細胞的形態(tài)與記數(shù)

1、目的與要求目的與要求1.初步掌握臨時制片技術(shù)和顯微繪圖的方法；初步掌握臨時制片技術(shù)和顯微繪圖的方法；2.熟悉光鏡下動、植物細胞的基本形態(tài)、結(jié)熟悉光鏡下動、植物細胞的基本形態(tài)、結(jié)構(gòu)；構(gòu)；3. 掌握活細胞計數(shù)的使用方法。掌握活細胞計數(shù)的使用方法。4.掌握顯微測微尺的使用方法。掌握顯微測微尺的使用方法。臨時制片方法及細胞形態(tài)的觀察臨時制片方法及細胞形態(tài)的觀察（一）人口腔黏膜上皮細胞制片與觀察（一）人口腔黏膜上皮細胞制片與觀察取一載玻片，夾持載玻片兩端，用清潔紗取一載玻片，夾持載玻片兩端，用清潔紗布擦凈；布擦凈；在載玻片中央滴在載玻片中央滴1滴滴0 .5%次甲基藍染液；次甲基藍染液；用消毒牙簽的鈍端輕

2、輕刮取頰部內(nèi)側(cè)的口用消毒牙簽的鈍端輕輕刮取頰部內(nèi)側(cè)的口腔黏膜上皮細胞；腔黏膜上皮細胞；將牙簽在載玻片的染液中來回滾動數(shù)次；將牙簽在載玻片的染液中來回滾動數(shù)次；染色染色2-3分鐘，蓋上蓋玻片，注意不要有分鐘，蓋上蓋玻片，注意不要有氣泡產(chǎn)生；氣泡產(chǎn)生；觀察。先低倍，再高倍。細胞核被染成深觀察。先低倍，再高倍。細胞核被染成深藍色。藍色。（二）洋蔥表皮細胞的制片與觀察（二）洋蔥表皮細胞的制片與觀察取一擦凈的載玻片，滴取一擦凈的載玻片，滴1滴滴1%碘液；碘液；將洋蔥嫩莖用小刀切成小塊，取將洋蔥嫩莖用小刀切成小塊，取1塊肉塊肉質(zhì)鱗葉，用鑷子在其內(nèi)表面輕輕撕下一質(zhì)鱗葉，用鑷子在其內(nèi)表面輕輕撕下一小塊表皮，再

3、用剪刀剪成小塊，置于載小塊表皮，再用剪刀剪成小塊，置于載玻片的染液中鋪平；玻片的染液中鋪平；染色染色2-3分鐘，蓋上蓋玻片；分鐘，蓋上蓋玻片；先低倍，再高倍。細胞核被染成深黃色。先低倍，再高倍。細胞核被染成深黃色。細細 胞胞 計計 數(shù)數(shù)細胞計數(shù)的原理細胞計數(shù)的原理 細胞計數(shù)時，先將培養(yǎng)細胞或血細胞細胞計數(shù)時，先將培養(yǎng)細胞或血細胞稀釋成細胞懸液，然后將細胞懸液滴入細稀釋成細胞懸液，然后將細胞懸液滴入細胞計數(shù)板內(nèi)，計數(shù)計數(shù)板上計數(shù)室四大格胞計數(shù)板內(nèi)，計數(shù)計數(shù)板上計數(shù)室四大格內(nèi)的細胞數(shù)。根據(jù)計數(shù)室的容積及稀釋倍內(nèi)的細胞數(shù)。根據(jù)計數(shù)室的容積及稀釋倍數(shù)，即可計算出細胞濃度。數(shù)，即可計算出細胞濃度。1.制

4、備血細胞懸液制備血細胞懸液 取取1只乙醚麻醉過的蟾蜍，心臟取血只乙醚麻醉過的蟾蜍，心臟取血1ml，用，用ringer液稀釋一定倍數(shù)制成液稀釋一定倍數(shù)制成細胞懸液；同時用蟾蜍血制備血涂細胞懸液；同時用蟾蜍血制備血涂片，室溫晾干備用；片，室溫晾干備用；2 . 熟悉血細胞計數(shù)板熟悉血細胞計數(shù)板 血細胞計數(shù)板呈長方形，有血細胞計數(shù)板呈長方形，有2個計數(shù)室。每個個計數(shù)室。每個計數(shù)室分為計數(shù)室分為9個大正方格，每個大格邊長個大正方格，每個大格邊長1 mm,計數(shù)室的底與蓋玻片間的距離為計數(shù)室的底與蓋玻片間的距離為0.1mm，即每，即每大格的容積為大格的容積為1mm1mm 0.1mm =0.1mm3 四角的每

5、個大格被分為四角的每個大格被分為16個中格；中央的大格個中格；中央的大格被分為被分為25個中格，每個中格被分為個中格，每個中格被分為16個小格。個小格。3. 滴片滴片 將蓋玻片擦凈，蓋在血球計數(shù)板槽上，將蓋玻片擦凈，蓋在血球計數(shù)板槽上，取制備好的蟾蜍血細胞懸液取制備好的蟾蜍血細胞懸液1滴滴于血球滴滴于血球計數(shù)板的蓋玻片一側(cè)邊緣，讓細胞懸液計數(shù)板的蓋玻片一側(cè)邊緣，讓細胞懸液自然流入計數(shù)室內(nèi)。注血細胞懸液不可自然流入計數(shù)室內(nèi)。注血細胞懸液不可滴得過多，如溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡必滴得過多，如溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡必須重做，否則將影響計數(shù)結(jié)果。須重做，否則將影響計數(shù)結(jié)果。4. 計計 數(shù)數(shù) 在低倍鏡下數(shù)出計

6、數(shù)板上計數(shù)室四角大在低倍鏡下數(shù)出計數(shù)板上計數(shù)室四角大格中的細胞數(shù)，如細胞壓在格線上時，格中的細胞數(shù)，如細胞壓在格線上時，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。5. 細胞濃度計算細胞濃度計算 將四大格的細胞總數(shù)除以將四大格的細胞總數(shù)除以4，得出平均每大格的細，得出平均每大格的細胞數(shù)，每大格的容積為胞數(shù)，每大格的容積為0.1mm3 ，乘以，乘以10000即為即為1000mm3（1ml）。）。 不同稀釋倍數(shù)細胞懸液的細胞濃度可用下式計算：不同稀釋倍數(shù)細胞懸液的細胞濃度可用下式計算： 細胞濃度（細胞數(shù)細胞濃度（細胞數(shù)/ml)=( 四大格的細胞數(shù)四大格的細胞數(shù)/4）10000 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)

7、 應(yīng)用顯微鏡的成像原理，同時借助顯微鏡的鏡臺測微尺和目鏡測微尺，兩尺配合使用，進行測量和運算，得出細胞的大小顯微測量的原理物鏡測微尺目鏡測微尺測微尺的使用操作 1. 卸下目鏡的上透鏡，將目鏡測微尺有刻度一面向下裝在目鏡鏡面上，再旋上目鏡的上透鏡。2. 將鏡臺測微尺有刻度一面朝上放在載物臺上夾好，使測微尺刻度位于視野中央。調(diào)焦至看清鏡臺測微尺的刻度。3. 小心移動鏡臺測微尺和目鏡測微尺(如目鏡測微尺刻度模糊，可轉(zhuǎn)動目鏡上透鏡進行調(diào)焦)，使兩尺左邊的“0”點一直線重合，然后由左向右找出兩尺另一次重復(fù)的直線(圖)。4.記錄兩條重合線間目鏡測微尺和鏡臺測微尺的格數(shù)。按下式計算目鏡測微尺每格的長度等于多

8、少m目鏡測微尺每格的長度/ m=鏡臺測微尺的格數(shù)/目鏡測微尺的格數(shù) 目鏡測微尺量測倍率比照表目鏡測微尺量測倍率比照表 細胞生物學(xué)實驗繪圖方法與要求 1在仔細觀察的基礎(chǔ)上，選擇典型結(jié)構(gòu)進行描繪，要求真實、準確（注意各部結(jié)構(gòu)的比例關(guān)系）。2用鉛筆繪圖，線條要明確清晰，圖的深淺明暗一律以點的疏密來表示，點要圓而一致，不得用涂暗影或進行其他美術(shù)加工。3各部結(jié)構(gòu)名稱要在一側(cè)引直線注明。各引線要平行不得交叉。4每幅圖的大小、位置在紙面上必須安排得當并注意紙面的清潔。實驗報告實驗報告在低倍鏡下數(shù)出計數(shù)板四角四大格中血細胞數(shù)，然后取下蓋玻片，將血細胞記數(shù)在低倍鏡下數(shù)出計數(shù)板四角四大格中血細胞數(shù)，然后取下蓋玻片

9、，將血細胞記數(shù)板沖洗干凈，重新滴片、記數(shù)，共三次。取板沖洗干凈，重新滴片、記數(shù)，共三次。取3次記數(shù)的平均數(shù)代入公式計算出結(jié)次記數(shù)的平均數(shù)代入公式計算出結(jié)果。果。一、分別求出使用低倍鏡一、分別求出使用低倍鏡(10x)，高倍鏡，高倍鏡(40x)時目鏡測微尺每格代表的長度：時目鏡測微尺每格代表的長度： 低倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度低倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度= xlo(m)= m 高倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度高倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度= xlo(m)= m 二、分別繪制所觀察的二、分別繪制所觀察的高倍鏡下人口腔黏膜上皮細胞高倍鏡下人口腔黏膜上皮細胞并注明基本結(jié)構(gòu)。并注明基本結(jié)構(gòu)。 三三、用測微尺測量不同材料各種細胞的大小后，制表格表示測量結(jié)果用測微尺測量不同材料各種細胞的大小后，制表格表示測量結(jié)果四四、計算蟾蜍紅細胞的核質(zhì)比例。、計算蟾蜍