HBV感染者血清IL10水平檢測及臨床意義

1、HBV感染者血清IL-10水平檢測及臨床意義 作者：馬麗娜 王 麟 楊柳絮 劉明社 趙中夫 【摘要】 目的：檢測HBV感染者血清IL-10水平，探討其在HBV持續(xù)感染及肝細(xì)胞損傷過程中的作用。方法：分離54例HBV感染者臨床血清標(biāo)本，其中無癥狀攜帶者21例，慢性乙肝患者33例（輕度12例，中、重度21例）。用雙抗體ELISA夾心法定量檢測血清IL-10水平，以10例健康獻血者的血清為正常對照。結(jié)果：HBV感染者血清IL-10濃度明顯高于正常對照組(P<0.05)；無癥狀攜帶者及中、重度慢性乙肝患者組的明顯高于輕度組(P<0.05)；血清HBV-DNA高載量者明顯高于

2、低載量者 (P<0.05)。結(jié)論：慢性乙肝患者血清IL-10濃度升高與HBV持續(xù)感染、HBV-DNA高載量復(fù)制及肝損傷有關(guān)；無癥狀攜帶者IL-10濃度升高可能與其誘導(dǎo)的免疫耐受有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎病毒無癥狀攜帶者白細(xì)胞介素10 Abstract Objective:To ascertain the significance of serum IL-10 level in patients with Hepatitis B Virus persistent infection.Methods:The serum IL-10 level of 54 patients who

3、had infected with Hepatitis B, including 21 HBV carriers and 33 chronic HBV patients (12 patients with mild degree，21 patients with moderate or serious degree), were detected by ELISA.Serum IL-10 level of 10 health people were detected as control group.Results:The serum IL-10 level in patients with

4、hepatitis B were significantly higher than that in the control group (P<0.05).Both HBV carriers group and patients with moderate or serious degree group were evidently higher than mild degree group (P<0.05);The patients of high virus load group were obviously higher than that of low vi

5、rus load group (P<0.05).Conclusions:The serum IL-10 level in chronic patients was related with Hepatitis B Virus persistent infection, HBV-DNA replication and the damage of liver.The higher serum IL-10 level in HBV carriers may induce immune tolerance. Key words Hepatitis B Virus；HBV carriers

6、；IL-10 機體對HBV的清除主要依賴于細(xì)胞免疫，IL-10是美國學(xué)者于1989年發(fā)現(xiàn)的第一個具有下調(diào)作用的Th2型細(xì)胞因子，IL-10的合成增加可抑制機體細(xì)胞免疫，。HBV感染者類型多樣，無癥狀攜帶者和慢性乙型肝炎患者是其中最主要的人群。本研究對HBV感染者及健康獻血者的血清IL-10進行檢測，以探討其在HBV持續(xù)感染中的意義。 1 材料和方法 1.1 研究對象 54例HBV感染者來自我院傳染科。其中男36例，女18例，年齡6歲60歲，平均年齡33.5歲，無癥狀攜帶者21例, 慢性乙肝患者輕度12例（ALT120 U/L)，中、重度21例（ALT120 U/L)。診斷標(biāo)準(zhǔn)符合1995年北京

7、傳染病及寄生蟲病會議修訂的病毒性肝炎診斷分型標(biāo)準(zhǔn)。所有感染者均排除合并HAV、HCV、HDV、HEV感染。各種肝炎病毒血清標(biāo)志物均為陰性的10例健康獻血者組成正常對照組。 1.2 方法 1.2.1 標(biāo)本采集：取54例HBV感染者和10例健康獻血者清晨空腹外周靜脈血2 mL3 mL，離心后分離血清按每次用量分裝于0.5 mL EP管，-20保存待測。 1.2.2 HBV-DNA載量檢測：美國MJO Pticon熒光定量PCR儀，深圳匹基生物工程股份有限公司生產(chǎn)的FQ-PCR檢測HBV-DNA試劑，并嚴(yán)格按說明書操作。 1.2.3 IL-l0水平檢測：采用ELISA雙抗體夾心法檢測54例HBV感染

8、者和10例健康獻血者血清IL-l0的水平,以pg/mL為單位。IL-10試劑盒由深圳晶美生物有限公司提供。 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS110統(tǒng)計軟件行方差分析，P<0.05為顯著差異。 2 結(jié)果 2.1. HBV感染者血清IL-l0濃度與HBV-DNA復(fù)制水平的關(guān)系(見表1)表1 HBV感染者血清IL-10濃度與ALT水平的關(guān)系*與正常對照組和低載量組相比P<0.05 HBV高載量組感染者血清IL-10濃度明顯高于正常對照組和低載量組 (P<0.05)。 2.2. HBV感染者血清IL-10濃度與ALT水平的關(guān)系(見表2)表2 HBV感染者血

9、清IL-10濃度與ALT水平的關(guān)系*與正常對照組相比P<0.05；*與輕度組和正常對照組相比P<0.05 無癥狀攜帶者組和中、重度組分別與輕度組和正常對照組比較差異有顯著性(P<0.05)。 3 討論 乙型肝炎的發(fā)病機制與HBV抗原和機體免疫系統(tǒng)的相互作用有關(guān)，清除HBV主要依賴細(xì)胞免疫。介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的是Th1細(xì)胞，Th2細(xì)胞介導(dǎo)的是體液免疫應(yīng)答，機體的細(xì)胞免疫應(yīng)答利于病毒的清除，而體液免疫主要與組織損傷及感染的慢性化作用有關(guān)3，4。研究發(fā)現(xiàn)，在慢性乙型肝炎感染者體內(nèi)，存在Th1/Th2 失衡，這種失衡又體現(xiàn)在細(xì)胞因子失調(diào)，表現(xiàn)形式為Th2應(yīng)答占有

10、優(yōu)勢。Th2類細(xì)胞因子IL- 4, IL-10均顯著高于正常對照組。IL-10主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，Th0細(xì)胞，單核-吞噬細(xì)胞， Kupffer細(xì)胞，肝細(xì)胞等也能產(chǎn)生。它在免疫反應(yīng)中主要起抑制作用，通過抑制Th1細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-2，IL-3，IFN- ，TNF-，GM-CSF等，抑制Th1細(xì)胞應(yīng)答；并有抗炎和誘導(dǎo)免疫耐受的作用。優(yōu)勢Th2型細(xì)胞因子IL-10介導(dǎo)體液免疫使機體不能有效清除受病毒感染的肝細(xì)胞，造成HBV感染的持續(xù)。本實驗表明，HBV感染者血清IL-10濃度明顯高于正常對照組(P<0.05)，HBV高載量組感染者血清IL-10濃度明顯高于正常對照組和低載量組(P

11、<0.05)，提示HBV感染者體內(nèi)Th1/Th2 失衡，主要表現(xiàn)為IL-10表達增強，與Tsai等的結(jié)果相一致6，7，8。 近年來的研究證實，IL-10是一個多效性細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)作用。一般認(rèn)為，IL-10在免疫應(yīng)答中對肝損傷有保護作用。Louis等報道，C3H/HeJ小鼠被注射ConA 1 h后肝內(nèi)即有IL-10的產(chǎn)生并進行性升高，其水平的高低在一定程度上反映了機體對致傷因子自然抵抗能力的強弱。用anti-IL-10 McAb中和IL-10，8h后TNF-、IFN-、IL-12分別增加111%、92%和73%，肝損害隨之加重；預(yù)先注射重組IL-10，則能顯著抑制上述炎

12、性介質(zhì)產(chǎn)生，降低血清ALT水平，減輕肝細(xì)胞變性、壞死和嗜中性粒細(xì)胞浸潤。說明不論是內(nèi)源性還是外源性IL-10，均能通過抑制炎性介質(zhì)的產(chǎn)生而發(fā)揮對ConA誘發(fā)性肝炎的保護作用。然而本組結(jié)果則顯示慢性乙肝中、重度組患者的IL-10水平顯著高于輕度組，似乎與上述結(jié)果相矛盾，但因為體內(nèi)的Th1/Th2 平衡可能在病程的進展過程中是處于一個動態(tài)的平衡， 并且平衡是相對于Th1細(xì)胞因子的水平的。因此，本組中、重度組患者的IL-10水平增高，可能正是機體為保護肝損傷的反應(yīng)。進一步的研究應(yīng)當(dāng)同時監(jiān)測中、重度慢性乙肝患者Th1/Th2兩種細(xì)胞因子的表達水平和動態(tài)平衡與肝損傷的關(guān)系?！緟⒖嘉墨I】 Bertolet

13、ti A, DElios MM，Boni C，et alDifferent cytokine profiles of intraphepatic T cells in chronic hepatitis B and hepatitis C virus infections Gastroenterology,1997,112(1):193199 Schlaak JF，Tully G，Lohr HF，et alHBV-specific immune defect in chronic hepatitis B is correlated with a dysregulation of pro-and

14、 anti-inflammatory cytokines.Clin Exp Immunol,1999,115(3):508514 Kobayashi M, Fitz L,Ryan M, et al.Identification and purification of natural killer cell stimulatory factor (NKSF), a cytokine with multiple biologic effects on human lymphocytes.J Exp Med,1989,170(3):827. 孟 澤，李曉軍.免疫學(xué)檢驗的熱點與難點.臨床檢驗雜志,20

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