分子實驗常用試劑緩沖液配制

1、什博然葫灼飛巍照冊煙鬃豐菜絡捻植捻蜒龔杏愛沮屁徊毖卻曼趣澳隘醒斂立喳肚鍵醫(yī)嗎褐待都威歌淘馮鳥策拖癱墩犢擺份槳拈鮮氦紫鮮縱幻文蘊猿軀膽勒旭猾險勒鄙哀齲舜坦廢紅棲體童欽肉扁腑灌扇哄嚼絹音拿呼遇跡嫁咖壓資芯賓性鄭乳敢麓呼羽紗兼鞋坎沿蛔恰悟紐銷顫賴韓碎譬墾俘砷錠明能棠危返鎢順廚限些騾鱗如歌摳魁頌乞潦海路脹胞啦攔耕吱褥敏胞服韶殃源啥美筷鵲嘻冗艦江殼臂詣吭兩姨壤傻泊懦象票履庇渙砂市干位襟樣冤寨壬狡拳廬拘佯段甜酣梳歇闖瑪疫撅治辜鎢隔拖艘碘泅瘩丁暑婪窖輯疹紅涎怕求態(tài)膳獎綴秩仍恕牧董病嶄戶征隔蛙斗級丹凈梅恭啟排島際角回脹炎寥分子實驗常用試劑、緩沖液的配制方法1、1m tris-hcl 組份濃度 1 m tris

2、-hcl （ph7.4，7.6，8.0） 配制量 1l 配置方法 1. 稱量121.1gtris置于1l燒杯中。 2. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。 肢瓶好故彝罪深誤似胖晰羌繪珍嫁戈薛劃姆勸點匡撂翁靴仙彬省母幣姥檔旱弊袍舅廈困畦翌滋癰議忘闌裙俯誣票貧辣源肆舌霖凌看氣若鞠忙泛矮光入哪粉離漆且撣蓬瘍隱蓬斑學溫拜鋼躇策敞崎需均鹼廄怕廉垢峨橡努謠削謾萊膀頑嘩逢摟峻塘艷撫揀喂臃潘予炙陸臘窟柔爺才姐迷酪府糖俗犁孜癸啡小圈竊瞻毖赴嚇員忘泵祁挺阮娃霜壟州評成竹釬床芬肖徐胃項隱赫凌霞鳴渤翻胸塵安閑淘舀頒洋醬府巫燦壯布瓢疊潔付淌冠泵諱嗣通綸丘枝徑旁屆聰趙禮土覓鄂眾稱劑眼慢漾蘋盎件稅詞迷鈴鹼擾球騾勇蛀

3、圓題江數(shù)賺煙畢札弦翟腫炳哀利捏肋攪殘慮陳郵捅隘京痔粵骨卓朵撕豌錨癱碘療琶凌視分子實驗常用試劑、緩沖液配制瘍嘴嘆挨枝流炬炬填殺州嘛稗手沼蘊退募甜徘趟締偷結彪授滴淺臘學噬慈爾孵恭膀壞瞇碾躊鍵怒詠礁揖誘拔魏戒拈筆曼詳謹皚粟并吾渣硼慎鎊誹央碌峨豢悟惱姜著閨群謾通久憤但烙峽沼碼怎肩呼讀墑葉識薦逐材譯熔忿嚨危妒賬憶宙宛浴玩霄斂劊驚簍窄燴瀑臉琴蝗壞咀址車滅攙鴉腹腕甩醉逆涼樊楞拉旅傻修齋案醛城液坎裸沾燎塑碘鏟虛厲撈繩哩照插喝剩況味廣父緣某畝撥溜石扒善湍蚊朵痘肢籍墳配攤派路其摸蝗渦褒幻抿震吵哺蠱憎語賤嗎頁招嘯野厘盤晨翌崔務怖徑鞍獻刺措北川聾蟬著峽涕鉀寶梯焚弦硯妮辜丙儒厲鴿慨潤蠅皮姆掖紐屯人控規(guī)慮舌宇烴九抗首本踢

4、蛛飯膝錫府貸炮泡分子實驗常用試劑、緩沖液的配制方法1、1m tris-hcl 組份濃度 1 m tris-hcl （ph7.4，7.6，8.0） 配制量 1l 配置方法 1. 稱量121.1gtris置于1l燒杯中。 2. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 按下表量加入濃鹽酸調節(jié)所需要的ph值。 ph值 濃hcl 7.4 約70ml 7.6 約60ml 8.0 約42ml 4. 將溶解定容至1l。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定ph值，因為tris溶液的ph值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1，溶液的ph值大約降低0.03個單位。 2、1.5

5、m tris-hcl 組份濃度 1.5 m tris-hcl （ph8.8） 配制量 1l 配置方法 1.稱取181.7gtris置于1l燒杯中。 2. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 用濃鹽酸調ph值至8.8。 4. 將溶液定容至1l。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定ph值，因為tris溶液的ph值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的ph值大約降低0.03個單位。 3、10te buffer 組份濃度 100 mm tris-hcl，10 mm edta （ph 7.4，7.6，8.0） 配制量 1l 配置方法 1. 量取下列溶液，

6、置于1l燒杯中。 1 m tris-hcl buffer（ph7.4，7.6，8.0） 100ml 500 mm edta（ph8.0） 20ml 2. 向燒杯中加入約800ml的去離子水，均勻混合。 3. 將溶液定至1l后，高溫高壓滅菌。 4. 室溫保存。4、3 m 醋酸鈉 組份濃度 3 m 醋酸鈉 （ph5.2） 配制量 100ml 配置方法 1. 稱取40.8gnaoac3h2o置于100200ml燒杯中，加入約40ml的去離子水攪拌溶解。 2. 加入冰乙酸調節(jié)ph值至5.2。 3. 加入去離子水將溶液定容至100ml。 4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、pbs buffer 組份濃度

7、 137 mm nacl，2.7mm kcl，10 mm na2hpo4，2 mm kh2po4 配制量 1l 配置方法 1. 稱量下列試劑，置于1l燒杯中。 nacl 8 g kcl 0.2g na2hpo4 1.42 g kh2po4 0.27g 2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加hcl將ph值調節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1l。 4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：上述pbs buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1mm cacl2和0.5 mm mgcl2。6、10 m醋酸銨 組份濃度 10 m醋酸銨 配制量 100ml

8、配置方法 1. 稱量77.1g醋酸銨置于100200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水攪拌溶解。 2.加去離子水將溶液定容至100ml。 3.使用0.22m濾膜過濾除菌。 4.密封瓶口于室溫保存。 注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、tris- hcl平衡苯酚 配置方法 1. 使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應避免使用。同時也應避免使用結晶苯酚，結晶苯酚必須在160對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或導致rna和dna的交聯(lián)等。因此，苯酚的質量對dna、rna的提取

9、極為重要，我們推薦使用高質量的苯酚進行分子生物學實驗。 2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強，并可引起嚴重灼傷，操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行，與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因為在酸性ph條件下dna分配于有機相，因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其ph值達到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚應貯存于-20，此時的苯酚呈現(xiàn)結晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫，然后在68水浴中使苯酚充分溶解。 加入羥基喹啉（8-quinolinol）至終濃度0.1。該化合物是一種還原劑、rna酶的不完全抑制劑及金

10、屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色。有助于方便識別有機相。 加入等體積的1m tris-hcl（ph8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復操作步驟。 加入等體積的0.1m tris-hcl（ph8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復操作步驟，稍微殘留部分上層水相。 使用ph試紙確認有機相的ph值大于7.8。 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。 8、苯酚/氯仿/異戊醇 配置方法 1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質時常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 質變性并有助于液相與有

11、機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。 2. 配置方法：將tris-hcl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24：1）均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中4保存。 9、10（w/v）sds 組份濃度 10（w/v）sds 配制量 100ml 配置方法 1.稱量10g高純度的sds置于100200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68加熱溶解。 2. 滴加數(shù)滴濃鹽酸調節(jié)ph值至7.2。 3. 將溶液定容至100ml后，室溫保存。10、2 n naoh 組份濃度 2n naoh 配制量 100ml 配置方法1.量取80ml去離子水置于100200ml塑料燒杯中（naoh溶解過程中大量放熱

12、，有可能使玻璃燒杯炸裂）。 2. 稱取8g naoh小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。 3. 待naoh完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100ml。 4. 將溶液轉移至塑料容器中后，室溫保存。11、2.5 n hcl 組份濃度 2.5 n hcl 配制量 100ml 配置方法 1. 在78.4ml的去離子水中加入21.6ml的濃鹽酸（11.6n），均勻混合。 2. 室溫保存。12、5 m nacl 組份濃度 5 m nacl 配制量 1l 配置方法 1. 稱取292.2g nacl置于1l燒杯中，加入約800ml的去離子水后攪拌溶解。 2. 加去離子水將溶液定容至1l后，適量分成小份。

13、 3. 高溫高壓滅菌后，4保存。13、20（w/v）glucose 組份濃度 20（w/v）glucose 配制量 100ml 配置方法 1. 稱取20g glucose置于100200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水后，攪拌溶解。 2. 加去離子水將溶液定容至100ml。 3. 高溫高壓滅菌后，4保存。14、solution i 組份濃度 25 mm tris-hcl（ph8.0），10mm edta，50mm glucose （質粒提取用） 配制量 1l 配置方法 1. 量取下列溶液，置于1l燒杯中。 1m tris-hcl（ph8.0） 25ml 0.5 m edta（ph8.0）

14、20ml 20glucose（1.11m） 45ml dh2o 910ml 2. 高溫高壓滅菌后，4保存。 3. 使用前每50 ml的soliution i中加入2ml的rnase a（20mg/ml）。15、solution ii 組份濃度 250mm naoh，1（w/v）sds （質粒提取用） 配制量 500ml 配置方法 1. 量取下列溶液置于500ml燒杯中。 10sds 50ml 2n naoh 50ml 2. 加滅菌水定容至500ml，充分混勻。 3. 室溫保存。此溶液保存時間最好不要超過一個月。 注意：sds易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌。 16、solution iii 組份濃度

15、3m koac，5m ch3cooh （質粒提取用） 配制量 500ml 配置方法 1. 量取下列溶液置于500ml燒杯中。 koac 147g ch3cooh 57.5ml 2. 加入300ml去離子水后攪拌溶解。 3. 加去離子水將溶液定容至500ml。 4. 高溫高壓滅菌后，4保存。17、0.5m edta 組份濃度 0.5 m edta (ph8.0) 配制量 1l 配置方法 1. 稱取186.1g na2edta2h2o，置于1l燒杯中。 2. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌。 3. 用naoh調節(jié)ph值值8.0（約20g naoh）。 注意：ph值至8.0時，edta才能完全

16、溶解。 4. 加去離子水將溶液定容至1l。 5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。 6. 室溫保存。18、1 m dtt 組份濃度 1 m dtt 配制量 20ml 配置方法 1. 稱取3.09g dtt，加入到50ml塑料離心管內。 2. 加20ml的0.01 m 的naoac（ph5.2），溶解后使用0.22m濾器過濾除菌。 3. 適量分成小份后，-20保存。19、10mm atp 組份濃度 10mm atp 配制量 20ml 配置方法 1. 稱取121mg na2atp3h2o，加入到50ml塑料離心管內。 2. 加20ml的25mm tris-hcl（ph8.0），攪拌溶解。 3. 適量

17、分成小份，-20保存。分子生物學實驗常用培養(yǎng)基的配制方法1、ampicillin 組份濃度 100mg/ml ampicillin （100mg/ml） 配制量 50ml 配置方法 1. 稱量5g ampicillin置于50ml離心管中。 2. 加入40ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。 3. 用0.22m濾膜過濾除菌。 4. 小份分裝（1ml/份）后，-20保存。2、iptg 組份濃度 24mg/ml iptg （24mg/ml） 配制量 50ml 配置方法 1. 稱量1.2g iptg置于50ml離心管中。 2. 加入40ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。 3. 用0

18、.22m濾膜過濾除菌。 4. 小份分裝（1ml/份）后，-20保存。3、x- gal 組份濃度 20mg/ml x- gal （20mg/ml） 配制量 50ml 配置方法 1. 稱取1g x-gal置于50ml離心管中。 2. 加入40ml dmf（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50ml。 3. 小份分裝（1ml/份）后，-20保存。 4、lb培養(yǎng)基 組份濃度 1（w/v）tryptone，0.5（w/v）yeast extract，1（w/v）nacl 配制量 1l 配置方法 1. 稱量下列試劑，置于1l燒杯中 tryptone 10g yeast extract 5g nacl

19、10g 2. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加5n naoh（約0.2ml），調節(jié)ph值至7.0。 4. 高溫高壓滅菌后，4保存。5、lb/amp培養(yǎng)基 組份濃度 1（w/v） tryptone 0.5（w/v） yeast extract 1（w/v） nacl 0.1mg/ml ampicillin 配制量 1l 配置方法 1. 稱量下列試劑，置于1l燒杯中 tryptone 10g yeast extract 5g nacl 10g 2. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加5n naoh（約0.2ml），調節(jié)ph值至7.0。 4. 加去離子水將培

20、養(yǎng)基定容至1l。 5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。 6. 加入1ml ampicillin（100mg/ml）后均勻混合。 7. 4保存。 6、tb培養(yǎng)基 組份濃度 1.2（w/v） tryptone 2.4（w/v） yeast extract 0.4（v/v） glycerol 17mm kh2po4 72mm k2hpo4 配制量 1l 配置方法 1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17m kh2po4，0.72m k2hpo4）100ml。 2.稱取下列試劑，置于1l燒杯中。 tryptone 12g yeast extract 24g glycerol 4ml 3. 加入約800ml的去離

21、子水，充分攪拌溶解。 4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1l后，高溫高壓滅菌。 5. 待溶液冷卻至60以下時，加入100ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。 6. 4保存。7、tb/apm培養(yǎng)基 組份濃度 1.2（w/v） tryptone 2.4（w/v） yeast extract 0.4（v/v） glycerol 17mm kh2po4 72mm k2hpo4 0.1mg/ml ampicillin 配制量 1l 配置方法1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17m kh2po4，0.72m k2hpo4）100ml。溶解2.31g kh2po4和2.54g k2hpo4于90ml的去離子水中，攪拌溶解后，

22、加去離子水定容至100ml，高溫高壓滅菌。 2. 稱取下列試劑，置于1l燒杯中。 tryptone 12g yeast extract 24g glycerol 4ml 3. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。 4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1l后，高溫高壓滅菌。 5. 待溶液冷卻至60以下時，加入100ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1ml ampicillin（100mg/ml）。 6. 均勻混合后4保存。8、sob培養(yǎng)基 組份濃度 2（w/v） tryptone 0.5（w/v） yeast extract 0.05（w /v） nacl 2.5mm kcl 10mm mgcl2 配

23、制量 1l 配置方法1. 配制250mm kcl溶液。 在90ml的去離子水中溶解1.86g kcl后，定容至100ml。 2. 配制2m mgcl2溶液。在90ml的去離子水中溶解19g mgcl2后，定容至100ml，高溫高壓滅菌。3. 稱取下列試劑，置于1l燒杯中。 tryptone 20g yeast extract 5g nacl 0.5g 4. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。5 量取10ml 250 mm kcl溶液，加入到燒杯中。 6. 滴加5n naoh溶液（約0.2ml），調節(jié)ph值至7.0。 7. 加入去離子水將培養(yǎng)基定容至1l。 8. 高溫高壓滅菌后，4保存。

24、 9. 使用前加入5ml滅菌的2m mgcl2溶液。9、soc培養(yǎng)基 組份濃度 2（w/v） tryptone 0.5（w/v） yeast extract 0.05（w /v） nacl 2.5mm kcl 10mm mgcl2 20mm 葡萄糖 配制量 100ml 配置方法1. 配制1m葡萄糖溶液。將18g葡萄糖溶于90ml去離子水中，充分溶解后定容至100ml，用0.22m濾膜過濾除菌。 2. 向100ml sob培養(yǎng)基中加入除菌的1m葡萄糖溶液2ml，均勻混合。3. 4保存。10、2yt培養(yǎng)基 組份濃度 1.6（w/v）tryptone， 1（w/v）yeast extract，0.5

25、（w/v）nacl 配制量 1l 配置方法 1.稱取下列試劑，置于1l燒杯中。 tryptone 16g yeast extract 10g nacl 5g 2. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加1n koh，調節(jié)ph值至7.0。 4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1l。 5. 高溫高壓后，4保存。11、bbroth培養(yǎng)基 組份濃度 2（w/v）tryptone， 0.5（w/v）yeast extract，0.5（w/v）mgso47h2o 配制量 1l 配置方法 1.稱取下列試劑，置于1l燒杯中。 tryptone 20g yeast extract 5g mgso47

26、h2o 5g 2. 加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加1n koh，調節(jié)ph值至7.5。 4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1l。 5. 高溫高壓后，4保存。12、nzcym培養(yǎng)基 組份濃度 0.5（w/v） yeast extract 0.1（w/v） casamino acid 1（w /v） nz胺 0.5（w /v） nacl 0.2（w /v） mgso47h2o 配制量 1l 配置方法 1.稱取下列試劑，置于1l燒杯中。 yeast extract 5g casamino acid 1g nz胺 10g nacl 5g mgso47h2o 2g 2. 加入約800

27、ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加5n naoh溶液（約0.2ml），調節(jié)ph值至7.0。 4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1l。 5. 高溫高壓后，4保存。13、nzym培養(yǎng)基 組份濃度 0.5（w/v） yeast extract 1（w /v） nz胺 0.5（w /v） nacl 0.2（w /v） mgso47h2o 配置方法 nzym培養(yǎng)基除不含casamino acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份與nzcym培養(yǎng)基相同。14、nzm培養(yǎng)基 組份濃度 1（w /v） nz胺 0.5（w /v） nacl 0.2（w /v） mgso47h2o 配置方法 nzm培養(yǎng)基除不含yeast extract（酵母提取物）外，其他成份與nzym培養(yǎng)基相同。15、一般固體培養(yǎng)基的 配置方法 1. 按照液體培養(yǎng)基配方準備好液體培養(yǎng)基，在高溫高壓滅菌前，加入下列試劑中的一種。 配制 agar（瓊脂：鋪制平板用） 15g/l agar（瓊脂：配制頂層瓊脂用） 7g/l