大賽璐手性分析方法篩選與優(yōu)化ppt課件

1、業(yè)界之最業(yè)界之最享譽(yù)全球享譽(yù)全球液液- -液萃取法液萃取法生物催化法生物催化法不對(duì)稱合成法不對(duì)稱合成法膜分別法膜分別法傳感器法傳感器法結(jié)晶法結(jié)晶法毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳色譜法色譜法手性分別方法手性分別方法超臨界超臨界 (SFC) (SFC) 氣相色譜氣相色譜GCGC 薄層色譜薄層色譜TLCTLC 逆流色譜逆流色譜CCCCCC 模擬挪動(dòng)床模擬挪動(dòng)床 (SMB) (SMB) 高效液相色譜高效液相色譜HPLCHPLC 色譜法色譜法方法方法精度精度闡明闡明旋光法旋光法低 (5%) 非對(duì)映體異構(gòu)體法非對(duì)映體異構(gòu)體法高 (0.1%)幾十毫克.中等 (2%)幾毫克需求位移試劑.色譜法色譜法高高 (0.1%)

2、(0.1%)微克微克- -毫克毫克HPLCHPLC、 、GCGC、 、SFCSFC對(duì)映體純度測(cè)定方法及其比較對(duì)映體純度測(cè)定方法及其比較幾十毫克樣品用量樣品用量需求其它的手性化合物來制備非對(duì)映體需求真實(shí)樣品手性色譜固定相法根本原理手性色譜固定相法根本原理 操作簡(jiǎn)單 不需求預(yù)處置 準(zhǔn)確度高R RR R對(duì)映體分別對(duì)映體分別表示圖表示圖S SS SS SS SS SS SS SS SS SS SR,S R,S 消旋體消旋體(racemate)(racemate)手性選擇劑手性選擇劑R RS SR RR RR RR RR RR RR RR R引入手性環(huán)境引入手性環(huán)境是實(shí)現(xiàn)手性分是實(shí)現(xiàn)手性分別的前提別的前

3、提Daicel手性色譜柱一覽表手性色譜柱一覽表正相正相直鏈淀粉衍生物直鏈淀粉衍生物 CHIRALPAK AD / AD-H/AD-3 CHIRALPAK AS / AS-H/AS-3 CHIRALPAK AY-H/AY-3 CHIRALPAK AZ-H/AZ-3纖維素衍生物纖維素衍生物 CHIRALCEL OD / OD-H/OD-3 CHIRALCEL OJ / OJ H/OJ-3 CHIRALCEL OZ H /OZ-3 CHIRALCEL OA, OB, OC CHIRALCEL OF, OG, OK CHIRALCEL CA-1反相反相 CHIRALPAK AD -RH/AD-3R C

4、HIRALPAK AS RH/AS-3R CHIRALCEL OD-RH/OD-3R CHIRALCEL OJ RH/OJ-3R CHIRALPAK AY RH/AY-3R CHIRALCEL OZ RH/OZ-3R其它其它Chiral -AGP CROWNPAK CR (), ()CHIRALPAK OT(), OP ()CHIRALPAK WH, MA ()CHIRALPAK QD-AXCHIRALPAK QN-AX共價(jià)鍵合型共價(jià)鍵合型 CHIRALPAK IA/IA-3 CHIRALPAK IB/IB-3 CHIRALPAK IC/IC-3分析條件優(yōu)化流程圖分析條件優(yōu)化流程圖 (1) (

5、1)酸性酸性中性中性堿性堿性Hex/IPA/TFAHex/IPA/TFA=70/30/0.1=70/30/0.1Hex/IPA/DEAHex/IPA/DEA=70/30/0.1=70/30/0.1Hex/IPAHex/IPA=70/30=70/30堿性堿性樣品樣品mVMinutes0.01.02.03.04.05.06.07.002468101214161820222410.7413.96Hex/IPA/DEA=90/10/0.1流量：1.0mi/min. 溫度：25、檢測(cè)波長(zhǎng)：254流動(dòng)相Hex/IPA=90/10Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1流動(dòng)相Hex/IPA=90/10-

6、0.10-0.050.000.050.100.150.200.250.300.35mV024681012141618202224262830Minutes10.940.40流量：1.0mi/min.溫度：40、檢測(cè)波長(zhǎng)：25405101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52Minutes0.00.20.40.60.81.01.21.41.6mV0510152025303540酸性酸性樣品樣品FCOOHNH2NON沒出峰沒出峰 )無法分別無法分別 )*1 主要用于1級(jí)胺*2 主要用于1級(jí)氨基醇Minutes0.02.55.07.510.0

7、12.515.017.520.0mv020040060080010001200mv020040060080010001200 12.24014.8531: 220 nm, 4 nmRetention TimeMinutes051015mv0100020003000mv0100020003000 1: 220 nm, 4 nmRetention TimeColumn: AY-H (4.6*150mm)Temp: 35Flow:2.0ML/MINMobile phase: CO2/IPA/DEA =85/15/0.1Column: AY-H (4.6*150mm)Temp: 35Flow:1.2M

8、L/MINMobile phase:CO2/IPA/1-propylamine =85/15/0.10.05.010.015.020.025.0min0100200300400mVDetector A Ch1:220nm 2.22529.8790.02.55.07.510.012.515.017.520.0min-250255075100125mVDetector A Ch1:220nm 12.00515.0460.02.55.07.510.012.515.017.5min-50-250255075100mVDetector A Ch1:220nm 12.16414.754Column: OZ

9、-H (4.6*150mm)Temp: 35Flow: 1.0 ml/minMobile phase:hexane/IPA/DEA(75/25/0.1)Column: OZ-H (4.6*150mm)Temp: 35Flow: 1.0 ml/minMobile phase:hexane/IPA/TFA(85/15/0.1)Column: OZ-H (4.6(150mm)Temp: 35Flow: 1.0 ml/minMobile phase:hexane/IPA/TFA/DEA(80/20/O.1/0.05)保保管管時(shí)時(shí)間間? ?適宜的分析時(shí)間(10-30 min.)添加添加 異丙醇異丙醇 添

10、加添加 正已烷正已烷OK!OK!分別？分別？0510152025303540455055600123456789101112131415Minutes4.684.82OB15mV1234567891011121314Minutes6.716.87OD05101520253035404550556065mV0-505101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52AD05101520253035404550556065mV0123456789101112131415OJmV01020304050607080mV0123456789101112

11、13144.7090AS1501020304050607080901000123456789101112131415Minutes4.70OCMinutes1020304050607080mV0123456789101112131415Minutes4.3615OGMinutes001020304050607080mV01234567891011121314Minutes4.36OF色譜條件色譜條件流動(dòng)相：流動(dòng)相： Hex./IPA/ AcOH = 90/10/0.1流量流量：1.0ml/min.溫度溫度 ：40檢測(cè)波長(zhǎng)檢測(cè)波長(zhǎng) ：UV254nm樣品樣品：FCOOH選擇效果最好的手性柱, 然后

12、繼續(xù)優(yōu)化分析條件部部分分分分別別A.A.降低異丙醇降低異丙醇濃濃度度 B. B. 調(diào)整溫度調(diào)整溫度C. C. 改換醇類改換醇類05101520253035mV012345678910 11 12 13 14 15Minutes6.667.52在多數(shù)情況下，降低醇的濃度可延伸堅(jiān)持時(shí)間，改善分別度在多數(shù)情況下，降低醇的濃度可延伸堅(jiān)持時(shí)間，改善分別度Column：AD, Temp.：40, Flow rate：1.0ml/min. Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1Hex./IPA/ AcOH =100/1/0.1-0.50.00.51.01.52.02.53.03.5mV05101

13、5202530354045505560Minutes35.7743.71FCOOHSample：Flurbiprofen部部分分分分別別B. B. 調(diào)調(diào)整溫度整溫度C. C. 改換醇類改換醇類A.A.降低異丙醇濃度降低異丙醇濃度Column：CHIRALPAK ADMobile phase： Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1, Flow rate：1.0ml/min. 2540Temp.： 5FCOOH降低柱溫可增大降低柱溫可增大值，但會(huì)使峰形變寬值，但會(huì)使峰形變寬升高柱溫會(huì)減少升高柱溫會(huì)減少值，但會(huì)使峰形尖鋒值，但會(huì)使峰形尖鋒-0.50.00.51.01.52.02.53.

14、03.54.04.55.05.56.00123456789101112131415Minutes8.7212.13:1.59mVMinutes0510152025303501234567891011121314156.667.52:1.23mV01234567890123456789101112131415Minutes7.669.12:1.320.02.55.07.5min-10-505101520mVDetector A Ch1:200nm 3.2173.732Temp.： 25Rs: 1.990.02.55.07.5min0255075mVDetector A Ch1:200nm 4.3

15、355.281Temp.： 20Rs: 2.78Temp.： 15Rs: 3.560.02.55.07.5min010203040506070mVDetector A Ch1:200nm 4.3975.661Column: CROWNPAK CR(+) (4.6*150 mm)Mobile phase: PH=1.0高氯酸高氯酸 Flow: 0.3 ml/minSample: 蘇氨酸蘇氨酸部部分分分分別別C.C.改改換換醇醇類類B. B. 調(diào)整溫度調(diào)整溫度A.A.降低異丙醇濃度降低異丙醇濃度由異丙醇換為乙醇由異丙醇換為乙醇-選擇性增大選擇性增大Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1FC

16、OOHIPA和和EtOH有時(shí)會(huì)使峰形和有時(shí)會(huì)使峰形和值發(fā)生明顯變化值發(fā)生明顯變化Column：CHIRALPAK ADTemp.：40, Flow rate：1.0ml/min. Sample：Flurbiprofen05101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52 =1.2305101520253001234567891011121314157.589.64 =1.45mVMinutesHex./EtOH/AcOH=95/5/0.10.05.010.015.020.025.0min0255075100mVDetector A Ch2:

17、254nm 20.24121.4240.02.55.07.510.012.515.0min050100150200250300mVDetector A Ch2:254nm 10.01113.410Column: AY-H (4.6X250mm)Temp: 35Flow:1.0 ml/minMobile phase:hexane/IPA/DEA(90/10/O.1)Column: AY-H (4.6X250mm)Temp: 35Flow:1.0 ml/minMobile phase:hexane/EtOH/DEA(90/10/O.1)01020min0250500mVDetector A Ch1

18、:220nm 0.05.010.0min0250500750mVDetector A Ch1:220nm 8.47511.818IA-H80I20DEA0.1-1.0mlmin-35IA-M100DEA0.1-1.0mlmin-350.02.55.07.510.012.515.017.5min-50-250255075100mVDetector A Ch1:220nm 12.16414.7540.02.55.07.510.012.5min050100150200250300350mVDetector A Ch1:214nm 5.0117.462OZ-H， ，Hexane/IPA /TFA/DE

19、A= 80/20/0.1/0.05 v/v/v)， ，1.0 ml/min OZ-H， ，MeOH/DEA=100/0.1 v/v)， ，0.8 ml/min CHIRALPAK IA/IB/ICCHIRALPAK IA/IB/IC研發(fā)背景研發(fā)背景CHIRALPAK IA, IB, ICONHCH3CH3OROOROROnROROOROROnONHCH3CH3RONHClClROROOROROnCHIRALPAK IACHIRALPAK IBCHIRALPAK ICNew!l 流動(dòng)相組分沒有任何限制流動(dòng)相組分沒有任何限制l 可以選用任何有機(jī)溶劑溶解樣品可以選用任何有機(jī)溶劑溶解樣品l 新的手性選

20、擇性新的手性選擇性l 可以再生，壽命長(zhǎng)可以再生，壽命長(zhǎng)l 正相與反相可以在同一支柱子上實(shí)現(xiàn)正相與反相可以在同一支柱子上實(shí)現(xiàn)對(duì)于一些化合物，分對(duì)于一些化合物，分別度能夠優(yōu)于涂布型別度能夠優(yōu)于涂布型0.02.55.07.5min0250500750mVDetector A Ch1:220nm 0.01.02.03.04.05.0min0250500750mVDetector A Ch1:220nm 分別度優(yōu)于涂布型分別度優(yōu)于涂布型實(shí)例實(shí)例Column: AD-H (4.6X250mm)Temp: 35Flow:1.0 ml/minMobile phase: hexane/IPA/DEA (90/1

21、0/0.1)Column: IA (4.6X150mm)Temp: 35Flow:1.0 ml/minMobile phase: hexane/IPA/DEA (90/10/0.1)0.02.55.07.510.0min0250500750mVDetector A Ch1:220nm 0.02.55.07.5min050100150200mVDetector A Ch1:220nm 3.9445.528由于在流動(dòng)相中改善了由于在流動(dòng)相中改善了溶解度，柱效優(yōu)于涂布溶解度，柱效優(yōu)于涂布型型Column: AD-H (4.6X250mm)Temp: 35Flow: 1.0 ml/minSolubil

22、ity: 0.5 mg/mlMobile phase: hexane/IPA (70/30)Column: IA (4.6X250mm)Temp: 35Flow: 1.0 ml/minSolubility: 7.0 mg/mlMobile phase: MtBE/MeOH (80/20)更高的柱效，更好的更高的柱效，更好的峰形峰形Chromatographic Condition: Hexane/IPA, 90/10 (v/v)經(jīng)過溶劑多樣性優(yōu)化手性分別經(jīng)過溶劑多樣性優(yōu)化手性分別IBIB含水流動(dòng)相含水流動(dòng)相非水與水相體系通用非水與水相體系通用CH3NNOCH302468101250100150

23、200250300a= 2.810 0101020200.000.000.010.010.020.020.030.030.040.040.050.05a= 2.36a= 1.960 01 12 23 34 45 56 67 78 89 910101111 12121313 14140 00.10.10.20.20.30.30 02 24 46 68 81010121214140.00.00.20.20.40.40.60.60.80.81.01.0a= 1.790 0101020200.000.000.010.010.020.020.030.030.040.04a= 1.700246810121

24、4050100150200250a= 1.650 0101020200.00.00.10.10.20.2a= 1.63a= 1.330 02 24 46 68 81010121214140.00.00.20.20.40.40.60.60.80.81.01.0修復(fù)再生后修復(fù)再生后可運(yùn)用各種強(qiáng)極性溶劑可運(yùn)用各種強(qiáng)極性溶劑柱性能受損柱性能受損 如受強(qiáng)吸附雜質(zhì)的影響如受強(qiáng)吸附雜質(zhì)的影響OOFOOHOH樣品樣品新色譜柱新色譜柱 IA柱的修復(fù)再生方法：第一：第一：EtOH 0.4ml/min 30minEtOH 0.4ml/min 30min第二：第二：DMF 0.3ml/min 3hDMF 0.3ml/

25、min 3h第三：第三：EtOH 0.3ml/min 50minEtOH 0.3ml/min 50min第四：第四：H/E=90/10H/E=90/10還不行，再用下面條件還不行，再用下面條件第一：第一：EtOH 0.4ml/min 30minEtOH 0.4ml/min 30min第二：第二：THF 0.5ml/min 2hTHF 0.5ml/min 2h第三：第三：EtOH 0.4ml/min 30minEtOH 0.4ml/min 30min第四：第四：DMF 0.3ml/min 3hDMF 0.3ml/min 3h第五：第五：EtOH 0.3ml/min 50minEtOH 0.3ml

26、/min 50min第六：第六：H/E=90/10H/E=90/10 IB IC柱的修復(fù)再生方法：第一：第一：EtOAc EtOAc 1ml/min 1ml/min 30min30min，有添加，有添加劑的劑的2h, 2h, 室室溫保管溫保管2 2天天第二：第二：H/I=90/10 H/I=90/10 1ml/min 1h1ml/min 1h鍵合型固定相挑選普通流程鍵合型固定相挑選普通流程l 選用比較典型的溶劑組協(xié)作為起始挑選流動(dòng)相選用比較典型的溶劑組協(xié)作為起始挑選流動(dòng)相l(xiāng) Hexane/IPA Hexane/IPAEtOHEtOH Hexane/THF(DCM, EA) Hexane/THF

27、(DCM, EA) l MtBE/ MeOH (IPA,EtOH MtBE/ MeOH (IPA,EtOH MtBE/ THF(DCM, EA) MtBE/ THF(DCM, EA) l ACN/ MeOH (IPA,EtOH ACN/ MeOH (IPA,EtOHl 假設(shè)分析物的溶解度不好，優(yōu)先選用溶解度好的有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相組分假設(shè)分析物的溶解度不好，優(yōu)先選用溶解度好的有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相組分l 運(yùn)用多元流動(dòng)相優(yōu)化分別運(yùn)用多元流動(dòng)相優(yōu)化分別OD-RH1054027OJ-RHAS-RH540*229*2,3AD-RH新新產(chǎn)產(chǎn)品：品： AY-RH / OZ-RH根據(jù)樣品性質(zhì)選擇流動(dòng)相根據(jù)樣品性質(zhì)

28、選擇流動(dòng)相樣品性質(zhì)OD-RH、OJ-RHAD-RH、AS-RH中性水/乙腈酸性磷酸水溶液(pH2)/乙腈0.1M 磷酸緩沖液(pH2)/乙腈堿性0.1M KPF6 水溶液/乙腈0.1M NaPF6水溶液/乙腈20mM 硼酸緩沖液(pH9)/乙腈20mM 磷酸緩沖液(pH8)/乙腈反相流動(dòng)相的反相流動(dòng)相的pH值對(duì)分別度的影響值對(duì)分別度的影響 (AS-RH )OOH中性化合物BenzoinONHOCO OH酸性化合物N-CBZ-Norvaline堿性化合物Ofloxacin ethyl esterONNNFOCO OEt水溶液水溶液/CH3CN=60/40流速：1.0ml/min.水溶液/CH3C

29、N=60/40流速：1.0ml/min.水溶液/CH3CN=80/20流速：0.5ml/min.051015mV02468101214Minutes7.168.77024681012mV0123456789 10Minutes2.250.01.02.03.04.0mV0 5 1015202530354045505560Minutes27.79水磷酸水溶液(pH2)硼酸緩沖液(pH9)051015mV02468101214Minutes7.118.7005101520mV0.02.04.06.08.0Minutes4.174.69020406080mV0 5 101520253035404550

30、5560Minutes4.004.484.77051015mV02468101214Minutes6.978.53010203040506070mV0123456789 10Minutes1.850.02.04.06.08.00 5 1015202530354045505560Minutes30.7436.78有機(jī)溶劑種類對(duì)分別的影響有機(jī)溶劑種類對(duì)分別的影響12.1813.548.208.8411.5212.358.2114.1215.787.457.97水水/乙腈乙腈=50/50水水/乙醇乙醇=35/65水水/甲醇甲醇=25/75OOH2-Methyl-1-tetralone2-Phenyl

31、-2-butanol 手性柱：手性柱： CHIRALPAK AD-RH 、流速：、流速：0.5ml/min、溫度：、溫度：25反相柱分析條件優(yōu)化的總結(jié)反相柱分析條件優(yōu)化的總結(jié)有機(jī)溶劑的種類不同，其洗脫強(qiáng)度也不同。有時(shí)其分有機(jī)溶劑的種類不同，其洗脫強(qiáng)度也不同。有時(shí)其分別效果也發(fā)生一些變化別效果也發(fā)生一些變化手性色譜柱組合挑選手性色譜柱組合挑選組合挑選設(shè)備組合挑選設(shè)備IPA泵泵紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器色譜柱自動(dòng)切換閥色譜柱自動(dòng)切換閥流動(dòng)相流動(dòng)相2自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器組合挑選設(shè)備表示圖組合挑選設(shè)備表示圖流動(dòng)相流動(dòng)相1溶劑切換閥溶劑切換閥旋光檢測(cè)器旋光檢測(cè)器串聯(lián)旋光檢測(cè)器的益處串聯(lián)旋光檢測(cè)器的益處 11.

32、1.用用UVUV檢測(cè)器只出現(xiàn)檢測(cè)器只出現(xiàn)“峰的時(shí)候峰的時(shí)候 運(yùn)用旋光檢測(cè)器可確認(rèn)其分別情況運(yùn)用旋光檢測(cè)器可確認(rèn)其分別情況2. 2. 可確可確認(rèn)認(rèn)洗脫洗脫順順序序串聯(lián)旋光檢測(cè)器的益處串聯(lián)旋光檢測(cè)器的益處 2假設(shè)挑選沒得到理想的分析條件時(shí)假設(shè)挑選沒得到理想的分析條件時(shí)Daicel大部分手性柱是涂敷型產(chǎn)品，在市場(chǎng)上具有獨(dú)特性。大部分手性柱是涂敷型產(chǎn)品，在市場(chǎng)上具有獨(dú)特性。假設(shè)導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶劑假設(shè)導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶劑(CH2Cl2、乙酸乙酯、甲苯等、乙酸乙酯、甲苯等)，柱子會(huì)馬上被破，柱子會(huì)馬上被破壞。壞。當(dāng)流動(dòng)相或樣品溶液導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶劑時(shí)，柱壓劇增，分別忽然變差。當(dāng)流動(dòng)相或樣品溶液導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶劑時(shí)，柱壓劇增，分別忽然變差。一旦