化學發(fā)光聯(lián)用技術在體內(nèi)藥物分析中的應用PPT課件

1、 人或動物體液體內(nèi)藥物 分析 各組織器官中藥物 分析 代謝物濃度 了解 藥物在體內(nèi)數(shù)量和質(zhì)量的變化 獲得藥代 動力學參數(shù)和轉(zhuǎn)變代謝的方式代謝的途徑 藥物的研究臨床合理應用有助于第1頁/共18頁體內(nèi)藥物分析具有下列特點：樣品復雜，干擾雜質(zhì)多。樣品量少，不易重新獲得被測物濃度或活性極低，可供分析的樣品量少，尤其是在連續(xù)測定過程中，很難再度獲得完全相同的樣品。要求較快提供結(jié)果供臨床用藥監(jiān)護的檢測分析方法。要有一定的儀器設備，實驗室應擁有樣品冷貯、萃取、濃集以及多種檢測條件。工作量大測得數(shù)據(jù)的處理和闡明有時比較困難。第2頁/共18頁 以上體內(nèi)藥物分析的特點給藥物的分離、分析帶來了困難，所以與常規(guī)藥物分

2、析相比，體內(nèi)藥物分析在選擇性、靈敏度方面有更高的要求。 目前為止，關于體內(nèi)藥物分析方法有高效毛細管電泳(HPCE)、免疫分析法、光譜法、色譜法等，現(xiàn)主要介紹化學發(fā)光聯(lián)用技術在體內(nèi)藥物分析中的應用。第3頁/共18頁 儀器設備簡單 操作方便化學發(fā)光 分析快速 分析法 靈敏度高 線性范圍寬 藥物分析中應用廣泛 化學發(fā)光分析法(CL)是根據(jù)化學反應產(chǎn)生的輻射光的強度來確定物質(zhì)含量的分析方法。優(yōu)點：第4頁/共18頁 局限性 目前為止，化學發(fā)光法對藥物制劑的有效成分進行定量測定的研究很多，但對生物樣品如血漿、尿液中的藥物代謝物即體內(nèi)藥物分析的研究卻并不多。這是因為生物樣品成分復雜，若想利用高靈敏度的化學發(fā)

3、光分析法測定生物樣品的痕量藥物及其代謝物就必須先將其從生物樣品中分離出來。這就要求將靈敏度高的化學分析法與具有高分離效率的其他技術聯(lián)合使用或聯(lián)用特異性的反應進行體內(nèi)藥物分析第5頁/共18頁 化學發(fā)光法和其他技術的聯(lián)用在體內(nèi)藥物分析 中的應用主要見下： 高效液相色譜-化學發(fā)光檢測法 毛細管電泳-化學發(fā)光聯(lián)用檢測法 化學發(fā)光免疫分析法 分子印跡-化學發(fā)光法 微流控芯片-化學發(fā)光檢測技術第6頁/共18頁 高效液相色譜-化學發(fā)光檢測法 液相色譜化學發(fā)光分析法(HPLC-CL)是將液相色譜的高效分離與化學發(fā)光的高靈敏特性有效結(jié)合起來的一種分析方法，非常適合于復雜組分中低含量藥物的分析。藥物在體內(nèi)被代謝后

4、，利用液相色譜柱將其與生物樣品的主成分分開，然后將藥物及其代謝物通過某化學發(fā)光體系或?qū)⑵渑c某化學發(fā)光試劑混合，通過檢測體系的化學發(fā)光強度來測量體內(nèi)藥物的含量，進而獲得藥代動力學數(shù)據(jù)。第7頁/共18頁 自首次報道該分析方法以來，人們對HPLC-CL聯(lián)用技術各種液相化學發(fā)光體系進行了廣泛的研究，涉及醫(yī)藥、臨床等多個領域。應用：Sameh Ahmed等利用HPLC-CL聯(lián)用技術測定了人血清中的維生素K及其同系物張琰圖等設計了一個HPLC在線Mn（)化學發(fā)光檢測器，測定了人體血清和尿樣中卡托普利第8頁/共18頁 孫永華等利用RP-HPLC-CL法成功地測定了血樣和尿樣中的鹽酸青藤堿 付愛華等用陽離子交

5、換樹脂作為載體，將釕()聯(lián)吡啶固定在樹脂上，制備成微型柱作為檢測元件，經(jīng)色譜柱分離的雷尼替丁在樹脂微型柱上發(fā)生化學發(fā)光反應，據(jù)此測定了人血液中的雷尼替丁含量。 除了利用HPLC-CL技術研究測定各類藥物的實際生物樣品外，人們也將研制HPLC-CL的商品化檢測儀器作為重要的研究目標。第9頁/共18頁 毛細管電泳毛細管電泳-化學發(fā)光聯(lián)用檢測法化學發(fā)光聯(lián)用檢測法 毛細管電泳(Capillar3y Electrophoresis，CE)分離技術與高效液相色譜法相比，因其分析效率較高，分析速率較快、樣品消耗量少、操作成本低等顯著優(yōu)點，在體內(nèi)藥物分析中也得到了廣泛的應用。但CE的靈敏度卻因其取樣量少，毛細

6、管內(nèi)徑過細等原因相對較差，限制了其應用?；瘜W發(fā)光分析法不用外加光源，因而背景低，可獲得很高的靈敏度，但其主要缺點是選擇性差。將毛細管電泳的高選擇性與化學發(fā)光分析方法的高靈敏度相結(jié)合的毛細管電泳化學發(fā)光聯(lián)用技術(CE-CL)，在擁有高分離效率的同時擁有較高的靈敏度，非常適合于復雜樣品中微量組分的分離測定。到目前為止，多種藥物的體內(nèi)分析均采用了CE-CL檢測技術。第10頁/共18頁 應用應用： 陸樺等根據(jù)在堿性條件下，三聯(lián)吡啶釘在鉑電極上的弱 電化學發(fā)光信號可以被鹽酸甲氯芬酯增敏的現(xiàn)象，建立了一種毛細管電泳電化學發(fā)光法測定人血漿中鹽酸甲氯芬酯的新方法。 康艷輝等利用毛細管電泳-電化學發(fā)光法測定了人

7、尿中的氟派啶醇，檢出限為3.5 ug/L。 梁汝萍等采用帶有柱端電化學發(fā)光(ECL)檢測池的毛細管電泳(CE)法分離并測定了尿液中的鹽酸維拉帕米的含量。 孫漢文等利用毛細管電泳-聯(lián)吡啶釕電化學發(fā)光法同時測定了血漿中的丁卡因與普魯卡因。 第11頁/共18頁 毛細管電泳-化學發(fā)光技術在體內(nèi)藥物分析中具有強大的發(fā)展?jié)摿?，但與其他檢測技術相比較，要成為一種成熟和常規(guī)的分析手段，尚面臨許多困難。實現(xiàn)CE-CL聯(lián)用的主要難點在于化學發(fā)光反應試劑在毛細管檢測口的混合，因此性能良好的接口設計將對CE-CL聯(lián)用發(fā)展具有重要意義。另外，CE-CL儀器集成化的程度還不夠高，尚無法實現(xiàn)自動化操作，儀器商品化的目標還有

8、更長的路要走。第12頁/共18頁 化學發(fā)光免疫分析法化學發(fā)光免疫分析法 化學發(fā)光免疫分析法(Chemiluminescence lmmunoassay，CLIA)是將具有高靈敏度的化學發(fā)光測定技術與高特異性的免疫反應相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。目前CLIA對藥物的檢測主要集中在體內(nèi)藥物分析上。 應用應用： 楊青等利用化學發(fā)光免疫分析法檢測了人血清孕酮 高彬文等利用化學發(fā)光免疫分析法測定了豬尿中萊 克多巴胺殘留 呂干新等則利用化學發(fā)光免疫法成功地檢測了地高辛血藥濃度，為臨床合理使用地高辛提供了可靠依據(jù) 朱壇則對化學發(fā)光免疫分析法在臨床中的應

9、用進展進行了綜述研究。 第13頁/共18頁 目前，國內(nèi)化學發(fā)光免疫分析法免疫系統(tǒng)的研制尚趕不上國外。因此，提高國內(nèi)化學發(fā)光免疫系統(tǒng)的靈敏度和可靠性，研發(fā)新的化學發(fā)光體系將是日后研究的重點；另外，CLIA與其他分離系統(tǒng)如高效液相色譜、毛細管電泳的聯(lián)合使用也是目前化學發(fā)光免疫分析研究的重點方向。第14頁/共18頁 分子印跡技術(MolecularImprintingPolymer, MIP)是一種制備分子印跡聚合物的技術。MIP具各較高的分離性能，與靈敏度高的化學發(fā)光聯(lián)用后便產(chǎn)生了分子印跡化學發(fā)光法(MIP-CL)，該方法可用于復雜樣品中痕量物質(zhì)的測定，尤其對生物樣品的測定效果顯著。目前，分子印跡

10、-化學發(fā)光法廣泛應用于尿樣中多種藥物的分析檢驗，均取得不錯的效果，而對血樣中藥物的測定目前研究的較少，仍存在進一步研究的空間。 分子印跡技術在化學發(fā)光的應用中主要集中在分子印跡-化學發(fā)光傳感器、分子印跡固相萃取-化學發(fā)光分析上。 高靈敏度的化學發(fā)光檢測技術與高選擇性的分子印跡技術的在線聯(lián)用，將拓展化學發(fā)光在復雜樣品痕量分析中的應用，在體內(nèi)藥物分析中將有很好的應用前景。第15頁/共18頁 微流控芯片化學發(fā)光檢測技術微流控芯片化學發(fā)光檢測技術 微流控芯片是將樣品的制備、分離、檢測等過程集中在一塊芯片上，而且是自動化地完成這些過程，目前在化學領域上主要是對生物組分進行檢測，具有強大的發(fā)展前景。CLECL與微流控芯片聯(lián)用是當前化學發(fā)光分析研究的一個新熱點。 應用：應用： Greenway等在酸性Ru(bDy)3 3溶液中加入表面活性劑，以電滲流為驅(qū)動力，利用Ru(bpy)s+化學發(fā)光體系測定了可卡因。 Zhao等采用微芯片CE-ECL系統(tǒng)對尿樣中的林肯霉素進行了檢測，無需前處理，為臨床和制藥領域林肯霉素的