/mL洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定 的儀器條件下進(jìn)行液相色譜分析，以峰高或峰面積對(duì)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4 結(jié)果計(jì)算wh1 x5、： / t /. *、”, -、* t 口 口高效液相色譜儀（附帶示差檢測(cè)器）4.2離心機(jī)：10000r/min4.3分析天平： 1/100004.4分析天平： 1/10005 分析步驟5

28、.1 試樣制備5.1.1 糖漿和糖粉：稱(chēng)取I.OOOOg糖漿或0.2000g糖粉，用水稀釋或溶解， 并定容置10.0mL, 搖勻，溶液過(guò)0.45卩m濾膜，濾液用于HPL（測(cè)定。5.1.2 不含乳液體飲料：飲料直接離心，上清液過(guò)0.45卩m濾膜，濾液用于HPL（測(cè)定。5.1.3 含乳液體飲料：取10.0mL試樣放入燒杯中，加無(wú)水乙醇30mL攪拌混勻，放置5min ,離心，取上清液20 mL在沸水浴上揮發(fā)近干。殘液用水溶解并定容至510mL,溶液過(guò)0.45卩m濾膜，濾液用于HPLC測(cè)定。5.1.4 奶粉：稱(chēng)取2.000g試樣，放入200mL燒杯中，加水15.0mL溶解，再加45.0mL無(wú)水乙醇，攪

29、勻，放置5min,離心，取上清液30.0mL在沸水浴上揮發(fā)近干，殘液用水溶解并定容至一定體積，溶液過(guò)0.45卩m濾膜，濾液用于HPL（測(cè)定。5.2 高效液相色譜參考條件5.1.1 色譜柱：不銹鋼柱，內(nèi)徑 4.6mm, 300mn反相氨基柱，粒徑 5卩m5.1.2 柱溫：45 C，檢測(cè)室：40 C5.1.3 流動(dòng)相：乙腈 -水=76：245.1.4 流量： 1.5mL/min5.1.5 靈敏度： 645.1.6 進(jìn)樣量：20卩L5.3 測(cè)定：在上述色譜條件下注入標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。 6結(jié)果計(jì)算(注：功能性異麥芽低聚糖的含量以異麥芽糖、潘糖、異麥芽三糖計(jì))A Ci V

30、fX =Ai m式中：X試樣中某低聚糖的含量，g/kg (g/L)；A試樣的峰面積或峰高；Ci 單一低聚糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mLAi 標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積或峰高；試樣質(zhì)量(或體積)， g (mL)；V試樣定容體積，mLf 稀釋倍數(shù)。結(jié)果保留三位有效數(shù)字。1 適用范圍 本方法適用于紅茶、綠茶等為主要原料的保健食品中茶氨酸含量的測(cè)定。 本方法的最低檢出量 10ng。本方法的最佳線性范圍：0.1mg/mL4.2mg/mL。2 原理：將試樣中的茶氨酸用水提取，使用等度洗脫反相高效液相色譜進(jìn)行分離，紫外檢測(cè)器（UV檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量，適用于紅茶、綠茶及以茶為原 料生產(chǎn)的保健食品中

31、茶氨酸的高效液相色譜測(cè)定方法。3 試劑 除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合 GB/T 6682-2008 一級(jí)水要求。3.1 三氟乙酸3.2 高效液相色譜流動(dòng)相：等度淋洗3.3 茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)品：含量大于 98（ HPLC）3.4 茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制： 準(zhǔn)確稱(chēng)取3.5mg茶氨酸對(duì)照品，溶于水中，用10mL容量瓶定容, 搖勻， 此標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 0.35mg/mL。4 儀器設(shè)備4.1 高效液相色譜儀：附雙高壓輸液泵、紫外檢測(cè)器4.2 水浴鍋5 分析步驟5.1 固體試樣的處理：稱(chēng)取粉碎試樣適量（相當(dāng)于含茶氨酸10mg,精確至O.OOIg ），加入30mL HO,在80 C的水浴鍋上加熱40

32、min，冷卻，離心，過(guò)濾后，濾液加水定容至 50mL,試 樣溶液過(guò)0.45卩m水膜，濾液進(jìn)行色譜分析。5.2 液體試樣的處理：取一定量的試樣在水浴鍋上蒸干，殘?jiān)?0mL水溶解，溶液過(guò)0.45卩m水膜，濾液進(jìn)行色譜分析。5.3 色譜參考條件5.3.1 色譜柱：反相 Ci8柱, 5卩 m, 100?, 4.6 X 250mm5.3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)： 203nm5.3.3 等度淋洗條件：pH=3.0的三氟乙酸水溶液5.3.4 流速： 1mL/min535柱溫：35 C5.4 色譜分析L進(jìn)行HPL（分析，用峰面積對(duì)以絕對(duì)保留時(shí)間定性， 用峰5.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液2、4、6、10、1

33、2卩進(jìn)樣體積繪制茶氨酸的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線。5.4.2 試樣測(cè)定：取10卩L試樣凈化液進(jìn)行高效液相色譜分析，面積通過(guò)茶氨酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量計(jì)算試樣中茶氨酸的含量。C V 100m 10006結(jié)果計(jì)算試樣中茶氨酸的含量（g/100g ）式中：C試樣溶液中茶氨酸的含量，mg/mL;V試樣定容體積；n試樣質(zhì)量，g。分析結(jié)果保留三位有效數(shù)字。一、保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色譜測(cè)定1 范圍本方法適用于以五味子為主要原料的保健食品中五味子醇甲、 五味子甲素和乙素含量的 測(cè)定。本方法的檢測(cè)限分別為五味子醇甲0.02卩g、五味子甲素0.03卩g、五味子乙素0.02卩g。本方法的最佳線性范圍為0.

34、210卩g。2 原理：將試樣中的木脂素提取后，使用等度洗脫反相高效液相色譜進(jìn)行分離，紫外檢測(cè) 器（UV檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。3 試劑除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合 GB/T 6682-2008 一級(jí)水要求。3.1 甲醇：色譜純3.2 高效液相色譜流動(dòng)相：等度淋洗3.3 五味子醇甲、五味子甲素和乙素標(biāo)準(zhǔn)品：含量均大于98（ HPLC）3.4 五味子醇甲、五味子甲素和乙素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：配制五味子醇甲、五味子甲素和乙素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度分別為3mg/mL,再以此儲(chǔ)備液配制成混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，濃度范圍為0.02mg/mL1mg/mL;所有標(biāo)準(zhǔn)溶液均用甲醇配制。4 儀

35、器4.1 高效液相色譜儀：附雙高壓輸液泵、紫外檢測(cè)器4.2 超聲波清洗器4.3 離心機(jī)5 分析步驟5.1 試樣處理：稱(chēng)取粉碎后適量（相當(dāng)于含五味子總量30mg,精確至0.001g ），置20mL容量瓶中，加入甲醇約18mL,超聲提取20min，取出，靜置待冷，加甲醇至刻度。試樣溶液過(guò)0.45卩m油膜，濾液進(jìn)行色譜分析。5.2 測(cè)定5.2.1 液相色譜參考條件5.2.1.1 色譜柱：反相 6柱，5卩 m 100?, 4.6 X 250mm5.2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)： 254nm5.2.1.3 等度淋洗條件：甲醇 -水=77:23 （ v/v ）521.4 流速：1mL/min521.5 柱溫：35

36、C5.2.2 色譜分析5.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：將標(biāo)準(zhǔn)混合系列溶液均取 10卩L進(jìn)HPLC分析，用峰面積對(duì)濃度計(jì)算五味子醇甲、五味子甲素和乙素的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線。5.322試樣測(cè)定：取10卩L試樣凈化液進(jìn)行高效液相色譜分析，以絕對(duì)保留時(shí)間定性，用峰面積通過(guò)五味子醇甲、五味子甲素和乙素的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量計(jì)算試樣中的含量。6結(jié)果計(jì)算試樣中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量（mg/100g ) = C 20100mg/mL;式中:C試樣溶液中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量, m試樣質(zhì)量，分析結(jié)果保留三位有效數(shù)字。十二、保健食品中腺苷的測(cè)定1 范圍 本方法適用于保健食品中腺苷含量的測(cè)定。本方法的檢出

37、限：0.04卩g。本方法的線性范圍： 0.4060.0卩g/mL。2 原理：將粉碎的膠囊、片劑試樣使用水進(jìn)行提取，根據(jù)高效液相色譜法定性定量檢測(cè)。3 試劑除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)水。3.1 磷酸二氫鉀3.2 無(wú)水乙醇：優(yōu)級(jí)純3.3 甲醇：色譜純3.4 提取液：純化水3.5 腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取腺苷標(biāo)準(zhǔn)品0.0100g ,加水溶解并定容至25mLo此溶液每毫升 含0.4mg腺苷。4 儀器4.1 高效液相色譜儀：附二極管陣列或紫外檢測(cè)器（UV）4.2 超聲波清洗器4.3 離心機(jī)5 分析步驟5.1 試樣處理：取固體試樣進(jìn)行粉碎混勻，稱(chēng)取均勻粉末適量（相當(dāng)于含腺苷0.5mg,精

38、確至0.001g ），于25mL容量瓶中，加入約20mL提取液，超聲提取10min。取出后加入提取液定 容至刻度，混勻后以3000r/min離心3min。經(jīng)0.45卩m濾膜過(guò)濾后供液相色譜分析用。5.2 液相色譜參考條件5.2.1 色譜柱：Ci8柱, 4.6 X 150mm 5 卩 m5.2.2 柱溫：室溫5.2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)： 254nm5.2.4 流動(dòng)相：甲醇 -0.01mol/L 磷酸二氫鉀溶液 =10:905.2.5 流速： 1.0mL/min5.2.6 進(jìn)樣量：10卩L5.2.7 色譜分析：取10卩L標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。5

39、.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別配制濃度為0.400、2.00、4.00、20.0、60.0g/mL腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進(jìn)行液相色譜分析，以峰高或峰面積對(duì)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4 結(jié)果計(jì)算hi C V 100X 一h2 m 1000式中：X試樣中腺苷的含量，mg/100g;hi試樣峰高或峰面積；C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，卩g/mL ；V試樣定容體積，mL h2 標(biāo)準(zhǔn)溶液峰高或峰面積； m-試樣質(zhì)量，g。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。十三、保健食品中殼聚糖脫乙酰度的測(cè)定1樣品測(cè)定：取殼聚糖0.5g，加0.3mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液20mL攪拌使其完全溶解。加甲基 橙作指示劑，用O.1mol/L的氫氧化鈉標(biāo)

40、準(zhǔn)溶液滴定至試液由紅色變?yōu)榻埸S色止。2結(jié)果計(jì)算脫乙酰度=M1V-M2V2 16 100W X1000式中：M 鹽酸濃度，mol/L ；V 鹽酸用量，mL；M 氫氧化鈉濃度，mol/L ；V2 氫氧化鈉滴定用量，mL；V殼聚糖質(zhì)量，g；16氨基（NH2摩爾質(zhì)量。十四、保健食品中總皂苷的測(cè)定方法一1 范圍 本方法適用于以含皂苷類(lèi)成分為主要原料的保健食品中總皂苷含量的測(cè)定。本方法的檢測(cè)限為15ng,定量限為50ng。本方法的最佳線性范圍：0.08mg0.24mg。2 原理：試樣用水提取總皂苷類(lèi)成分，經(jīng)水飽和正丁醇萃取、氨試液洗滌除雜后，試樣中 的皂苷類(lèi)成分在高氯酸的作用下與香草醛反應(yīng)， 產(chǎn)生特征的紫

41、紅色， 采用分光光度法測(cè)定總 皂苷在560nm處的吸光度進(jìn)行定量。3 試劑 除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用分析純?cè)噭?、蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水。3.1 水飽和正丁醇：取正丁醇適量，加入適量水，充分振搖，靜置使分層，上層液體即為 水飽和正丁醇。3.2 氨試液：取氨水 40mL,加水使成100mL,即得3.3 甲醇3.4 高氯酸：優(yōu)級(jí)純3.5 冰乙酸3.6 香草醛溶液：稱(chēng)取 5g 香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。3.7 人參皂苷 Re標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱(chēng)取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品10mg,用甲醇溶解并定容至50.0mL，即人參皂苷 Re濃度為0.2mg/mL。4 儀器4.1紫外 /可見(jiàn)分光光度計(jì)

42、4.2超聲波清洗器4.3水浴鍋4.4離心機(jī)4.5分液漏斗4.6分析天平5 分析步驟5.1 試樣處理5.1.1 固體試樣：稱(chēng)取1.0g左右的樣品（或根據(jù)試樣含總皂苷量定），置于100mL容量瓶中，加水約80mL，超聲30min，放冷，再用水定容至 100mL,搖勻，放置，濾過(guò)，精密吸取 續(xù)濾液25mL進(jìn)行萃取。5.1.2 液體試樣：含乙醇的補(bǔ)酒類(lèi)保健食品，精密吸取10mL試樣置水浴上揮盡乙醇，用水轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，并加水至約25mL，進(jìn)行萃取。5.1.3 非乙醇類(lèi)的液體試樣：精密吸取10mL試樣（或根據(jù)試樣含總皂苷量定）至分液漏斗中，加水至約25mL，進(jìn)行萃取。5.2 萃?。簩⒁烟幚砗玫脑嚇樱ㄒ?jiàn)

43、 5.1 ）置于分液漏斗中，加入水飽和正丁醇振搖萃取 3次，每次20mL分取正丁醇液（必要時(shí)可離心），合并正丁醇液用氨試液洗滌 3次，每次20mL， 分取正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25mL量瓶中（液體樣品則轉(zhuǎn)移至 10mL）量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。5.3 樣品測(cè)定：精密吸取 5.2項(xiàng)下溶液1.0mL （或根據(jù)試樣含總皂苷量定），置于10mL具塞比色管中，置水浴中揮干溶劑，精密加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，再精密加入 0.8mL高氯酸，混勻，使殘?jiān)既芙猓?60C水浴中加熱10mi n,取出，冰浴冷卻后，精密加入冰乙酸5.0mL，搖勻后，立即于 56

44、0nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定。5.4 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.7 ） 0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL于10mL具塞比色管中，以下操作從 5.3 “置水浴中揮干溶劑”起，與試樣 同法測(cè)定吸光度。5.5 空白測(cè)定：精密吸取 5.2項(xiàng)下溶液1.0mL,置于10mL具塞比色管中，置水浴中揮干溶 劑,精密加入 0.20mL 冰乙酸溶液,以下操作從 5.3 “再精密加入 0.8mL 高氯酸, ”起, 與試樣同法測(cè)定吸光度,做試樣自身校正。6 結(jié)果計(jì)算Cx VX 100X = V0x mx 1000式中：X試樣中總皂苷量（以人參皂苷Re計(jì)），g/10

45、0g或g/1OOmL;C經(jīng)試樣自身校正后，由標(biāo)準(zhǔn)曲線算得被測(cè)液中總皂苷量，mg;V試樣稀釋體積，mL;V 參加顯色試樣體積，mL；m試樣取樣量， g或mL。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。方法1 試劑1.1 Amberlite-XAD-2 大孔樹(shù)脂，購(gòu)自 Sigma 化學(xué)公司。1.2 正丁醇：分析純1.3 乙醇：分析純1.4 中性氧化鋁：層析用， 100-200 目。1.5人參皂苷Re:購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院1.6 香草醛溶液：稱(chēng)取 5g 香草醛，加冰乙酸溶解并定容至 100mL 。1.7 高氯酸:分析純1.8 冰乙酸:分析純1.9 人參皂苷 Re 標(biāo)準(zhǔn)溶液:精確稱(chēng)取人參皂苷 Re 標(biāo)準(zhǔn)品 0.

46、020g， 用甲醇溶解并定容至10.0mL ，即每毫升含人參皂苷 Re2.0mg。2 儀器2.1 比色計(jì)2.2 層析柱3 分析步驟3.1 試樣處理3.1.1 固體試樣: 稱(chēng)取 1.000g 左右的試樣 （根據(jù)試樣含人參量定） ，置于 100mL 容量瓶中，加少量水，超聲 30min，再用水定容至100mL，搖勻，放置，吸取上清液I.OmL進(jìn)行柱層析。3.1.2 液體試樣: 含乙醇的補(bǔ)酒類(lèi)保健食品， 吸取 1.0mL 試樣放水浴揮干， 用水浴溶解殘?jiān)?用此液進(jìn)行柱層析。非乙醇類(lèi)的液體試樣，吸取 1.0mL 試樣（假如濃度高或顏色深，需稀 釋一定體積后再取 1 .0mL ）進(jìn)行柱層析。3.2 柱

47、層析:用 10mL 注射器作層析管，內(nèi)裝 3cmAmberlite-XAD-2 大孔樹(shù)脂，上加 1cm 中性氧化鋁。先用 25mL70% 乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用 25mL 水洗柱，棄去洗脫液，精確 加入 1.0mL 已處理好的試樣溶液（見(jiàn) 3.1 ） ，用 25mL 水洗柱，棄去洗脫液，用 25mL70% 乙醇洗脫人參皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60 C水浴揮干。以此作顯色用。3.3顯色：在上述已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再?.8mL高氯酸， 混勻后移入5mL帶塞刻度離心管中，60C水浴上加熱10min，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0mL，搖勻后，以1cm比色池于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定。3.4標(biāo)準(zhǔn)管：吸取人參皂苷 Re標(biāo)準(zhǔn)溶