hbv基因與耐藥檢測(cè)檢驗(yàn)科版

1、產(chǎn)品經(jīng)理 吳 勇hbvhbv分型和耐藥突變基因檢測(cè)分型和耐藥突變基因檢測(cè)產(chǎn)品經(jīng)理 吳 勇一、基因芯片原理及特點(diǎn)一、基因芯片原理及特點(diǎn)二、二、hbvhbv分型與耐藥突變基因檢測(cè)產(chǎn)品簡(jiǎn)介分型與耐藥突變基因檢測(cè)產(chǎn)品簡(jiǎn)介三、亞能三、亞能hbvhbv分型與耐藥突變基因檢測(cè)的運(yùn)用及臨床意義分型與耐藥突變基因檢測(cè)的運(yùn)用及臨床意義四、亞能四、亞能hbvhbv分型與耐藥突變檢測(cè)產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)分型與耐藥突變檢測(cè)產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)一、基因芯片原理及特點(diǎn)一、基因芯片原理及特點(diǎn)基因芯片基因芯片(gene chip)(gene chip)：是多種特定的寡核苷酸序列為探針，固定于支持物表面上而成的二維dna陣列?；驹恚夯驹恚豪脡A

2、基互補(bǔ)配對(duì)原則，通過目的dna與探針特異結(jié)合來判斷目的dna的序列信息。 pcr+反向點(diǎn)雜交（rdb）基因芯片原理基因芯片原理基因芯片技術(shù)特點(diǎn)基因芯片技術(shù)特點(diǎn)u 高靈敏度高靈敏度pcrpcru 高特異性高特異性-核酸分子雜交核酸分子雜交u 高通量高通量-膜芯片上排列多種探針膜芯片上排列多種探針u 結(jié)果易判讀結(jié)果易判讀-化學(xué)顯色化學(xué)顯色 二、二、hbvhbv分型與耐藥突變基因檢測(cè)產(chǎn)品簡(jiǎn)介分型與耐藥突變基因檢測(cè)產(chǎn)品簡(jiǎn)介乙型肝炎病毒分型和耐藥突變基因檢測(cè)試劑盒乙型肝炎病毒分型和耐藥突變基因檢測(cè)試劑盒 （pcr-pcr-反向點(diǎn)雜交法）反向點(diǎn)雜交法）注冊(cè)號(hào)：國(guó)食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字注冊(cè)號(hào)：國(guó)食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2

3、0112011第第34011773401177號(hào)號(hào)專利號(hào)：專利號(hào)：zl200710073933.3zl200710073933.3國(guó)內(nèi)首個(gè)全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑國(guó)內(nèi)首個(gè)全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑 pcr pcr擴(kuò)增：擴(kuò)增：在s基因和p基因重疊區(qū)段設(shè)計(jì)pcr引物，pcr擴(kuò)增片段既包含耐藥突變位點(diǎn)又能進(jìn)行基因分型。p p基因：耐藥突變檢測(cè)基因：耐藥突變檢測(cè)編碼dna合成酶（包含逆轉(zhuǎn)錄酶rt），抗病毒藥物作用靶區(qū)，耐藥基因突變熱點(diǎn)區(qū)s s基因：分型檢測(cè)基因：分型檢測(cè)技術(shù)原理技術(shù)原理采集樣本采集樣本雜交雜交顯色顯色結(jié)果判讀結(jié)果判讀0.5小時(shí)小時(shí)3小時(shí)小時(shí)1.5小時(shí)小

4、時(shí)提取提取dnapcr擴(kuò)增擴(kuò)增操作流程操作流程全程僅需全程僅需6 6小時(shí)小時(shí)儀器名稱儀器名稱參數(shù)及要求參數(shù)及要求臺(tái)式高速離心機(jī) 轉(zhuǎn)速13000rpm，轉(zhuǎn)子規(guī)格：1.5ml冰箱雙溫區(qū)：4/-18；雙門 移液器1-10l,10-100l, 100-1000l干式恒溫器孔徑：1.5 ml；控溫范圍：室溫+5-100pcrpcr儀儀0.2 ml，48或96孔分子雜交儀分子雜交儀控溫范圍：環(huán)境溫度+5-100，可調(diào)；精度：0.1檢測(cè)儀器檢測(cè)儀器試劑盒性能指標(biāo)試劑盒性能指標(biāo)準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性：檢測(cè)105例臨床慢性hbv感染陽性樣本，結(jié)果與測(cè)序比較顯示為相同的 基因型和耐藥突變類型，準(zhǔn)確率為100%。特異性特異性

5、：檢測(cè)50例臨床hbv陰性樣本結(jié)果全部為陰性；檢測(cè)非hbv感染性病原體dna，包括c型肝炎病毒（hcv）和hiv，結(jié)果均為陰性。靈敏度靈敏度：能檢測(cè)血清hbv的最低檢出限為1.0103iu/ml。精密度精密度：檢測(cè)2.0103iu/ml的血清hbv，批內(nèi)和批間的一致性好。穩(wěn)定性穩(wěn)定性：產(chǎn)品有效期為6 6個(gè)月個(gè)月，在有效期內(nèi)產(chǎn)品性能穩(wěn)定。本產(chǎn)品檢測(cè)的樣本為本產(chǎn)品檢測(cè)的樣本為血清或血漿血清或血漿；要求待檢樣本的要求待檢樣本的hbv dnahbv dna載量載量1.01.010103 3copies/mlcopies/ml。樣本要求樣本要求樣本保存樣本保存為了避免為了避免dnadna降解，制備好的血

6、清或血漿，避免長(zhǎng)時(shí)間室溫放置；降解，制備好的血清或血漿，避免長(zhǎng)時(shí)間室溫放置；2 288保存不超過保存不超過4848小時(shí)；小時(shí)；-18-18以下保存不超過半年，避免反復(fù)凍融。以下保存不超過半年，避免反復(fù)凍融。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)三、三、亞能亞能hbvhbv分型與耐藥突變基因檢測(cè)分型與耐藥突變基因檢測(cè)的運(yùn)用及臨床意義的運(yùn)用及臨床意義亞能亞能hbvhbv產(chǎn)品應(yīng)用產(chǎn)品應(yīng)用抗病毒治療前、治療中抗病毒治療前、治療中hbvhbv的基因分型和耐藥突變基因檢測(cè)的基因分型和耐藥突變基因檢測(cè)u 區(qū)分我國(guó)常見的區(qū)分我國(guó)常見的hbv-bhbv-b、c c、d d基因型基因型u 涵蓋我國(guó)涵蓋我國(guó)4 4種核苷（酸）抗病毒藥物（

7、拉米夫定、阿德福韋酯、種核苷（酸）抗病毒藥物（拉米夫定、阿德福韋酯、 替比夫定、恩替卡韋）替比夫定、恩替卡韋）7 7個(gè)耐藥位點(diǎn)的個(gè)耐藥位點(diǎn)的1616種突變：種突變：rtl180mrtl180m、rtm204v/rtm204v/i i、rta181v/trta181v/t、rtn236trtn236t、rtm250rtm250i i/l/v/l/v、rts202g/rts202g/i i、rtt184rtt184i i/s/a/f/l/s/a/f/l。hbvhbv基因型檢測(cè)臨床意義基因型檢測(cè)臨床意義u hbeag hbeag陽性患者中，陽性患者中，b b基因型對(duì)基因型對(duì)ifn-ifn-治療的應(yīng)答

8、率高于治療的應(yīng)答率高于c c基因基因 型，型，a a基因型高于基因型高于d d基因型。基因型。u 與與c c基因型感染者相比，基因型感染者相比，b b基因型感染者較早出現(xiàn)基因型感染者較早出現(xiàn)hbeaghbeag血清學(xué)血清學(xué) 轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌；轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌；預(yù)測(cè)干擾素應(yīng)答和疾病進(jìn)展情況預(yù)測(cè)干擾素應(yīng)答和疾病進(jìn)展情況慢性乙型肝炎防治指南（慢性乙型肝炎防治指南（20102010年）年）hbvhbv耐藥檢測(cè)臨床意義耐藥檢測(cè)臨床意義u抗病毒治療前，預(yù)存耐藥檢測(cè)抗病毒治療前，預(yù)存耐藥檢測(cè) 協(xié)助臨床選擇合理抗病毒藥物，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化抗病毒治療、提

9、高抗病毒療效、降低耐藥發(fā)生率。u 抗病毒治療中，全程耐藥監(jiān)測(cè)抗病毒治療中，全程耐藥監(jiān)測(cè) 全程監(jiān)測(cè)耐藥，利于早期挽救治療，為調(diào)整治療方案提供理論支持。全程監(jiān)測(cè)耐藥，為調(diào)整治療方案提供理論依據(jù)全程監(jiān)測(cè)耐藥，為調(diào)整治療方案提供理論依據(jù)四、亞能四、亞能hbv分型耐藥突變分型耐藥突變檢測(cè)產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)檢測(cè)產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)全基因序列測(cè)定全基因序列測(cè)定法法限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法（分析法（rflprflp）實(shí)時(shí)熒光實(shí)時(shí)熒光pcrpcr法法亞能亞能hbv hbv 基因芯片基因芯片靈敏靈敏度度靈敏度低，最低檢測(cè)限為20%；靈敏，最低檢測(cè)限為5%；靈敏，最低檢測(cè)限為5%；靈敏，最低檢測(cè)限為5%；檢測(cè)檢測(cè)位

10、點(diǎn)位點(diǎn)所有突變位點(diǎn)已知耐藥位點(diǎn)僅能檢測(cè)rt204位點(diǎn)我國(guó)4種核苷類藥物7個(gè)耐藥位點(diǎn)的16種突變?cè)u(píng)價(jià)評(píng)價(jià)1、測(cè)序試劑大多未獲得sfda批準(zhǔn)；2、操作繁瑣、技術(shù)難度大、儀器要求高、不易在臨床開展。1、需針對(duì)每一個(gè)待測(cè)突變位點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)特異性內(nèi)切酶反應(yīng)體系；2、一些突變可能生成新的酶切位點(diǎn)，或破壞原有酶切位點(diǎn)，必須謹(jǐn)慎看待檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果僅提示拉米夫定耐藥。1、是首個(gè)獲得sfda批準(zhǔn)的，同時(shí)進(jìn)行hbv分型、耐藥檢測(cè)的試劑盒；2、準(zhǔn)確性好、6小時(shí)出結(jié)果、結(jié)果肉眼可見。儀器要求低，操作便捷、易于臨床使用。hbvhbv耐藥檢測(cè)產(chǎn)品比較耐藥檢測(cè)產(chǎn)品比較亞能亞能hbvhbv分型與耐藥突變檢測(cè)優(yōu)勢(shì)分型與耐藥突變檢

11、測(cè)優(yōu)勢(shì)u 高高 效效：sfda批準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)首個(gè)hbv分型與耐藥突變基因同時(shí)檢測(cè)的試劑盒；u 檢測(cè)位點(diǎn)廣檢測(cè)位點(diǎn)廣：能檢測(cè)我國(guó) 4種核苷（酸）抗病毒藥物（拉米夫定、 阿德福韋酯、替比夫定、恩替卡韋）7個(gè)耐藥位點(diǎn)的16種突變；u 靈敏度高靈敏度高： 1.0103iu/ml，最低檢測(cè)限為5%；u 快快 速速：6小時(shí)即可完成檢測(cè)；u 易易 用用：操作簡(jiǎn)易、結(jié)果可直接讀取，設(shè)備要求低，易于臨床使用。 國(guó)內(nèi)首個(gè)全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑；國(guó)內(nèi)首個(gè)全面提示核苷（酸）類藥物耐藥的快速診斷試劑；6h6h全面呈現(xiàn)：全面呈現(xiàn)：4 4種核苷（酸）相關(guān)的種核苷（酸）相關(guān)的7 7個(gè)耐藥位點(diǎn)個(gè)耐藥位點(diǎn)1616種突變，區(qū)分種突變，區(qū)分hbv- bhbv- b、c c、d d三種基因型；三種基因型；全程監(jiān)測(cè)耐藥