標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 檢驗(yàn)?zāi)康膶?duì)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行合理的保存，并規(guī)范合理的使用流程，保證菌株 的性能穩(wěn)定可靠。2 范圍微生物實(shí)驗(yàn)室保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。3 職責(zé)微生物組工作人員正確執(zhí)行本操作規(guī)程。4 術(shù)語(yǔ)和定義4.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株其 特 征 進(jìn) 行 了 分 類(lèi) 和 描 述 ， 有 明 確 的 來(lái) 源 。 ATCC (AmericanTypeCultureCollection )美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌株收藏中心。4.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過(guò)一代轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。4.3 工作菌株標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳代后得到的同種菌株。4.4 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱(chēng)。4.5 質(zhì)控菌株ATCC最佳，但當(dāng)

2、無(wú)法獲得時(shí)可以使用 ATCC演化的菌株或我國(guó)國(guó)家菌種庫(kù)儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。特殊情況，例如定性試驗(yàn)可用已知的菌種作為質(zhì)控菌株。室間 質(zhì)評(píng)的菌株即可。5保存程序5.1標(biāo)準(zhǔn)菌株用1ml無(wú)菌的小牛血清或營(yíng)養(yǎng)肉湯溶解。根據(jù)菌種的生長(zhǎng)特點(diǎn)，接種到新鮮培 養(yǎng)基上選擇適宜的培養(yǎng)條件培養(yǎng)18-24h。酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。5.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化鈉、甘油、純化木。相當(dāng)于20%勺甘油。挑取5環(huán)菌落加入到1ml甘油肉湯中混勻?？琉B(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。 -80 C保存。 除鏈球菌和嗜血桿菌以外細(xì)菌均可使用。保存期限1-5年。成分為脫纖維羊血。挑取 5環(huán)菌落加入到1ml甘油肉湯

3、中混勻。苛養(yǎng)菌可以適 當(dāng)增加菌量。-80 C保存。主要用于保存鏈球菌、嗜血桿菌及厭氧菌。保存期限1-5 年。5.3工作標(biāo)準(zhǔn)菌株由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳代得到的菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株對(duì)多向下傳三代。過(guò)多的傳種會(huì)增加變異的機(jī)會(huì)。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株根據(jù)菌種特點(diǎn)選擇適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng) 條件進(jìn)行培養(yǎng)18-24h即工作標(biāo)準(zhǔn)菌株。儲(chǔ)存在 2-8 C,可放四周。個(gè)別營(yíng)養(yǎng)要 求高的為2周，例如肺炎鏈球菌和嗜血桿菌。使用時(shí)應(yīng)編號(hào)并登記。5.4編號(hào)方法每個(gè)菌的保存管都要有唯一的編號(hào)，簽字筆標(biāo)注，便于查找和管理。來(lái)源數(shù)字意義購(gòu)買(mǎi)的標(biāo)準(zhǔn)困株1501ATCC2592215 年第 1 株 ATCC25922儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)菌株1501ATCC259

4、22-3由1501ATCC25922傳代而來(lái)的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株5.5記錄管理5.5.1菌種應(yīng)有嚴(yán)格的登記。每個(gè)編號(hào)都要有詳細(xì)的記錄包括來(lái)源、傳代、保存方法、使用記錄、使用原因、高壓滅菌記錄等。附表標(biāo)準(zhǔn)菌株記錄表標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株記錄表5.5.2菌種保管應(yīng)有專(zhuān)人負(fù)責(zé)，保存于專(zhuān)用冰箱中，雙人雙鎖，確保菌種安全。 保管人員變動(dòng)時(shí)，必須嚴(yán)格交接手續(xù)。5.5.3各種菌種應(yīng)按規(guī)定時(shí)間接種，注意菌種有無(wú)污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時(shí)， 應(yīng)及時(shí)更換6使用流程標(biāo)準(zhǔn)菌株購(gòu)買(mǎi)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，編號(hào),用完第二天高壓復(fù)蘇接種合適的培養(yǎng)基，孵育性能驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備 匸 挑取典型的菌落到合適的穩(wěn)定劑中，編號(hào),80 C保存，準(zhǔn)備n以后第一天天每天

5、作菌個(gè)新的菌株，作為 重新取一直標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)（備菌株傳種，進(jìn)入日質(zhì)控每周取出一支標(biāo)準(zhǔn) '儲(chǔ)備菌株傳種合適傳代培養(yǎng)物可以作接種傳代培養(yǎng)一次，并Y進(jìn)行純度進(jìn)行純度檢查和生7質(zhì)量。作作為“儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)菌株”每天傳代平板作為第二天的工作標(biāo)保存，按J可以再重復(fù)一周，規(guī)則每天傳代平板作為第行多個(gè)工作標(biāo)存，按J室內(nèi)質(zhì)同上。但一般來(lái)說(shuō)工作形態(tài)是否符合菌種。有沒(méi)有雜菌生長(zhǎng)。菌株不能超過(guò)3代7.2用氧化酶、觸酶、上機(jī)等生化試驗(yàn)，鑒定菌種有沒(méi)有變化7.3如果有污染或懷疑有問(wèn)題時(shí)，應(yīng)準(zhǔn)備新的首次傳代物或者獲取新的標(biāo)準(zhǔn)菌株。8參考文獻(xiàn)序號(hào)唯一性編號(hào)文獻(xiàn)名稱(chēng)9.1ISBN978-7-117-19862-2/R全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第四版 198639.2ISBN978-7-5478-1226-6/R臨床微生物學(xué)診斷與圖解第三版 3959.3GBT