項(xiàng)目五TLC技術(shù)課件

1、項(xiàng)目五TLC技術(shù)薄薄 層層 色色 譜譜 法法TLCTLCThin Layer Chromatography 項(xiàng)目五TLC技術(shù) 科學(xué)家在研究植物葉子的科學(xué)家在研究植物葉子的色素成分時(shí)，將植色素成分時(shí)，將植 物葉子的萃物葉子的萃取物倒入填有取物倒入填有碳酸鈣碳酸鈣的直立玻的直立玻璃管內(nèi)，然后加入璃管內(nèi)，然后加入石油醚石油醚使其使其自由流下，結(jié)果色素中各組分自由流下，結(jié)果色素中各組分互相分離形成各種互相分離形成各種不同顏色的不同顏色的譜帶譜帶。按光譜的命名方式，這。按光譜的命名方式，這種方法因此得名為色譜法。種方法因此得名為色譜法。一、色譜一、色譜項(xiàng)目五TLC技術(shù)在色譜法中，靜止不動(dòng)的一相（固體或液

2、體）稱(chēng)為固在色譜法中，靜止不動(dòng)的一相（固體或液體）稱(chēng)為固定相（定相（stationary phase） ；運(yùn)動(dòng)的一相（一般是氣；運(yùn)動(dòng)的一相（一般是氣體或液體）稱(chēng)為流動(dòng)相（體或液體）稱(chēng)為流動(dòng)相（mobile phase）. 項(xiàng)目五TLC技術(shù)二、薄層色譜構(gòu)成二、薄層色譜構(gòu)成1、固定相、固定相 硅膠硅膠為使用最廣泛的薄層材料為使用最廣泛的薄層材料 氧化鋁氧化鋁有堿性、中性、酸性有堿性、中性、酸性 硅藻土硅藻土為化學(xué)中性吸附劑為化學(xué)中性吸附劑 纖維素纖維素天然多糖類(lèi)天然多糖類(lèi) 聚酰胺聚酰胺為特殊類(lèi)型有機(jī)薄層材料，對(duì)能形成氫鍵的物質(zhì)為特殊類(lèi)型有機(jī)薄層材料，對(duì)能形成氫鍵的物質(zhì)有特別的選擇性有特別的選擇性。

3、項(xiàng)目五TLC技術(shù)2 2、載板玻璃板、載板玻璃板 放在飽和碳酸鈉溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，除去玻璃表面放在飽和碳酸鈉溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干凈，干燥，置干燥器中備的油污。然后充分漂洗干凈，干燥，置干燥器中備用。要求光滑、平整、洗凈后不附水珠。用。要求光滑、平整、洗凈后不附水珠。項(xiàng)目五TLC技術(shù)3 3、黏結(jié)劑、黏結(jié)劑l無(wú)機(jī)黏結(jié)劑石膏（硫酸鈣），添加石膏的無(wú)機(jī)黏結(jié)劑石膏（硫酸鈣），添加石膏的吸附劑以字母吸附劑以字母“G”G”表示。沒(méi)有黏結(jié)劑的吸附表示。沒(méi)有黏結(jié)劑的吸附劑以字母劑以字母“H”H”表示。表示。l有機(jī)黏結(jié)劑有機(jī)黏結(jié)劑羧甲基纖維素鈉（羧甲基纖維素鈉（CMCCMC）、）、淀

4、粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特點(diǎn)淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特點(diǎn)是薄層強(qiáng)度高、使用方便，但不能用濃硫酸是薄層強(qiáng)度高、使用方便，但不能用濃硫酸作顯色劑。作顯色劑。項(xiàng)目五TLC技術(shù)4 4、熒光黏結(jié)劑、熒光黏結(jié)劑 在吸附劑中添加某種熒光指示劑，常用的熒光指示在吸附劑中添加某種熒光指示劑，常用的熒光指示劑劑 在在254nm254nm紫外光下發(fā)藍(lán)色熒光的有鈉熒光素、硫化鎘、紫外光下發(fā)藍(lán)色熒光的有鈉熒光素、硫化鎘、陰極綠等。陰極綠等。 在在366nm366nm有熒光的指示劑如彩藍(lán)等。有熒光的指示劑如彩藍(lán)等。 含有熒光指示劑的商品吸附劑以含有熒光指示劑的商品吸附劑以“F”F”表示，并以下表示，并以

5、下標(biāo)注明其激發(fā)光波長(zhǎng)。例標(biāo)注明其激發(fā)光波長(zhǎng)。例 硅膠硅膠HFHF254254 項(xiàng)目五TLC技術(shù) 薄層板活化（可直接用商品薄層板活化（可直接用商品TLCTLC，不需活化），不需活化） 涂布后的薄層先在室溫下曬干，在使用前置適當(dāng)涂布后的薄層先在室溫下曬干，在使用前置適當(dāng)溫度烘烤一定時(shí)間進(jìn)行活化，然后置干燥器中備溫度烘烤一定時(shí)間進(jìn)行活化，然后置干燥器中備用。不同薄層活化條件略有不同，如：用。不同薄層活化條件略有不同，如： 硅膠硅膠 110 1h110 1h 氧化鋁氧化鋁 110 30min110 30min三三 、TLCTLC操作步驟操作步驟項(xiàng)目五TLC技術(shù)制樣制樣選擇溶劑，并加熱溶解少量樣品（約選

6、擇溶劑，并加熱溶解少量樣品（約0.01g即可）即可）要求選擇溶解樣品的溶劑有高度揮發(fā)性和盡可能要求選擇溶解樣品的溶劑有高度揮發(fā)性和盡可能非極性，否則易使斑點(diǎn)擴(kuò)展。非極性，否則易使斑點(diǎn)擴(kuò)展。項(xiàng)目五TLC技術(shù) 點(diǎn)樣點(diǎn)樣 用酒精燈拉細(xì)的毛細(xì)管蘸取少量樣品溶液點(diǎn)在硅膠板上，用酒精燈拉細(xì)的毛細(xì)管蘸取少量樣品溶液點(diǎn)在硅膠板上， 樣品點(diǎn)應(yīng)盡可能小。樣品點(diǎn)應(yīng)盡可能小。 點(diǎn)樣量應(yīng)適中，過(guò)濃會(huì)引起斑點(diǎn)拖尾，分離度變差，以點(diǎn)樣量應(yīng)適中，過(guò)濃會(huì)引起斑點(diǎn)拖尾，分離度變差，以最小檢測(cè)量的幾倍幾十倍為宜。最小檢測(cè)量的幾倍幾十倍為宜。 采用多次點(diǎn)樣法，第二次點(diǎn)加樣應(yīng)待前一次點(diǎn)樣的溶劑采用多次點(diǎn)樣法，第二次點(diǎn)加樣應(yīng)待前一次點(diǎn)樣

7、的溶劑揮發(fā)后再進(jìn)行。揮發(fā)后再進(jìn)行。 同一快硅膠板上同時(shí)點(diǎn)多個(gè)樣時(shí)，每個(gè)樣需點(diǎn)在同一高同一快硅膠板上同時(shí)點(diǎn)多個(gè)樣時(shí)，每個(gè)樣需點(diǎn)在同一高度度 手工點(diǎn)樣工具：定容玻璃毛細(xì)管（手工點(diǎn)樣工具：定容玻璃毛細(xì)管（1 5ul1 5ul）。）。項(xiàng)目五TLC技術(shù) 展開(kāi)展開(kāi) 多數(shù)采用直線(xiàn)形上行展開(kāi)，薄層板水平角度以多數(shù)采用直線(xiàn)形上行展開(kāi)，薄層板水平角度以7575 為最佳。展開(kāi)距離一般為為最佳。展開(kāi)距離一般為10-15cm10-15cm。直立式層析缸示意圖直立式層析缸示意圖 1-層析缸；層析缸； 2-薄層板薄層板 3-展開(kāi)劑飽和蒸氣；展開(kāi)劑飽和蒸氣；4-展開(kāi)劑展開(kāi)劑 項(xiàng)目五TLC技術(shù) 檢測(cè)檢測(cè) 物理方法物理方法紫外光

8、下顯示熒光或熒光淬滅紫外光下顯示熒光或熒光淬滅項(xiàng)目五TLC技術(shù) 檢測(cè)檢測(cè) 化學(xué)方法化學(xué)方法加化學(xué)試劑顯色，要求顯色穩(wěn)定、持加化學(xué)試劑顯色，要求顯色穩(wěn)定、持久、專(zhuān)屬、靈敏、線(xiàn)性良好。久、專(zhuān)屬、靈敏、線(xiàn)性良好。 斑點(diǎn)定位方法斑點(diǎn)定位方法 碘蒸氣法碘蒸氣法靈敏、簡(jiǎn)便，為通用顯色法。將碘靈敏、簡(jiǎn)便，為通用顯色法。將碘結(jié)晶放在密封的展開(kāi)缸中，碘的升華，使缸內(nèi)充結(jié)晶放在密封的展開(kāi)缸中，碘的升華，使缸內(nèi)充滿(mǎn)紫色的碘蒸氣。將展開(kāi)后的板揮干溶劑置碘缸滿(mǎn)紫色的碘蒸氣。將展開(kāi)后的板揮干溶劑置碘缸中至薄層色譜上出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)。中至薄層色譜上出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)。項(xiàng)目五TLC技術(shù) 保留參數(shù)（保留參數(shù)（RfRf值）計(jì)算值）計(jì)算 概

9、念：用來(lái)表征斑點(diǎn)位置的基本參數(shù)是保留因概念：用來(lái)表征斑點(diǎn)位置的基本參數(shù)是保留因子，通常稱(chēng)作子，通常稱(chēng)作比移值，比移值，用用RfRf表示。表示。 計(jì)算方法：計(jì)算方法：R Rf f=Ls/L=Ls/L原原點(diǎn)點(diǎn)S參參比比樣樣品品LsL（前沿）（前沿）Lr原原點(diǎn)點(diǎn)參參比比樣品樣品前前沿沿項(xiàng)目五TLC技術(shù)四、流動(dòng)相與展開(kāi)體系選擇四、流動(dòng)相與展開(kāi)體系選擇 液液- -固吸附固吸附 在該色譜中，溶質(zhì)的保留和分離選擇性在該色譜中，溶質(zhì)的保留和分離選擇性決定于三個(gè)因素：決定于三個(gè)因素：流動(dòng)相流動(dòng)相溶質(zhì)溶質(zhì)吸附吸附劑劑競(jìng)爭(zhēng)競(jìng)爭(zhēng)項(xiàng)目五TLC技術(shù)1 1、溶劑強(qiáng)度參數(shù)及溶劑選擇、溶劑強(qiáng)度參數(shù)及溶劑選擇 溶劑的強(qiáng)度參數(shù)溶劑

10、的強(qiáng)度參數(shù) 定義：溶劑強(qiáng)度參數(shù)用定義：溶劑強(qiáng)度參數(shù)用表示。流動(dòng)相強(qiáng)度越高，表示。流動(dòng)相強(qiáng)度越高，表示它與吸附劑相互作用力強(qiáng)。溶質(zhì)的表示它與吸附劑相互作用力強(qiáng)。溶質(zhì)的RfRf值就越值就越大。為得到滿(mǎn)意的分離，選用的流動(dòng)相使溶質(zhì)的大。為得到滿(mǎn)意的分離，選用的流動(dòng)相使溶質(zhì)的RfRf值在值在0.3 0.70.3 0.7之間為宜。之間為宜。 溶劑強(qiáng)度也可用其在水中的溶解度參數(shù)溶劑強(qiáng)度也可用其在水中的溶解度參數(shù) 來(lái)表示。來(lái)表示。項(xiàng)目五TLC技術(shù) 一些常用溶劑的溶劑強(qiáng)度與溶解度參數(shù)一些常用溶劑的溶劑強(qiáng)度與溶解度參數(shù) 溶劑溶劑 溶劑溶劑 正己烷正己烷 0.01 7.3 石油醚石油醚 0.02 8.2 苯苯 0

11、.32 9.2 乙醚乙醚 0.38 7.4 二氯甲烷二氯甲烷 0.42 9.6 正丙醇正丙醇 0.82 10.2 正丁醇正丁醇 0.70 / 四氫呋喃四氫呋喃 0.57 9.1 乙酸乙酯乙酸乙酯 0.58 8.6 氯仿氯仿 0.40 9.1 甲乙酮甲乙酮 0.51 / 二氧六環(huán)二氧六環(huán) 0.56 9.8 吡啶吡啶 0.71 10.4 丙酮丙酮 0.50 9.4 乙醇乙醇 0.88 / 乙酸乙酸 1.00 12.4 二甲亞砜二甲亞砜 0.75 12.8 甲醇甲醇 0.95 12.9 乙二醇乙二醇 1.11 14.7 甲酰胺甲酰胺 / 17.9 項(xiàng)目五TLC技術(shù)2 2、溶劑選擇原則、溶劑選擇原則

12、增加溶劑強(qiáng)度，則增加溶劑強(qiáng)度，則RfRf值增大，但可能降低分離能力值增大，但可能降低分離能力 流動(dòng)相中較強(qiáng)組分的體積比小于流動(dòng)相中較強(qiáng)組分的體積比小于5%5%或大于或大于50 % 50 % ，選擇性最，選擇性最大。大。 用乙醚或甲醇代替流動(dòng)相中的一種較強(qiáng)組分，由于形成氫鍵用乙醚或甲醇代替流動(dòng)相中的一種較強(qiáng)組分，由于形成氫鍵可改善選擇性?？筛纳七x擇性。 若出現(xiàn)斑點(diǎn)拖尾，可向流動(dòng)相中加少量水，或降低薄層活性，若出現(xiàn)斑點(diǎn)拖尾，可向流動(dòng)相中加少量水，或降低薄層活性，有利于改善分離。有利于改善分離。項(xiàng)目五TLC技術(shù)藥物鑒別采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法藥物鑒別采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法含量測(cè)定主要用于中藥有效成分的分析含量測(cè)定主要

13、用于中藥有效成分的分析雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查雜質(zhì)對(duì)照品法雜質(zhì)對(duì)照品法高低濃度法高低濃度法藥物標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法藥物標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法五、應(yīng)用五、應(yīng)用項(xiàng)目五TLC技術(shù)v雜質(zhì)檢查方法雜質(zhì)檢查方法 雜質(zhì)對(duì)照品法（雜質(zhì)對(duì)照品法（A A） 供試品自身對(duì)照法（高低濃度法）（供試品自身對(duì)照法（高低濃度法）（B B） 對(duì)照物質(zhì)法（對(duì)照物質(zhì)法（C C） 樣樣 對(duì)對(duì) 樣樣 對(duì)對(duì) 樣樣 對(duì)對(duì)A B C項(xiàng)目五TLC技術(shù)項(xiàng)目五TLC技術(shù)任務(wù)任務(wù)1、檢驗(yàn)?zāi)硺悠返募兌取z驗(yàn)?zāi)硺悠返募兌葮悠窐悠?：溶解少量樣品：溶解少量樣品1進(jìn)行薄層檢測(cè)并計(jì)算進(jìn)行薄層檢測(cè)并計(jì)算Rf值值溶劑：乙醇溶劑：乙醇 展開(kāi)劑：石油醚：乙酸乙酯展開(kāi)劑：石油醚：乙酸乙酯=4：6 （體積比）（體積比） 任務(wù)任務(wù)2 2、混合物的分離、混合物的分離樣品樣品2 2