第六章第一節(jié)2

1、志賀氏菌的檢驗 志賀氏菌屬 于腸桿菌科志賀氏菌屬 ,根據(jù)生化特性不同將其分為四個群: a群-痢疾志賀氏菌；b群-福氏志賀氏菌 c群-鮑氏志賀氏菌；d群-宋內氏志賀氏菌 志賀氏菌屬的細菌統(tǒng)稱痢疾桿菌.臨床上能引起痢疾癥狀的病原微生物很多,如志賀氏菌屬 、沙門氏菌屬、變形桿菌屬、埃希氏菌屬等，還有阿米巴原蟲及病毒等。其中以志賀氏菌屬 引起的細菌性痢疾最為常見，是細菌性痢疾的主要病原菌。通過食品和飲水傳播，引起人的疾病。人對志賀氏菌的易感性很高，人是它的唯一宿主。所以在食物和飲用水的衛(wèi)生檢驗時，常以是否含有志賀氏菌作為指標。志賀氏菌的檢驗一、實驗目的 了解志賀氏菌生物學特性及原理 掌握志賀氏菌檢驗方

2、法 檢驗志賀氏菌的方法很多，但食品衛(wèi)生微生物檢驗具有法規(guī)性，檢驗必須采用國家標準規(guī)定的方法。近年來發(fā)展了許多快速檢驗的新方法，如技術等。我們下面介紹的方法即是國家標準規(guī)定的方法。要弄清檢驗原理，首先需要了解志賀氏菌的生物學特性。 志賀氏菌的檢驗二、志賀氏菌的生物學特性 1、形態(tài)與染色：革蘭氏陰性無芽胞桿菌，無莢膜，無鞭毛，不運動，有菌毛。 革蘭氏陰性鮑氏志賀菌志賀氏菌的菌毛 志賀氏菌掃描電鏡照片志賀氏菌掃描電鏡照片志賀氏菌的透射電鏡照片二、志賀氏菌的生物學特性2、志賀氏菌的培養(yǎng)特性： 需氧或兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長，最適溫度為37，最適ph為6.4-7.8。 37培養(yǎng)18-

3、24小時后菌落呈圓形、微凸、光滑濕潤、無色、半透明、邊緣整齊，直徑約2mm，宋內氏菌菌落一般較大，較不透明，并常出現(xiàn)扁平的粗糙型菌落。 在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長，一般不形成沉淀，無菌膜形成。菌落形態(tài)學 關注菌落的形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。弗氏志賀氏菌的菌落特征 宋內志賀菌乳糖遲發(fā)酵菌株在麥康凱平板上的菌落特征細菌在肉湯培養(yǎng)基中的生長 均勻渾濁生長是什么意思？ 二、志賀氏菌的生物學特性3、志賀氏菌的生化特性： 本菌屬都能分解葡萄糖，產酸不產氣。大多不發(fā)酵乳糖，僅宋內氏菌遲緩發(fā)酵乳糖。靛基質產生不定，甲基紅陽性，vp試驗陰性，不分解尿素，不產生h2s。與腸

4、桿菌科各屬細菌相比較，志賀氏菌的主要鑒別特征為不運動，對各種糖的利用能力較差，并且在含糖的培養(yǎng)基內一般不形成可見氣體。根據(jù)生化反應可進行初步分類。不發(fā)酵乳糖和發(fā)酵乳糖菌落二、志賀氏菌的生物學特性4、志賀氏菌的抗原構造與分型： 志賀氏菌屬細菌的抗原結構由菌體抗原（o）及表面抗原（k）組成。主要抗原有三種：型特異性抗原、群特異性抗原、表面抗原（k抗原）。 根據(jù)抗原構造的不同，按最新國際分類法，將本屬細菌分為四個群、39個血清型（包括亞型） 附：志賀氏菌抗原分類。 附:志賀氏菌抗原分類 抗原構造與分型：志賀氏菌屬細菌的抗原結構由菌體抗原（o）及表面抗原（k）組成。主要抗原有三種： 型特異性抗原：型多

5、糖抗原為菌體抗原的一種，是光滑型菌株所含有的重要抗原。當菌株變?yōu)榇植谛蜁r，此抗原也常隨之消失，各菌型所含的型抗原不同，可用于區(qū)別菌種的型別。 群特異性抗原：為光滑型菌株的次要抗原，也是菌體抗原的一種。特異性較低，常在數(shù)種近似的菌內出現(xiàn)。在福氏菌株中，由于所含群抗原不同，可將某些菌型分為多種亞型，如福氏菌2型，根據(jù)群抗原不同，可分成2a、2b兩個亞型。 表面抗原（k抗原）：在新分離的某些菌株菌體表面含有此種抗原。不耐熱，加熱1001小時即被破壞。具有此種抗原的菌株，可阻止菌體抗原與相應免疫血清發(fā)生凝集。志賀氏菌屬的四個群 根據(jù)抗原構造的不同，按最新國際分類法，將本屬細菌分為四個群、39個血清型（

6、包括亞型） a群：也稱志賀氏菌群，有10個血清型。不發(fā)酵甘露醇，無鳥氨酸脫羧酶，與其他各群細菌無血清學聯(lián)系。 b群：也稱福氏菌群，已有13個血清型（包括亞型和變種）。最近又發(fā)現(xiàn)3個亞型（1c、4c、5b）。發(fā)酵甘露醇，無鳥氨酸脫羧酶?？乖Y構較復雜，各型間有交叉凝集。每一福氏菌型具有二種抗原，即型特異性抗原和群抗原，前者只存在于同型菌株中，后者有許多種，存在于福氏各菌型中。例如福氏1b型除含有1型特異性抗原外，尚含有4、6群抗原。 c群：也稱鮑氏菌群，有15個血清型，分解甘露醇，無鳥氨酸脫羧酶。各型內無交叉凝集。 d群：也稱宋內氏菌群，僅有一個血清型。分解甘露醇，有鳥氨酸脫羧酶，遲緩發(fā)酵乳糖。

7、有(s相光滑菌落)、相(r粗糙菌落)之分。 福氏志賀菌在he瓊脂平板上的菌落特征藍綠色大腸埃希菌紅色較大二、志賀氏菌的生物學特性5、志賀氏菌的抵抗力： 志賀氏菌屬與沙門氏菌屬及其他腸道桿菌相比，對理化因素抵抗力較低，對酸較敏感，必須使用含有緩沖劑的培養(yǎng)基。在外界環(huán)境中的生存力，以宋內氏最強，福氏菌次之，痢疾志賀氏菌最弱。一般在潮濕土壤中能存活34天，37水中存活20天，在糞便內（室溫）存活11天。日光直接照射30分鐘，56-6010分即被殺死，對高溫和化學消毒劑很敏感，1%石炭酸中15-30分鐘即被殺死，對氯霉素、磺胺類、鏈霉素敏感，但易產生耐藥性。二、志賀氏菌的生物學特性6、志賀氏菌的變異性

8、： s-r型變異：菌落可由光滑型變?yōu)榇植谛?，同時常伴有生化反應、抗原構造和致病性的變異。在機體內，尤其在慢性患者和恢復期患者，志賀氏菌可發(fā)生變異而失去原來的生化和抗原特性，成為不典型菌株。但其中部分不典型菌株，可通過10%膽汁肉湯等返祖為典型菌株。故在慢性患者或帶菌者糞便檢查時，對這類菌株要特別注意，必須多次反復檢查。因這對傳染源的發(fā)現(xiàn)及控制有重要意義。二、志賀氏菌的生物學特性 耐藥性變異：自從廣泛使用抗菌素以來，志賀氏菌的耐藥菌株 不斷增加，給防治工作帶來許多困難。國內部分地區(qū)報道（1972-1974），志賀氏菌對四環(huán)素的耐藥率達74%、氯霉素73.6-97%、鏈霉素84-98%、金霉素75

9、-100%、磺胺類97-100%，可見國內對常用幾種抗菌素的耐藥率相當高。二、志賀氏菌的生物學特性 毒力變異與其他變異：1963年南斯拉夫mel氏首先創(chuàng)用依賴鏈霉素的志賀氏菌株（依鏈sd株）口服預防痢疾。sd株是一株必須有鏈霉素存在下才能生長的菌株，其毒力減弱但仍保持免疫原性。美國以天然變異無毒株與大腸桿菌雜交而獲得的mh株制成疫苗，其免疫效果和穩(wěn)定性均較sd株差。我國正大力利用變異方法通過動物和藥物處理等尋找安全有效可供口服的痢疾桿菌活菌苗，并已取得初步成效。 二、志賀氏菌的生物學特性7、志賀氏菌的致病性 志賀氏菌引起的細菌性痢疾，主要通過消化道途徑傳播。根據(jù)宿主的健康狀況和年齡，只需少量病

10、菌（至少為10個細胞）進入，就有可能致病。 致病因素：志賀氏菌的致病作用，主要是侵襲力、菌體內毒素、個別菌株能產生外毒素。二、志賀氏菌的生物學特性 侵襲力：志賀氏菌進入大腸后，由于菌毛的作用粘附于大腸粘膜的上皮細胞上，繼而進入上皮細胞并在內繁殖，擴散至鄰近細胞及上皮下層。由于毒素的作用，上皮細胞死亡，粘膜下發(fā)炎，并有毛細血管血栓形成以至壞死、脫落，形成潰瘍。志賀氏菌一般不侵犯其他組織，偶爾可引起敗血癥。目前認為不論是產生外毒素的還是只有內毒素的志賀氏菌，必須侵入腸壁才能致病。因此，對粘膜組織的侵襲力是決定致病力的主要因素。 二、志賀氏菌的生物學特性 內毒素：志賀氏菌屬中各菌株都有強烈的內毒素，

11、作用于腸壁，使通透性增高，從而促進毒素的吸收。繼而作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)，引起臨床上一系列毒血癥癥狀，如發(fā)熱、神志障礙，甚至中毒性休克。毒素破壞粘膜，形成炎癥、潰瘍，呈現(xiàn)典型的痢疾膿血便。毒素作用于腸壁植物神經(jīng)，使腸道功能紊亂，腸蠕動共濟失調和痙攣，尤其直腸括約肌最明顯，因而發(fā)生腹痛、里急后重等癥狀。 二、志賀氏菌的生物學特性 外毒素：痢疾志賀氏菌1型及部分2型（斯密茲痢疾桿菌）菌株能產生強烈的外毒素。為蛋白質，不耐熱，75-801小時即可破壞。其作用是使腸粘膜通透性增加，并導致血管內皮細胞損害。外毒素經(jīng)甲醛或紫外線處理可脫毒成類毒素，能刺激機體產生相應的抗毒素。一般認為具有外毒素的志

12、賀氏菌引起的痢疾比較嚴重。 二、志賀氏菌的生物學特性 志賀氏菌引起的細菌性痢疾可分為兩類: a、急性細菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型。 b、慢性細菌性痢疾：又分慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型三型。 附:志賀氏菌引起的細菌性痢疾分類 志賀氏菌引起的細菌性痢疾可分為兩類6型: a、急性細菌性痢疾急性細菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型。 急性典型菌痢急性典型菌痢癥狀典型，有腹痛腹瀉、膿血粘便、里急后重、發(fā)熱等癥狀。各型菌都可引起，以志賀氏菌引起的較重，宋內氏菌引起的較輕。經(jīng)治療，預后良好。如治療不徹底，可轉為慢性。 急性非典型菌痢急性非典型菌痢癥狀不典型，易診斷錯誤延誤治療，常導致帶菌或慢性發(fā)展。 急性中毒性菌痢急性中毒性菌痢小兒多見，各型菌都可發(fā)生。中毒性菌痢一系列的病理生理變化，主要是內毒素造成機體微循環(huán)障礙的結果。導致內臟淤血、周圍循環(huán)衰竭（休克），主要功能器官灌注不足，發(fā)生心力衰竭、腦水腫，急性腎功能衰竭。嚴重微循環(huán)障礙，再加上內毒素損傷血管內皮細胞、激活凝血因子等，而發(fā)生彌漫性血管內凝血（dic）。附:志賀氏菌引起的細菌性痢疾分類 b、慢性細菌性痢疾：又分慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型三型。 慢性遷延型，通