實驗一細胞質(zhì)流動

1、細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗20082008生物科學(xué)生物科學(xué)5 5班班細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗實實 驗驗 室室 守守 則則1 1、不遲到，不早退，更不能無故缺課；不遲到，不早退，更不能無故缺課；2 2、進實驗室要、進實驗室要穿白大褂穿白大褂。實驗室內(nèi)。實驗室內(nèi)禁止喧嘩禁止喧嘩。3 3、實驗前必須認真、實驗前必須認真預(yù)習(xí)預(yù)習(xí)，熟悉實驗的內(nèi)容。，熟悉實驗的內(nèi)容。4 4、實驗中應(yīng)、實驗中應(yīng)嚴格按操作規(guī)程進行嚴格按操作規(guī)程進行，認真操，認真操作、仔細觀察，及時記錄實驗現(xiàn)象及結(jié)果；作、仔細觀察，及時記錄實驗現(xiàn)象及結(jié)果；5 5、在實驗的過程中制造的任何垃圾都要丟到垃在實驗的過程中制造的任何垃圾都要丟到

2、垃圾筐里（或先放在自己的桌面廢物缸內(nèi)），圾筐里（或先放在自己的桌面廢物缸內(nèi)），嚴嚴禁隨地投棄！禁隨地投棄！細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗實實 驗驗 室室 守守 則則6 6、實驗器具應(yīng)、實驗器具應(yīng)保持清潔保持清潔，用過的玻璃器皿必須用過的玻璃器皿必須洗凈后放回原處。實驗臺面應(yīng)保持整潔，儀器、洗凈后放回原處。實驗臺面應(yīng)保持整潔，儀器、藥品擺放整齊。藥品擺放整齊。公用試劑及用具盒用完后，應(yīng)公用試劑及用具盒用完后，應(yīng)立即蓋好放回原處。立即蓋好放回原處。 7 7、執(zhí)行執(zhí)行值日生制度值日生制度，每天安排，每天安排3-43-4人值日，其職人值日，其職責(zé)是負責(zé)實驗器具的整理、操作臺、水槽、地責(zé)是負責(zé)實驗器具的整

3、理、操作臺、水槽、地板等實驗室衛(wèi)生工作。板等實驗室衛(wèi)生工作。8 8、保證安全保證安全9 9、實驗結(jié)束后實驗結(jié)束后認真分析和總結(jié)認真分析和總結(jié)，實事求是、實事求是、獨獨立地完成立地完成實驗報告實驗報告細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗實驗報告格式實驗報告格式班級、姓名、學(xué)號、日期班級、姓名、學(xué)號、日期實驗項目實驗項目實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康膶嶒炘韺嶒炘韺嶒炂鞑膶嶒炂鞑?實驗材料實驗材料,實驗試劑實驗試劑,實驗儀器實驗儀器)實驗步驟實驗步驟實驗結(jié)果實驗結(jié)果（重點）（重點）分析和討論分析和討論（重點）（重點）參考文獻參考文獻實驗一實驗一、細胞質(zhì)流動及其影響因素、細胞質(zhì)流動及其影響因素實驗二實驗二、葉綠體的分離

4、與熒光觀察、葉綠體的分離與熒光觀察實驗三實驗三、線粒體的制備與活性鑒定、線粒體的制備與活性鑒定實驗四實驗四、細胞膜的滲透性與植物液泡系的觀察細胞膜的滲透性與植物液泡系的觀察實驗五實驗五、細胞的凝集反應(yīng)與細胞融合、細胞的凝集反應(yīng)與細胞融合 實驗六實驗六、動植物細胞骨架的觀察、動植物細胞骨架的觀察實驗七實驗七、細胞吞噬作用和細胞中過氧化物酶的顯示、細胞吞噬作用和細胞中過氧化物酶的顯示實驗八實驗八、電子顯微鏡演示、電子顯微鏡演示細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗安排安排第第2-9周周36學(xué)時學(xué)時實驗一實驗一細胞質(zhì)流動及其影響因素細胞質(zhì)流動及其影響因素細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗觀察植物細胞質(zhì)

5、流動現(xiàn)象觀察植物細胞質(zhì)流動現(xiàn)象了解影響細胞質(zhì)流動的因素了解影響細胞質(zhì)流動的因素實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康募毎飳W(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗實驗原理實驗原理在多種植物的細胞中都能觀察到植物在多種植物的細胞中都能觀察到植物細細胞質(zhì)流動胞質(zhì)流動現(xiàn)象，它是現(xiàn)象，它是細胞活動強弱的重細胞活動強弱的重要指標要指標。細胞質(zhì)流動現(xiàn)象的產(chǎn)生，是細胞骨架中細胞質(zhì)流動現(xiàn)象的產(chǎn)生，是細胞骨架中微絲肌動蛋白與肌球蛋白相互滑動的結(jié)微絲肌動蛋白與肌球蛋白相互滑動的結(jié)果。果。細胞質(zhì)流動要消耗能量，受各種因素諸細胞質(zhì)流動要消耗能量，受各種因素諸如溫度、滲透壓及各種離子的影響。如溫度、滲透壓及各種離子的影響。細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗引起細胞

6、質(zhì)流動的因素引起細胞質(zhì)流動的因素內(nèi)因內(nèi)因微絲束（肌動蛋白纖維）、肌球蛋白、微絲束（肌動蛋白纖維）、肌球蛋白、atp外因外因物理：溫度、光、機械刺激物理：溫度、光、機械刺激化學(xué)：化學(xué)： ph、電解質(zhì)、非電解質(zhì)、滲透壓、電解質(zhì)、非電解質(zhì)、滲透壓、呼吸抑制劑呼吸抑制劑細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗細胞質(zhì)流動的主要形式細胞質(zhì)流動的主要形式細胞質(zhì)環(huán)流：細胞質(zhì)環(huán)流：在液泡發(fā)達的植物在液泡發(fā)達的植物(如黑藻、如黑藻、 輪藻、伊樂藻輪藻、伊樂藻)細細胞中，細胞質(zhì)成薄層沿著細胞膜以一定的速度和方向循環(huán)流動。胞中，細胞質(zhì)成薄層沿著細胞膜以一定的速度和方向循環(huán)流動。這種不斷地循環(huán)流動稱為細胞質(zhì)環(huán)流。這種不斷地循環(huán)流動

7、稱為細胞質(zhì)環(huán)流。 穿梭流動：穿梭流動：穿梭流動是細胞質(zhì)流動的另一種形式，它與環(huán)流穿梭流動是細胞質(zhì)流動的另一種形式，它與環(huán)流不同，是向相反方向來回穿梭。由于流動方向在一定時間內(nèi)來回不同，是向相反方向來回穿梭。由于流動方向在一定時間內(nèi)來回交換，因此叫穿梭流動。交換，因此叫穿梭流動。 布朗運動：布朗運動：在活細胞中可以看到細胞質(zhì)內(nèi)的許多小顆粒在無在活細胞中可以看到細胞質(zhì)內(nèi)的許多小顆粒在無規(guī)則地跳動著，這在暗視野顯微鏡下觀察更為明顯，叫做布朗運規(guī)則地跳動著，這在暗視野顯微鏡下觀察更為明顯，叫做布朗運動。布朗運動的產(chǎn)生除了與微絲的存在有關(guān)外，還與微梁網(wǎng)格的動。布朗運動的產(chǎn)生除了與微絲的存在有關(guān)外，還與微

8、梁網(wǎng)格的收縮有關(guān)。收縮有關(guān)。細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗實驗材料試劑儀器實驗材料試劑儀器 實驗材料實驗材料：紫鴨趾草花絲，黑藻（水王：紫鴨趾草花絲，黑藻（水王蓀、輪葉黑藻）葉。蓀、輪葉黑藻）葉。 細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗實驗材料試劑儀器實驗材料試劑儀器實驗試劑：實驗試劑：0.17 mol/l, 0.35 mol/l, 1 mol/l 氯化鈉氯化鈉0.17 mol/l， 0.35 mol/l , 1 mol/l 丙二酸鈉丙二酸鈉1 mmol/l 2,4二硝基酚二硝基酚(dinitrophenol, dnp）1 mol/l 甘露醇甘露醇實驗儀器：顯微鏡，載玻片，蓋玻片，尖頭鑷實驗儀器：顯微鏡，

9、載玻片，蓋玻片，尖頭鑷子，刀片子，刀片, ,吸水紙等吸水紙等細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗丙二酸鈉丙二酸鈉結(jié)構(gòu)簡式：結(jié)構(gòu)簡式：naooc-ch2-coona丙二酸在結(jié)構(gòu)上與琥珀酸（丁二酸）相似，可與琥珀酸競爭和琥珀酸脫氫酶的活性中心結(jié)合。若琥珀酸脫氫酶與丙二酸等結(jié)合，則不能再與琥珀酸結(jié)合而使之脫氫，產(chǎn)生抑制作用，且抑制程度取決于琥珀酸與抑制劑在反應(yīng)體系中濃度的相對比例，所以這種抑制是競爭性抑制競爭性抑制。細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗乙酰乙酰coa三羧酸三羧酸循環(huán)循環(huán)電子傳遞電子傳遞（氧化）（氧化）磷酸化磷酸化脂肪脂肪多糖多糖蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)脂肪酸、甘油脂肪酸、甘油葡萄糖、葡萄糖、其它單糖其它單糖氨基

10、酸氨基酸大分子降解成基本結(jié)構(gòu)單位小分子化合物分解成共同的中間產(chǎn)物（如丙酮酸、乙酰coa等共同中間產(chǎn)物進入三羧酸循環(huán),氧化脫下的氫由電子傳遞鏈傳遞生成h2o，釋放出大量能量，其中一部分通過磷酸化儲存在atp中。+pi生物氧化的三個階段生物氧化的三個階段細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗三羧酸循環(huán)三羧酸循環(huán)細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗2,4-二硝基酚（二硝基酚（dnp） 結(jié)構(gòu)式結(jié)構(gòu)式 dnp是氧化磷酸化的是氧化磷酸化的解偶聯(lián)劑解偶聯(lián)劑 ，解偶聯(lián)劑使氧化和磷，解偶聯(lián)劑使氧化和磷酸化脫偶聯(lián)，酸化脫偶聯(lián)，氧化仍可以進行，而磷酸化不能進行氧化仍可以進行，而磷酸化不能進行，解偶聯(lián)劑作用的本質(zhì)是增大線粒體內(nèi)膜對解偶

11、聯(lián)劑作用的本質(zhì)是增大線粒體內(nèi)膜對h+的通透性，的通透性，消除消除h+的跨膜梯度，因而的跨膜梯度，因而無無atp生成生成，解偶聯(lián)劑只影，解偶聯(lián)劑只影響氧化磷酸化而不干擾底物水平磷酸化，解偶聯(lián)劑的響氧化磷酸化而不干擾底物水平磷酸化，解偶聯(lián)劑的作用使氧化釋放出來的能量全部以熱的形式散發(fā)。作用使氧化釋放出來的能量全部以熱的形式散發(fā)。 2,4-二硝基苯酚二硝基苯酚(dnp)等藥劑因阻礙磷酸化等藥劑因阻礙磷酸化(形成高能磷形成高能磷酸鍵酸鍵)，會抑制或減慢細胞質(zhì)流動會抑制或減慢細胞質(zhì)流動 細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗細胞質(zhì)流動及其影響因素載玻片，滴載玻片，滴12滴蒸餾水滴蒸餾水 紫鴨趾草雄蕊花紫鴨趾草雄蕊

12、花絲絲(黑藻黑藻嫩葉嫩葉)裝片裝片低倍物鏡低倍物鏡(10(10) )觀察觀察高倍物鏡高倍物鏡(40(40) )觀察觀察吸水紙吸干水吸水紙吸干水加加試劑試劑記錄記錄細胞質(zhì)停止流動的時間細胞質(zhì)停止流動的時間 吸水吸水紙吸干紙吸干加加清水清水 流動是否能恢復(fù)流動是否能恢復(fù) 實驗步驟實驗步驟細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗實驗設(shè)計：實驗設(shè)計：不同因素對細胞質(zhì)流動的影響不同因素對細胞質(zhì)流動的影響滲透壓：0.17 mol/l0.35mol/l nacl1.0mol/lnacl溶液（高滲）1 mol/l 甘露醇甘露醇生物氧化抑制劑： 1mmol/l 2,4-二硝基酚（解偶聯(lián)劑） 0.17、0.35、1.0mol

13、/l丙二酸鈉溶液（競爭性抑制劑） 注意：高濃度丙二酸鈉有雙重影響細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗黑藻葉紫鴨趾草花絲毛 實驗結(jié)果實驗結(jié)果細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗注意事項注意事項選選 材（材（老與嫩葉）細胞質(zhì)流動的形式與方向細胞質(zhì)流動的形式與方向細胞質(zhì)流動的快慢（未加試劑前）細胞質(zhì)流動的快慢（未加試劑前）加入試劑量（當(dāng)裝片中的水份沒完全吸加入試劑量（當(dāng)裝片中的水份沒完全吸干，則影響加入試劑的實際濃度）干，則影響加入試劑的實際濃度）計時計時細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗實驗報告實驗報告1.繪制紫鴨趾草雄蕊花絲毛繪制紫鴨趾草雄蕊花絲毛(或黑藻或黑藻)細胞細胞質(zhì)流動圖質(zhì)流動圖 (標明流動方向) 。2.記錄

14、各種因素對細胞質(zhì)流動影響的結(jié)記錄各種因素對細胞質(zhì)流動影響的結(jié)果果(如流動停止的時間與流動能否恢復(fù)如流動停止的時間與流動能否恢復(fù))，并分析原因并分析原因(可以表格形式完成可以表格形式完成)。 細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗記錄加入各種化學(xué)試劑后細胞質(zhì)記錄加入各種化學(xué)試劑后細胞質(zhì)流動停止的時間，并分析原因。流動停止的時間，并分析原因。nacl丙二酸鈉dnpdnp甘露醇停止流動的時間加水是否恢復(fù)分析原因細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗思考題1 如何理解細胞質(zhì)流動原理？如何理解細胞質(zhì)流動原理？2 胞質(zhì)環(huán)流有何特點胞質(zhì)環(huán)流有何特點? 為什么為什么?細胞生物學(xué)實驗細胞生物學(xué)實驗滲透壓計算稀溶液的稀溶液的滲透壓滲透壓可根據(jù)范荷夫公式計算：可根據(jù)范荷夫公式計算： p=icrt參數(shù)說明參數(shù)說明c：溶液的摩爾濃度；：溶液的摩爾濃度；r：氣體常數(shù)（：氣體常數(shù)（0.083升升巴摩爾巴摩爾-1度度-1）；）；i：滲透常數(shù)，：滲透常數(shù)，i=1+（n-1）；n：1分子解離后