3P5制劑的質量控制(一)

1、目錄3.2. P.5制劑的質量控制 33.2. P.5.1質量標準33.2. P.5.2分析方法43.2. P.5.2.1 性狀43.2. P.5.2.2 鑒另U 43.2. P.5.2.3 檢查43.2. P.5.2.4 含量測定103.2. P.5.3分析方法的驗證113.2. P.5.3.1分析方法學驗證用樣品 113.2. P.5.3.2有關物質方法學驗證 113.2. P.5.3.3吡啶-3-磺酸方法學驗證 213.2. P.5.3.4含量測定方法學驗證 283.2. P.5.3.5溶出度測定方法學驗證 333.2. P.5.3.6微生物限度檢查方法學驗證 463.2. P.5.4批

2、檢驗報告463.2. P.5.5 雜質463.2. P.5.5.1雜質情況分析463.2. P.5.5.2雜質制定依據(jù)473.2 .P .5.6質量標準制定依據(jù) 483.2. P.5.6.1 質量標準483.2. P.5.6.2質量標準制定依據(jù)及產(chǎn)品檢測結果 523.2. P.5制劑的質量控制3.2. P.5.1質量標準檢驗項目方法放行標準限度貨架期標準限度性狀感觀本品為溥膜衣片，除去包衣 后顯白色或類白色本品為溥膜衣片，除去包衣 后顯白色或類白色鑒別HPLC法（中國藥典 2010 年版二部附錄V D）供試品溶液中沃諾拉贊峰 保留時間應與對照品溶液 中沃諾拉贊峰保留時間一 致供試品溶液中沃諾拉

3、贊峰 保留時間應與對照品溶液 中沃諾拉贊峰保留時間一 致有關物質HPLC法（中國藥典 2010 年版二部附錄V D）雜質I :不得過0.4%、 雜質n :不得過0.4%、 雜質川：不得過0.4%、 雜質IV :不得過0.4%、 雜質V :不得過0.4%、 雜質W :不得過0.4%、 其他單雜：不得過 0.4%、 其他總雜：不得過1.5%雜質I :不得過0.5%、 雜質n :不得過0.5%、 雜質川：不得過0.5%、 雜質V :不得過0.5%、 雜質V :不得過0.5%、 雜質W :不得過0.5%、 其他單雜：不得過 0.5%、 其他總雜：不得過 2.0%吡啶-3-磺酸HPLC法（中國藥典 20

4、10 年版二部附錄V D）不得過0.4%不得過0.5%含量均勻度含量均勻度檢查法（中國藥 典2010年版二部附錄X E）應符合規(guī)定應符合規(guī)定溶出度溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄X C第 二法）為0%初5%微生物限度微生物限度檢查法（中國藥 典2010年版二部附錄幻 J）細菌數(shù)不得過1000cfu/g ; 霉菌和酵母菌數(shù)不得過 100cfu/g ;大腸埃希菌不得 檢出/g細菌數(shù)不得過 1000cfu/g ; 霉菌和酵母菌數(shù)不得過 100cfu/g ;大腸埃希菌不得 檢出/g含量HPLC法（中國藥典 2010 年版二部附錄V D）含(C17H16FN3SO2)應為標示量的 93.0%1

5、07.0%含(C17H16FN3SO2)應為標示量的 90.0%110.0%3.2.P.5.2分析方法3.2. P.5.2.1 性狀檢查方法：感觀具體試驗操作：取本品，觀察其外觀性狀。限度：本品應為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色。3.2. P.5.2.2 鑒別檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m/ 4.6mm）、電子 分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。色譜條件：流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調 pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：

6、1.0ml/min溶劑：流動相檢測器：紫外檢測器波長：230nm色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250mrX 4.6mm）具體試驗操作：在含量測定項下記錄的色譜圖中，比較供試品溶液中沃諾拉贊峰與 對照品溶液中沃諾拉贊峰的保留時間。限度：供試品溶液中沃諾拉贊峰與對照品溶液中沃諾拉贊峰保留時間應一致。3.2. P.5.2.3 檢查3.2. P.5.2.3.1 有關物質檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典 2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m/ 4.6mm）、電子 分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、

7、水。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m/ 4.6mm）;紫外檢測器（檢測波長為230nm）;流動相：0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調節(jié) pH值至7.2 ）-甲醇（52： 48）為流動相A，甲醇為流動相B，按下表梯度進行洗脫；溶劑：流動相A ；流速：1.0ml/min。梯度如下表：時間（分鐘）流動相A （ %）流動相B （ %）01000231000452080501000601000具體試驗操作：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg）,精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相 A稀釋至刻度，搖勻，濾過， 取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密

8、量取適量，加流動相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾 拉贊2.5 的溶液，作為對照溶液。分別取雜質I、U、M、W、V、切工作對照品各 適量，精密稱定，加流動相 A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質均約為2.5 g的溶液， 作為雜質對照品溶液。取富馬酸沃諾拉贊工作對照品及雜質工作對照品各適量，加流動 相A溶解并稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg及各雜質均為2.5測的混合溶液，作 為系統(tǒng)適用性溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以 0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調節(jié) pH值 至7.2）-甲醇（52： 48）為流動相A，甲醇

9、為流動相B,按上表梯度進行洗脫，檢測波 長為230nm。取系統(tǒng)適用性溶液201注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質川、I、沃 諾拉贊、U、W、V、W依次出峰，理論板數(shù)按沃諾拉贊峰計算應不低于5000,且沃諾拉贊峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。精密量取供試品溶液、對照溶液與雜質對照 品溶液各20卩，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖計算公式：已知雜質I、U、M、已知雜質Ax漢Wx汽Px漢V漢平均片重% x x x 100 %As漢W漢Vx漢標示量（Ax為供試品溶液中已知雜質的峰面積， As為對照品溶液中已知雜質的峰面積，Wx為已知雜質工作對照品的稱樣量，Px為已知雜質工作對照品含量， V為已知雜質對照

10、品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積， W為供試品的稱樣量）其他單藐二厶 0.5%At（Ai為供試品溶液中其他單個未知雜質的峰面積，At為對照溶液主峰面積）其他總雜八總- A丁 0.5%（A總為供試品溶液中所有峰的峰面積和,A主為供試品溶液中沃諾拉贊的峰面積,a Ax為供試品溶液中已知雜質的峰面積之和,At為對照溶液中沃諾拉贊的峰面積）限度：供試品溶液色譜圖中如顯雜質峰（溶劑峰及富馬酸峰除外），雜質I、U、按外標法以峰面積計算，不得大于標示量的0.5%;其他單個未知雜質峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（0.5%）;其他雜質峰面積的和不得大于對照溶液 的主峰面積的4倍（2.0%）。3.2.

11、 P.5.2.3.2 吡啶-3-磺酸檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典 2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250mr 4.6mm）、電子 分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、磷酸、甲醇、水。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250mrH 4.6mm）;紫外檢測器（檢測波長為261 nm）;流動相：0.01mol/L的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節(jié)pH值至3.0）為流動 相A，甲醇為流動相B，按下表梯度進行洗脫；溶劑：流動相A;流速：1.0ml/min。梯度如下表:時間（分鐘）流動相A （ %）流動相B （%）0100

12、0710007.11090910909.11000201000具體試驗操作：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相 A稀釋至刻度，搖勻，濾過， 取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取雜質工作對照品適量，精密稱定，加流動相A溶解并 稀釋制成每1ml中約含吡啶-3-磺酸2.5 的溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以0.05mol/L 的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節(jié) pH值至3.0）為流動相A，甲醇為流動相B,按上表梯 度進行洗脫，檢測波長為261 nm。取對照

13、品溶液、供試品溶液各 20注入液相色譜儀， 記錄色譜圖，計算公式：“亠”寸厶A 匯W P 小心平均片重吡啶 -3 -磺酸 = W匕 V 均 100 %As漢W漢Vx漢標示量（Ax為供試品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面積，As為對照品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面積, Wx為雜質工作對照品的稱樣量，Px為雜質工作對照品含量，Vx為吡啶-3-磺酸對照 品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積， W為供試品的稱樣量）限度：供試品溶液色譜圖中如顯與對照品溶液相對應的雜質峰，按外標法以峰面積 計算不得大于標示量的0.5%。3.2. P.5.2.3.3 溶出度檢查方法：溶出度測定法（中國藥典 2010年版二部附

14、錄X C第二法）高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）儀器與用具：溶出儀、溫度計、高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5 m 250mrH 4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯， PH計。試液與試藥：鹽酸、磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5 m 250mrH4.6mm）;紫外檢測器（檢測波長為230nm）; 流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調pH值至7.2）-甲醇（52:48）;溶劑：pH1.0鹽酸溶液；流速：1.0ml/min。具體試驗操作：取本品，照溶出度測定法（中國藥典 2010年版二部附錄X C第二 法），以pH1.

15、0鹽酸溶液900ml為溶出介質，轉速為每分鐘50轉，依法操作，經(jīng)30分 鐘時，取溶液適量濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質定量稀釋成每 1ml中約含沃諾拉贊11的溶液，作為供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量，用溶出 介質溶解并定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊11舊的溶液，作為對照品溶液，精密 量取供試品溶液與對照品溶液各 20卩，照含量測定項下的色譜條件測定， 計算每片的溶出量計算公式：溶出量共M對丁對.7485血100%A寸匯V對漢X（A供為供試品溶液的主峰面積；A對為對照品溶液主峰面積；M對為對照品的稱樣 量，mg； T對為對照品的含量；V對為對照品溶液的稀釋體積；V供為供試

16、品溶液的稀釋 體積；X為標示量，10mg或20mg）限度：不得低于標示量的85%。3.2. P.5.2.3.4含量均勻度檢查方法：含量均勻度檢查法（中國藥典 2010年版二部附錄X E） 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m250mm 4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯， PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m 4.6mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）;流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調pH值至7.2）-甲醇（52:48）；溶劑

17、：流動相；流速：1.0ml/min。具體試驗操作:供試品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg規(guī)格）或200ml量瓶（20mg規(guī)格）中, 加流動相適量，振搖，使充分溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾 液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量（約相當于沃諾拉贊 10mg），精密 稱定，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml，置50ml量瓶 中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取供試品溶液和對照品溶液各 20卩，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按10片中沃諾拉贊的含量外標法以峰面

18、積分別計算每片中沃諾拉贊的含量。依法測定計算公式：含量（%）=W對 P寸0.7485 A樣V樣A對V對標示量100%（W對分別為對照品的稱樣量，mg； P對為對照品的含量；A樣、A對分別為供試品、 對照品溶液中沃諾拉贊的峰面積；V樣、V對分別為供試品溶液、對照品溶液的稀釋體積）分別測定每片以標示量為100的相對含量X，求其均值X和標準差S以及標示量與均值之差的絕對值A :如A 1.80115.0，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若A S 15.0，則不符合規(guī)定；若A 1.80S 15.0，且A 115.0，則應另取20支復試，根據(jù)初、復試結果，計算30支的均值X、標準差S和標示量與均值之差的絕對

19、值 A :如A 1.45115.0，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若 A 1.45S 15.0，貝U不符合規(guī)定其中: X -Xn -1，A=100-X限度：應符合規(guī)定。3.2. P.5.2.3.5微生物限度1. 試液及培養(yǎng)基：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.9%氯化鈉溶液。2. 儀器與用具：智能生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電動吸引器、薄膜過濾器等。3. 具體試驗操作：用平皿法，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄幻J）o（1）細菌、霉菌及酵母菌：供試品配制：按中國藥典（2010年版二部）微生物限度檢查法（附錄X

20、I J）的規(guī)定, 稱取供試品10g，加pH 7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，靜置10min， 取上部澄清液體作為1： 10供試液，備用。直接接種法：取1:10供試品每皿1.0ml，分別加入1ml約含50100cfu/m15株試驗 菌。立即傾注瓊脂培養(yǎng)基1520ml，每株菌平行制備2個平皿，待凝固后置規(guī)定溫度 培養(yǎng)35天觀察結果，測定其菌數(shù)。菌液組測定試驗所加入試驗菌的菌數(shù)。供試品對照組：取1:10供試液1ml，按試驗組供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。（2）控制菌的檢查法大腸埃希菌：試驗組取1： 10供試液10ml，分別加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培 養(yǎng)基中，

21、加入10100cfu/ml試驗菌，35-37E培養(yǎng)18-24h;取培養(yǎng)液0.2ml，接種至 5mlMUG培養(yǎng)管內，培養(yǎng)5h與24h時，置紫外燈366nm處觀察，然后沿培養(yǎng)基管壁加 入數(shù)滴靛基質試液。陰性菌對照組：取1: 10供試液10ml，分別加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基 中，加入10100cfu/ml的金黃色葡萄球菌，同試驗組方法進行試驗。于5、24h在366nm紫外光下觀察，同時用未接種的 MUG培養(yǎng)基作本底對照。在 紫外光下若管內培養(yǎng)物呈現(xiàn)藍白色熒光，為MUG陽性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀察后，沿培養(yǎng)管的管壁加人數(shù)滴靛基質試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質陽性；呈 試劑本色

22、，為靛基質陰性。本底對照的 MUG和靛基質試驗應為陰性。如 MUG陽性、 靛基質陽性，判檢出大腸埃希菌；如 MUG陰性、靛基質陰性，判未檢出大腸埃希菌。限度：細菌數(shù)不得過1000cfu/g ;霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g;大腸埃希菌不 得檢出/g3.2. P.5.2.4含量測定檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m250mm 4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯、 PH計。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。色譜條件：流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調 pH值至7.2）-甲醇

23、（52:48）流速：1.0ml/min檢測器：紫外檢測器波長：230nm 溶劑：流動相色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m 4.6mm）具體試驗操作：取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于沃諾拉 贊10mg），置100ml量瓶中，加流動相適量，振搖，使充分溶解，用流動相稀釋至刻 度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液 5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻， 作為供試品溶液。精密量取20H注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取富馬酸沃諾拉贊 工作對照品適量，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。計算公式：含量（）=A樣 M對 T對 0.7485 V樣 M100%（A樣為供試

24、品溶液中主峰的面積；A對為對照品溶液中主峰的面積；M對為對照品 的稱樣量，mg； M樣為供試品的稱樣量，mg； T對為對照品的含量；V對為對照品溶液的 稀釋體積；V樣為供試品溶液的稀釋體積；M為平均片重，mg； X為標示量，10或20mg） 限度：應為標示量的90%110%。3.2. P.5.3分析方法的驗證按照化學藥物質量控制分析方法驗證技術指導原則、化學藥物質量標準建立 的規(guī)范化過程技術指導原則、化學藥物雜質研究技術指導原則等以及中國藥典 2010年版二部附錄中有關的指導原則提供以下方法學驗證資料。3.2. P.5.3.1分析方法學驗證用樣品批號規(guī)格批量（片）試制日期試制地點XA00910

25、mg1552015.1.30山東富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司XS15030110mg36402015.3.72015030110mg364802015.3.14 2015.3.152015030210mg361602015.3.16 2015.3.172015030310mg368402015.3.17 2015.3.18XB00120mg1452015.2.28XS15030220mg18002015.3.8 2015.3.92015030420mg184602015.3.18 2015.3.192015030520mg185202015.3.19 2015.3.202015030620mg1856

26、02015.3.20 2015.3.213.2. P.5.3.2有關物質方法學驗證3.2. P.5.3.2.1有關物質檢查方法學驗證總結試驗項目驗證結果條件選擇C18柱，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液 （用三乙胺調節(jié) pH值至7.2）-甲醇（52:48） 為流動相A，甲醇為流動相 B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為230nm。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質與相鄰雜質分離良好，理論板數(shù)符合要求。專屬性酸、堿、高溫、氧化、光照降解雜質均與主峰分離良好，各已知雜質與相鄰峰分離良 好，主峰及各已知雜質峰純度均合格；輔料及其降解產(chǎn)物和梯度峰不干擾本品有關物 質的測定。檢測限沃諾拉贊檢測限為 0

27、.18ng ;雜質I的檢測限為 0.18ng ;雜質n的檢測限為 0.18ng ； 雜質川的檢測限為 0.17ng ;雜質W的檢測限為 0.18ng ;雜質V的檢測限為 0.17ng ； 雜質W的檢測限為 60ng。定量限沃諾拉贊定量限為0.60ng ;雜質I的定量限為0.59ng ;雜質n的定量限為 0.59ng ；雜質川的定量限為 0.57ng ;雜質W的定量限為0.61 ng ;雜質V的定量限為 0.55ng ;雜質W的定量限為 2.00 ng。線性富馬酸沃諾拉贊在 0.0992.962用/ml線性良好，相關系數(shù)R2=0.9999雜質I在0.0992.962 馮/ml線性良好，相關系數(shù)R

28、2=0.9995雜質H在0.0982.943 馮/ml線性良好，相關系數(shù)R2=0.9999雜質川在0.0942.831 馮/ml線性良好，相關系數(shù)R2=0.9999雜質在0.1023.061 馮/ml線性良好，相關系數(shù)R2=0.9999雜質V在0.0922.752 馮/ml線性良好，相關系數(shù)R2=0.9994雜質W在0.13.0（g/ml線性良好，相關系數(shù)R2=0.9997準確度雜質I回收率在 98.16%100.46%范圍內，準確度良好，RSD=0.72%雜質H回收率在 98.46%100.69%范圍內，準確度良好，RSD=0.73%雜質川回收率在 98.22%99.62%范圍內，準確度良好

29、，RSD=0.44%雜質回收率在 98.49%100.98%范圍內，準確度良好，RSD=0.82%雜質V回收率在 98.26%100.17%范圍內，準確度良好，RSD=0.70%雜質W回收率在 98.07%100.24%范圍內，準確度良好，RSD=0.79%精密度重復性試驗：測得雜質I含量RSD-1.74%，雜質H含量 RSD-2.08%，雜質川含量 RSD-1.91%，雜質W含量 RSD-1.86%，測得雜質V含量 RSD=2.19%，雜質W含量 RSD=1.61%，其他單雜含量 RSD=5.83%，其他總雜含量 RSD=5.19%。 中間精密度試驗：測得雜質I含量RSD-1.42%，雜質H

30、含量 RSD-1.49%，雜質川含量 RSD-2.23%，雜質W含量 RSD-1.40%，測得雜質V含量 RSD=1.63%， 雜質W含量 RSD=1.32%，其他單雜含量 RSD=5.18%，其他總雜含量 RSD=5.40%。溶液穩(wěn)定性供試品溶液、對照溶液、雜質對照品溶液室溫放置12小時內溶液穩(wěn)定性良好。耐用性采用不冋色譜柱，不冋的流動相比例、pH、鹽濃度等檢查本品的有關物質，各已知雜質的分離度均符合要求。各已知雜質測的含量的RSD均小于10%。3.2.P.5.3.2.2有關物質檢查方法學驗證內容1儀器設備島津LC-20AT高效液相色譜儀、島津 SPD-M20A二極管陣列檢測器島津LC-20

31、AT高效液相色譜儀、島津 SPD-M20A紫外檢測器2、色譜條件選擇及溶液配制2.1色譜條件選擇 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑， 以0.05mol/L的磷酸 二氫鉀溶液（用三乙胺調節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52:48）為流動相A，甲醇為流動相B， 進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為 230nm；流速為1.0ml/min。梯度表如下：時間（分鐘）流動相A （%）流動相B （%）010002310004520805010006010002.2溶液配制供試品溶液：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg）,精密稱定，置 50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相 A稀釋至刻

32、度，搖勻，濾過， 取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照溶液：精密量取供試品溶液適量，加流動相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾 拉贊2.5 yg勺溶液，作為對照溶液。分別取雜質I、U、M、W、V、切工作對照品各適量，精密稱定，加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質均約為2.5卩宙勺溶液，作為雜質對照品溶液。系統(tǒng)適用性溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對照品及雜質工作對照品各適量，加流動 相A溶解并稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg及各雜質均為2.5卩的混合溶液，作 為系統(tǒng)適用性溶液。3、破壞性試驗破壞試驗溶液的配制與處理:溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白輔料 101.23mg 20ml無降解處理未破壞

33、原料 13.43mg+輔料 103.61mg 20ml無降解處理高溫破壞原料 13.51mg+輔料 101.77mg 20ml水浴100C加熱13小時高溫空白輔料 101.82mg 20ml水浴100C加熱13小時光照破壞原料 13.44mg+輔料 105.01mg 20ml光照箱4500LX照射45小時光照空白輔料 103.66mg 20ml光照箱4500LX照射45小時酸破壞原料 13.39mg+輔料 102.57mg 20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時酸空白輔料 100.94mg 20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時堿破壞原料 13.42mg+輔料 100.85

34、mg 20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時堿空白輔料 104.05mg 20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時氧化破壞原料 13.25mg+輔料 104.44mg 20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時氧化空白輔料 103.38mg 20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時取上述溶液各20分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見表3.2.P.5.3.2-1（圖3.2.P.5.3.2-113,制劑的質量控制一第 6577頁）表3.2.P.5.3.2-1富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查破壞試驗結果名稱沃諾拉贊總峰面積主峰面積/%物料平衡/%分離度峰純度未破壞4.770

35、合格2246747099.924100高溫破壞1.652合格2234047196.52098.85光照破壞1.678合格2234663197.64699.39酸破壞2.189合格2161695791.01296.50堿破壞2.236合格2119482394.78794.41氧化破壞4.642合格2164593189.30997.65計算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/ （破壞前總峰面積/濃度）結論：溶劑及輔料均不干擾本品的測定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質峰的分離度 符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測定本品有關物質的 專屬性良好。4、定量限試驗 同原料藥，詳

36、見3.2.S.4.32表3.2.P.5.3.2-2富馬酸沃諾拉贊及已知相關雜質定量限試驗結果名稱峰面積平均RSD%定量限/ng123456雜質川15901462154616621653179016176.940.57雜質I24262707269527072996235926488.660.59沃諾拉贊30593252310030473340320331673.710.60雜質n4510510851094607468256914951.178.950.59雜質W2579284424362198258523442497.678.980.61雜質V40124711440943074079446043

37、29.675.960.55雜質w6520646367526003668764966486.834.062.00結論：此法靈敏度較高，在限度范圍內可用于富馬酸沃諾拉贊及已知雜質定量檢查。5、檢測限試驗 同原料藥，詳見3.2.S.4.32表3.2.P.5.3.2-3富馬酸沃諾拉贊及已知相關雜質檢測限試驗結果名稱雜質川雜質I沃諾拉贊雜質n雜質W雜質V雜質WC檢測限ng/ml8.498.898.958.839.188.2630.00檢測限/ng0.170.180.180.180.180.170.60結論：此法靈敏度較高，可有效檢出富馬酸沃諾拉贊及已知雜質6、線性關系試驗同原料藥，詳見3.2.S.4.3

38、2表3.2.P.5.3.2-4富馬酸沃諾拉贊及已知相關雜質線性試驗結果名稱濃度范圍（pg/ml）線性方程R2沃諾拉贊0.099 2.962A=93720C-842.280.9999雜質I0.099 2.962A=94476C-11530.9995雜質n0.098 2.943A=115542C-2715.90.9999雜質川0.094 2.831A=63504C-14470.9999雜質W0.102 3.061A=90488C-1954.70.9999雜質V0.092 2.752A=70947C-3387.40.9994雜質W0.1 3.0A=100700C-5469.80.99977、精密度試

39、驗7.1重復性試驗取本品（批號：XS150301,規(guī)格：10mg） 100片，精密稱定其重量，求得平均片重為115.23mg。將上述100片樣品置于研缽中研細，混勻，作為供試品粉末。分別取雜質I、U、M、W、V、切工作對照品各適量，精密稱定，加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質均約為2.5yg的溶液，作為雜質對照品溶液。取供試品粉末約11.5g，取雜質I、U工作對照品各約 7.0mg，雜質川工作對照品 約8.0mg,雜質W工作對照品各約 5.0mg，雜質V工作對照品各約 5.3mg，雜質切工作 對照品約6.0mg，混合均勻，作為供試品。取供試品適量，加流動相A充分溶解，再加流動相A稀釋制

40、成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試 品溶液；精密量取供試品溶液適量，加流動相A稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5yg 的溶液，作為對照溶液。分別精密量取 20卩，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法 計算各已知雜質的含量；未知單雜以自身對照法計算其含量。重復測定6次，考察精密度。試驗結果見表3.2.P.5.3.2-5 （圖3.2.P.5.3.2-14-31,制劑的質量控制一第 7895頁）表3.2.P.5.3.2-5富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查重復性試驗結果序號123456平均值RSD%雜質1( %)0.5010.5060.507P 0.4960.511 10.

41、4870.5011.74雜質n（ %）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5012.08雜質川（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5081.91雜質w（ %）:0.5080.4990.498P 0.4900.4870.4830.494r 1.86雜質V( %)0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5002.19雜質W（ %）0.5030.5060.490P 0.4850.497 10.5000.497r 1.61其他單雜（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.83其他

42、總雜（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.19結論：試驗結果表明，此法重復性良好。7.2中間精密度試驗取重復性項下供試品，由不同試驗人員分別在不同日期、不同儀器檢查其有關物質，試驗結果見表3.2.P.5.3.2-6 （圖3.2.P.5.3.2-3249制劑的質量控制一第96113頁）表3.2.P.5.3.2-6富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查中間精密度試驗結果序號123456平均值RSD%雜質1( %)0.50廠0.5060.507P 0.496 :0.5110.4870.5011.420.4910.5040.5080.5030.4980.502雜質n（

43、%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5031.490.5030.5070.5050.5020.5080.503雜質川（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5002.230.484 :0.4940.493P 0.4890.5060.493雜質w（ %）0.5080.4990.4980.4900.4870.4830.4951.400.490 :0.4970.490P 0.499 10.5000.498雜質v（ %）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5001.630.5020.4930.496P 0.496

44、 10.5050.505雜質w（ %）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4961.320.4880.5020.4960.4910.5010.496其他單雜（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.180.0200.0210.0200.0220.0190.021其他總雜（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.400.0260.0290.0280.0310.0270.029結論：此法檢查本品的有關物質中間精密度良好。8、溶液穩(wěn)定性試驗供試品溶液：取本品適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱

45、定，置50ml量瓶中， 加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相 A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液作為供試品溶液。對照溶液：精密量取供試品溶液適量，加流動相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾 拉贊2.5 yg勺溶液，作為對照溶液。分別取雜質I、U、M、W、V、切工作對照品各適量，精密稱定，加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質均約為2.5yg的溶液，作為雜質對照品溶液。將上述各溶液于室溫下放置12小時，分別于0、3、& 9、12小時，精密量取20 yl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積考察溶液穩(wěn)定性，結果見表3.2.P.5.3.2-79。（圖3.2.P.5.3.2-5064制劑的質

46、量控制一第 114128頁）表3.2.P.532-7富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查溶液穩(wěn)定性試驗結果（供試品溶液）名稱/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%未知雜質14059370138863998428239855.39雜質I100409532987895141047598884.03沃諾拉贊:4354665143546049434730264344392443434101434887500.13雜質n2144421347218122210223923221264.74未知雜質28351823676549349957886349.34表3.2.P.5.3.2-8富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查

47、溶液穩(wěn)定性試驗結果（對照溶液）名稱/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%沃諾拉贊2235192245612241462242572242102241390.17表3.2.P.5.3.2-9富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查溶液穩(wěn)定性試驗結果（雜質對照品溶液）峰面積/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%雜質I2323312324032327992325382300542320250.48雜質n2505242507642511062512642501232507560.18雜質川1546791543441533191536441542831540540.36雜質w :222815 :222039

48、224030223597P 222471222990 10.37 :雜質V1943491906411885701852351807211879032.77雜質W2448022465392502332468582375312451931.92結論：供試品溶液、對照溶液、雜質對照品溶液12h內穩(wěn)定性良好。9、準確性試驗雜質對照品溶液：分別取雜質1（含量 73.14%）、U（含量72.46%）、川（含量 62.67%）、W（含量99.44%）、V （含量94.37%）、切（含量84.59%）工作對照品各 適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成每 1ml中含各雜質均約為2.5 yg勺溶液，作為 雜質對照

49、品溶液。供試品溶液：取20140701批原料適量（約相當于沃諾拉贊 25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;按外標法計算各已知雜質的百分含量表3.2.P.5.3.2-10富馬酸沃諾拉贊各已知雜質的測定結果名稱雜質I雜質n雜質川雜質W雜質V雜質W測得含量%0.0150.031未檢出未檢出未檢出未檢出回收率溶液:1）取雜質I、U工作對照品各約 11.0mg,雜質川工作對照品約12.8mg,雜質W工 作對照品各約8.0mg，雜質V工作對照品各約8.5mg，雜質切工作對照品約9.5mg，精 密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至

50、刻度，搖勻；精密量取 1ml，置 20ml量瓶中，取原料約13.36mg,精密稱定，置同一 20ml量瓶中，按處方比例加入輔 料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（80%濃度）溶液。同法配制3 份。2）取雜質I、U工作對照品各約 13.7mg,雜質川工作對照品約16.0mg,雜質W工 作對照品各約10.0mg,雜質V工作對照品各約10.6mg,雜質切工作對照品約11.8mg, 精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取 1ml，置 20ml量瓶中，取原料約13.36mg,精密稱定，置同一 20ml量瓶中，按處方比例加入輔 料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（100%濃度）溶液。同法配制 3份。3）取雜質I、U工作對照品各約 16.5mg,雜質川工作對照品約19.1mg,雜質W工 作對照品各約12.0mg，雜質V工作對照品各約12.7mg,雜質切工作對照品約14.2mg, 精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相