血凝的基本知識-PPT參考幻燈片

1、倍賽血凝事業(yè)部2021-9-26 1血凝的基本知識血凝的基本知識 血液凝固（凝血）： 形態(tài)：血液由液體狀態(tài)凝膠狀態(tài)。 本質(zhì)：纖維蛋白原纖維蛋白。 基本學(xué)說凝血瀑布學(xué)說。2021-9-26 2凝血瀑布學(xué)說凝血瀑布學(xué)說血液凝固是一系列凝血因子酶反應(yīng)過程；每個凝血因子都被其前一因子所激活；最后激活凝血酶原生成凝血酶凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，生成纖維蛋白凝塊。2021-9-26 3血凝試劑的基本原理及臨床應(yīng)用血凝試劑的基本原理及臨床應(yīng)用 凝血功能的一些檢測手段常規(guī)篩選檢測(檢測凝血功能是否正常）PT凝血酶原時間測定。APTT活化部分凝血活酶時間測定。TT凝血酶時間測定。特殊物質(zhì)檢測（檢測引起凝

2、血功能異常的原因）纖維蛋白原測定纖維蛋白降解產(chǎn)物D二聚體凝血因子檢測發(fā)色底物測定（如蛋白C，蛋白S，等）2021-9-26 4血凝常規(guī)四項檢測血凝常規(guī)四項檢測 PT-凝血酶原時間測定 APTT-活化部分凝血活酶時間測定 TT-凝血酶時間測定 FBG-纖維蛋白原測定2021-9-26 5PTPT測定測定 PT試劑中主要含組織因子（TF）和ca離子，試劑中加入血漿后，TF和ca離子與血漿中因子，形成TFca離子復(fù)合物，啟動外源性凝血途徑； 最后使凝血酶原形成凝血酶，凝血酶可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白。 纖維蛋白的交聯(lián)，聚合成凝膠狀態(tài)； 血漿從流動狀態(tài)變成凝固狀態(tài)這個過程短時間內(nèi)完成，可用儀

3、器檢測。這段時間即為凝血酶原時間PT，一般以秒表示。2021-9-26 6PTPT檢測臨床應(yīng)用（檢測臨床應(yīng)用（2 2） 監(jiān)控口服抗凝藥病人的凝血功能監(jiān)控口服抗凝藥病人的凝血功能 口服抗凝藥治療時間比較長，治療過程需要監(jiān)控； 劑量增加或減少，會引起出血或凝血； 口服抗凝藥治療病人的治療劑量，治療時間由PT檢測決定，一般要控制在INR2.0-3.0之間。2021-9-26 7INRINR國際標(biāo)準(zhǔn)化比值國際標(biāo)準(zhǔn)化比值 INR（ 正常人血漿PT平均值每一實驗室取20個以上正常人血漿測得的PT秒數(shù)平均值。 不能用質(zhì)控血漿或參值作為正常人比血漿PT血漿PT平均值不準(zhǔn)確 ISI國際敏感指數(shù)2021-9-26

4、 8PTPT的的ISIISI值值 ISIISI國際敏感指數(shù)國際敏感指數(shù) ISI值是生產(chǎn)廠商生產(chǎn)的PT試劑與國際標(biāo)準(zhǔn)PT試劑測值相比的值，凡出廠的PT試劑必須標(biāo)明其正確的ISI值。 若ISI1則表示該試劑敏感度與國際標(biāo)準(zhǔn)試劑值一致 若ISI值越大，則表明該試劑越不敏感。2021-9-26 9各種ISI值的PT試劑ISI值試劑敏感度建議使用試劑ISI值1.0-1.2敏感如長島液體PT試劑太平洋PT試劑Dade Behring PT試劑ISI值1.2-1.4比較敏感如庫爾特PT試劑StagoPT試劑ISI值1.6以上不敏感不建議使用2021-9-26 10不同ISI值的PT試劑的INR計算舉例同一種

5、標(biāo)本，同一儀器，用不同ISI值試劑測定，INR值應(yīng)相同。 ISI值：1.02 在庫爾特儀器上正常人 平均值=11.8秒長島液體 PT 異常病人標(biāo)本測得PT值 試劑 39秒 病人 ISI值：1.36 在庫爾特儀器上正常人 ACL 平均PT值12秒庫爾特原裝 異常病人標(biāo)本測得PT值PT 29.8秒試劑 病人2021-9-26 11PST試劑ISI值正確標(biāo)識的重要性 國內(nèi)有些試劑生產(chǎn)廠商，生產(chǎn)的PT試劑試劑ISI值只有1.8左右，甚至2.0以上，但他們提供給客戶的ISI值卻是1.22。 舉例：國內(nèi)某公司生產(chǎn)的血凝試劑，正常人PT平均測值為12秒，測得口服抗凝藥病人血漿PT22秒，標(biāo)示的ISI值為1.

6、22，而實際ISI卻為1.8。 計算：INR（標(biāo)本值） INR（標(biāo)本值）PT結(jié)果不準(zhǔn)確，會導(dǎo)致異常的病人有可能被認(rèn)為正常；誤導(dǎo)口服抗凝藥病人用藥，嚴(yán)重的會引起出血。實際INR3.0應(yīng)減少用藥，但按標(biāo)識的ISI值計算結(jié)果永遠(yuǎn)3.0.2021-9-26 122021-9-26 13部分廠商提供不真實ISI值的原因原因：技術(shù)水平達(dá)不到生產(chǎn)ISI1.6 建議不予使用對枸櫞酸濃度不敏感（3.2%或3.8%）對凝血因子的敏感2021-9-26 16選擇PT試劑的要點（2）試劑的成分來源：重組組織因子（基因工程方法）最好如長島液體PT試劑、Dade Behring PT 試劑（Inovin)人胚胎組織：如D

7、ade Behring PT試劑新鮮兔腦粉：如庫爾特PT試劑、StagoPT試劑陳舊兔腦粉：大多數(shù)國產(chǎn)的PT凍干試劑（ISI1.6)開瓶后的穩(wěn)定性：長島液體PT試劑：開瓶后，37，穩(wěn)定30天以上。其他PT試劑：開瓶后，37 ,穩(wěn)定8小時。2021-9-26 17PT檢測的結(jié)果評估 美國CLIA-88提出PT指標(biāo)的允許誤差 有國際標(biāo)準(zhǔn)，以INR表示; 不同廠家根據(jù)自己的試劑給 出一個正常范圍，一般正常 范圍為：10.5-14.5秒； 同一個標(biāo)本用不同試劑，在同 一儀器上檢測，INR值應(yīng)相同。PT總允許誤（Tea）靶值15%精密度（CV)批內(nèi)變異2同一天批間變異3天間變異42021-9-26 18

8、APTT檢測臨床應(yīng)用（2）監(jiān)控靜脈滴注肝素抗凝治療的病人的凝血功能 臨床上對靜脈滴注肝素抗凝治療的病人必須進(jìn)行APTT檢測以便監(jiān)控。 APTT的值應(yīng)控制在1.5-2.5 x基礎(chǔ)秒數(shù) 基礎(chǔ)秒數(shù)-肝素治療前的APTT秒數(shù)； 不同的APTT試劑，對肝素敏感性不同，建議使用對肝素敏感的APTT白陶土試劑。2021-9-26 19國內(nèi)APTT白陶土試劑現(xiàn)狀國內(nèi)市場（除長島能提供液體型APTT白陶土試劑外）尚無穩(wěn)定的APTT白陶土試劑。長島液體型APTT白陶土優(yōu)勢： 對肝素敏感； 非常穩(wěn)定：常溫保存，穩(wěn)定30天以上； 技術(shù)國際領(lǐng)先。2021-9-26 20不同APTT試劑，對肝素敏感性不同2021-9-2

9、6 21選擇APTT試劑的要點 對肝素的敏感性，對肝素越敏感越好APTT白陶土首選； 對凝血因子的敏感性； 對LA抗凝物的敏感性 開瓶后的穩(wěn)定性 長島液體型APTT白陶土試劑：37，30天以上； 庫爾特APTT試劑： 37，3天左右； StagoAPTT試劑： 37， 3天左右。2021-9-26 22APTT檢測的結(jié)果評估美國CLIA-88提出APTT指標(biāo)的允許誤差 沒有國際標(biāo)準(zhǔn)； 生產(chǎn)廠家根據(jù)自己的試劑給 出一個正常范圍值； 各個廠家不同試劑的正常范 圍值均不相同； 評價時，應(yīng)以超過正常對照 的10秒視為異常。APTT總允許誤（Tea）靶值15% 精密度（CV）批內(nèi)變異3同一天批間變異3天

10、間變異0.995 開平后試劑的穩(wěn)定型： 長島液體Fib試劑：37，穩(wěn)定20天以上； 其他國產(chǎn)Fib凍干粉試劑：37 ，穩(wěn)定24小時。2021-9-26 32Fib檢測的注意點 盡量不用衍算法，不準(zhǔn)確； 標(biāo)本中纖維蛋白原含量如超出所用所用試劑的線性范圍，必須作適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M(jìn)行測定，不然對結(jié)果影響較大。 當(dāng)血漿中有肝素或纖維蛋白降解產(chǎn)物（FDP）時，會導(dǎo)致測值偏低。2021-9-26 332021-9-26 34Fib檢測的結(jié)果評估美國CLIA-88提出Fib指標(biāo)的允許誤差 為血凝四項檢測中的定量檢測； 有國際標(biāo)準(zhǔn)： WHO標(biāo)準(zhǔn)品98/612； 可追溯性 正常值范圍：2-4g/L； 美國臨床實驗

11、室改進(jìn)修正案 CLIA-88允許誤差范圍為20%。Fib總允許誤（Tea）靶值15% 精密度（CV）批內(nèi)變異2同一天批間變異3天間變異42021-9-26 35血凝試劑常見的問題 APTT、PT延長及縮短 TT延長 Fib含量過高及過低2021-9-26 36標(biāo)本的原因抗凝劑與血液比例不對，如大于1：9；抗凝劑配制錯誤，如枸櫞酸鈉含2個結(jié)晶水仍按3.8%配制；抗凝劑應(yīng)用枸櫞酸鈉溶液，不能用干燥品，或其他抗凝劑；抗凝劑與血漿混合時搖勻過于劇烈，使凝血因子被破壞；血細(xì)胞比容積大于55%，抗凝劑比例沒變（仍按1:9）；標(biāo)本陳舊，超過2小時甚至更長；口服抗凝藥或凝血因子異常；采血不順利，有郁滯現(xiàn)象；標(biāo)

12、本運輸未加蓋，致使CO2升高PH升高；血漿分離應(yīng)3000rpm，10分鐘；臨產(chǎn)婦FBG含量較高，可能會超過正常值；質(zhì)控標(biāo)本2-8超過8小時或失效;2021-9-26 372021-9-26 38復(fù)溶用蒸餾水及材料的原因 復(fù)溶蒸餾水質(zhì)量差； 未用塑料或硅化玻璃管； 實驗器材污染； 儀器本身有問題，如靈敏度不夠（儀器可用手工操作排除、或凝固終點不對（一般凝固終點在50%有時需根據(jù)試劑不同作相應(yīng)調(diào)整到30%甚至20%。2021-9-26 39試劑本身的原因 復(fù)溶后試劑反復(fù)使用。如整瓶復(fù)溶好的試劑放入預(yù)溫槽預(yù)溫，測試完成后，剩余放回冰箱。反復(fù)如此試劑在37的時間過長； 復(fù)溶后試劑使用時間過長； 試劑儲

13、存、運輸溫度過高，未注意冷藏運輸。中間公司未換冰袋； 試劑超過有效期； 購入冒牌試劑； 質(zhì)控品過期2021-9-26 40操作的原因 APTT、PT延長 APTT試劑與標(biāo)本預(yù)溫少于3分鐘，白陶土最好5分鐘； APTT（白）是混濁液，加前未混勻； 實驗測試溫度（標(biāo)本、試劑）未預(yù)溫至36.5-38的范圍； PT血漿與試劑比例不對； 試劑位誤攪拌功能的血凝儀（CA-500）APTT要用鞣化酸； 血凝儀能用半量的最好用半量否則試劑和血漿不易混勻； 槍頭和取液器之間要擰緊，不能有空隙。2021-9-26 41操作的原因（2） TT延長 血漿與試劑比例不對； 不同類別專用試劑參考正常值不同（DB專用為14

14、-21秒，太平洋為8秒-14秒）；可能出現(xiàn)對應(yīng)錯誤； 試劑不應(yīng)預(yù)溫而預(yù)溫時間較長。2021-9-26 42操作原因（3） Fib含量過高或過低 換新試劑或新批號試劑未重新定標(biāo)； 雖然重新定標(biāo)，但新定標(biāo)曲線未輸入儀器，原標(biāo)準(zhǔn)曲線未被修改。 定標(biāo)時，畫標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)濃度計算錯誤。2021-9-26 43Traceability（溯源性）的定義 定義：溯源性是測量結(jié)果或標(biāo)準(zhǔn)的值通過連續(xù)的比較鏈與一定的參考標(biāo)準(zhǔn)相聯(lián)系的屬性，參考標(biāo)準(zhǔn)通常是國家或國際標(biāo)準(zhǔn)，比較鏈中的每一步比較都有給定的不確定度。2021-9-26 44溯源性定量檢驗結(jié)果的描述 溯源性主要用于定量檢驗結(jié)果的描述，不適用于定性檢驗結(jié)果。

15、血凝四項中，只有Fib檢測是定量檢驗，所以Fib檢測具有溯源性。2021-9-26 45長島Fib檢測試劑的溯源性 以WHO國際標(biāo)準(zhǔn)品編號98/612的纖維蛋白原標(biāo)準(zhǔn)品為參考，我們對長島FIB試劑盒進(jìn)行準(zhǔn)確性研究實驗。連續(xù)三批小量生產(chǎn)FIB試劑盒（批號：020708、020805、0208260），每批隨機(jī)抽取一盒FIB試劑盒，利用CA-530血凝儀（日本Sysmex公司產(chǎn)品）測定WHO98/612纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的纖維蛋白原含量和，所得結(jié)果在WHO98/612纖維蛋白原標(biāo)定含量的10%范圍內(nèi)。2021-9-26 46對可追溯性理解的繆誤 部分人認(rèn)為進(jìn)口儀器一定要配原裝試劑，才具有可追溯性這其實

16、是錯誤的理解。 由于經(jīng)濟(jì)上或其他原因選擇不配套的試劑，認(rèn)為只要說明校準(zhǔn)品的來源，經(jīng)過實驗標(biāo)明該檢測系統(tǒng)的不精密度、不準(zhǔn)確度、病人結(jié)果可報告范圍、分析靈敏度、分析特異性、參考范圍，就具備溯源性。2021-9-26 472021-9-26 48長島血凝試劑 長島公司生產(chǎn)的各類血凝儀專用試劑所組成的新的檢測系統(tǒng)（原儀器、方法、檢測程序加上長島公司的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品），對原系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)，從而使病人樣本的檢測結(jié)果和原配套檢測系統(tǒng)的病人樣品結(jié)果具有可比性。2021-9-26 49長島血凝試劑特點 血凝四項（PT、APTT、TT、Fib）全套為液體試劑； 測值穩(wěn)定； PT試劑ISI值接近1.0; APTT白陶土

17、對肝素敏感； 能提供各類全自動血凝儀配套試劑。2021-9-26 50全套液體試劑長島血凝四項試劑，全部為液體試劑 液體試劑，無需復(fù)溶，避免了因復(fù)溶用水質(zhì)量不合格及復(fù)溶體積不準(zhǔn)確而造成的測定偏差； 液體試劑，開瓶即用，免去復(fù)溶步驟，使得檢測更為簡便。2021-9-26 51出眾的試劑穩(wěn)定性 長島血凝試劑，采用專利穩(wěn)定系統(tǒng)，擁有異常出眾的穩(wěn)定性。 長島液體PT試劑 37 30天以上 長島液體APTT試劑 37 30天以上 長島液體TT試劑 37 30天以上 長島Fib試劑 37 20天以上 試劑一經(jīng)開啟使用，無需再從試劑位拿出來放回冰箱， 直到用完，測值非常穩(wěn)定，使用極為簡單。2021-9-26

18、 52ISI值接近1.0的PT試劑 長島液體PT試劑，ISI值接近1.0； 長島PT試劑的成分來源為：重組組織因子（基因工程方法），技術(shù)國際領(lǐng)先。2021-9-26 53對肝素敏感的APTT白陶土試劑 長島液體APTT白陶土對肝素敏感； 國內(nèi)市場上唯一能提供穩(wěn)定的液體APTT白陶土試劑的生產(chǎn)廠商。2021-9-26 54各類全自動血凝儀配套試劑-日本東亞CA長島提供日本東亞CA血凝儀專用試劑性狀開瓶，復(fù)溶后的穩(wěn)定性 （37條件下)ISI值試劑成分來源長島PT試劑液體30天以上1.02重組組織因子原裝PT試劑凍干粉8小時1.04人胚胎組織性狀開瓶，復(fù)溶后的穩(wěn)定性（37條件下）長島APTT鞣化酸試

19、劑液體30天以上原裝APTT鞣化酸試劑液體30天左右長島TT試劑液體30天以上原裝TT試劑凍干粉3天左右長島Fib試劑液體20天以上原裝Fib試劑凍干粉3天左右2021-9-26 55各類全自動血凝儀配套試劑-美國庫爾特ACL長島提供美國庫爾特ACL血凝儀專用試劑性狀開瓶，復(fù)溶后的穩(wěn)定性（37條件下）ISI值試劑成分來源長島PT試劑液體30天以上1.02重組組織因子原裝PT試劑凍干粉8小時1.36兔腦粉性狀開瓶，復(fù)溶后的穩(wěn)定性（37 條件下)長島APTT白陶土試劑液體30天以上原裝APTT試劑凍干粉3天左右長島TT試劑液體30天以上原裝TT試劑凍干粉3天左右長島Fib試劑液體20天以上原裝Fi

20、b試劑凍干粉3天左右2021-9-26 56各類全自動血凝儀配套試劑-德國BE長島提供德國BE血凝儀專用試劑性狀開瓶，復(fù)溶后的穩(wěn)定性（37條件下）ISI值試劑成分來源長島PT試劑液體30天以上1.02重組組織因子原裝PT試劑凍干粉8小時1.1兔腦粉性狀開瓶，復(fù)溶后的穩(wěn)定性（ 37條件下）長島APTT白陶土/鞣化酸試劑液體30天以上原裝APTT試劑凍干粉3天左右長島TT試劑液體30天以上原裝TT試劑凍干粉3天左右長島Fib試劑液體20天以上原裝Fib試劑凍干粉3天左右2021-9-26 57各類全自動血凝儀配套試劑-法國思達(dá)高STA長島提供法國思達(dá)高STAGO血凝儀專用試劑性狀開瓶，復(fù)溶后的穩(wěn)定

21、型 （37條件下）ISI值試劑成分來源長島PT試劑液體30天以上1.02重組組織因子原裝PT試劑凍干粉8小時1.32兔腦粉性狀開瓶，復(fù)溶后的穩(wěn)定性（ 37條件下）長島APTT白陶土試劑液體30天以上原裝APTT試劑凍干粉3天左右長島TT試劑液體30天以上原裝TT試劑凍干粉3天左右長島Fib試劑液體20天以上原裝試劑凍干粉3天左右2021-9-26 58血凝儀介紹分類（1） 按自動化程度分類 半自動血凝儀一般用于血凝四項的常規(guī)測定。其一般構(gòu)成是：樣品試劑預(yù)溫槽、加樣器、檢測系統(tǒng)（光學(xué)，電磁）、微機(jī)系統(tǒng)。一般是手工加樣試劑。 全自動血凝儀基本配置是主機(jī)（樣品傳送及處理裝置，試劑冷藏位，樣品及試劑分

22、配系統(tǒng)，檢測系統(tǒng)），電子計算機(jī)，輸出設(shè)備及附件。無需人工加樣。 按血凝儀的檢測原理分類 磁珠法（粘度法） 光學(xué)發(fā)光學(xué)法靈敏度高，重復(fù)性好，而且易于自動化，目前市場銷售的大部分血凝儀采用此原理。2021-9-26 59血凝儀介紹分類磁珠法（粘度法）：采用電磁感應(yīng)原理，在待測血漿中放入磁珠，在電磁場的作用下，磁珠會轉(zhuǎn)動。當(dāng)血漿中形成凝塊后，由于阻力，磁珠轉(zhuǎn)動發(fā)生變化，檢測此變化即能確定凝固終點。此法具備精度高，可防止高血脂的影響的優(yōu)點，但易受血漿粘度的影響。光學(xué)法透射比濁法：運用樣本吸光度的變化判斷凝固終點具體有兩種：吸光度增加為終點。吸光度降低為終點。散射比濁法：檢測原理與透射法基本相同，只是運用樣本散射光密度改變判斷凝固終點。2021-9-26 60各類血凝儀的原理及特點主要進(jìn)口血凝儀名稱原理所用試劑血凝儀主要特點東亞系列半自動CA50CA100散射比濁百分比凝固時間檢測DADE試劑APTT（僅用鞣化酸APTT）TT（血漿：試劑為1:2）四個通道四條檢測光路CA100Fib只能兩點定標(biāo)（較老的CA儀器）全自動CA500CA530CA1500CA7000CA6000同上同上顯示屏為觸摸式Fib衍算或單獨測均可BE系列半自動光電磁珠法光密度由大變小Biopool試劑TT（