HPLC法測(cè)定牛黃清胃丸中大黃素和大黃酚的含量

1、HPLC法測(cè)定牛黃清胃丸中大黃素和大黃酚的含量【摘要】 目的：建立牛黃清胃丸的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱：SHIMADZU VP-ODS（250 mmX4.6 mm,5 um），流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20，V/V），流速：1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，柱溫：30。結(jié)果：大黃素在10.0450.20g·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r =0.9998）；平均加樣回收率為97.6%， RSD=3.4%（n=6）；大黃酚在20.0460.12g·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r =1.0000）；平均加樣回收率為98.5%

2、， RSD 3.1%（n=6）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可適用于牛黃清胃丸的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法 牛黃清胃丸 大黃素 大黃酚 含量測(cè)定 Determination the content of Emodin and Chrysophanol in Niuhuangqinwei pills by HPLC 【Abstract objective】To establish a HPLC method for determination the content of emodin and chysophanol in Niuhuangqingwei pills. MET

3、HOD: The shimadzu VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 um) was used, the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution(80:20), the column temperature was 30 ,the detection wavelength was 254 nm.the flow rate was 1.0ml·min-1. RESULTS The linear ranges of emodin and chrysophanol were at 10.0

4、4-50.20 ug(r=0.999 8) and 20.4-60.12 ug.ml-1(r=1.000 0) respectively, the average recoveries(n=6) were 97.6% and 98.5% with RSD 3.4% and 3.1% respeclivery. CONCLUSION The method is simple and accurate, it can be used for quality control of Niuhuangqingwei pills. 【Key words】 HPLC; Niuhuangqingwei pil

5、ls; emodin;chrysophanol; determination 牛黃清胃丸為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第一冊(cè)（中藥成方制劑）收載的品種，由牛黃、大黃、菊花、黃芩、黃柏、桔梗、麥冬等17味中藥組成，具有清胃瀉火、潤(rùn)燥通便之功效。臨床用于心胃火盛，頭暈?zāi)垦?，口舌生瘡，牙齦腫痛，乳蛾咽痛，便秘尿赤1，療效良好。處方中大黃為君藥之一，大黃素和大黃酚為其主要有效成分，原標(biāo)準(zhǔn)中只有顯微鑒別。為了更好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測(cè)定牛黃清胃丸中大黃素和大黃酚的含量，以期為該制劑的質(zhì)量提供快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)告如下。 1 儀器與試藥 LC2010A 高效液相色譜儀，CLASSVP 色譜

6、工作站；大黃素對(duì)照品（批號(hào)：110756-200110），大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：110796-200310），由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用；牛黃清胃丸為市售樣品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，規(guī)格6g/丸，批號(hào)： 6015504，7013189，7011172）。甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5 um)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；流速：1.0ml·min-1；柱溫：30。 2.2 溶液制備

7、 2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h以上的大黃素對(duì)照品和大黃酚對(duì)照品各適量，分別加甲醇制成每1ml各含0.1mg的對(duì)照品貯備液；再精密量取大黃素對(duì)照品貯備液和大黃酚對(duì)照品貯備液各適量，加甲醇制成每1ml含大黃素15g、大黃酚25g的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。 2.2.2 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的牛黃清胃丸，剪碎，混勻，取約6g，精密稱定，置燒杯中，加水5ml，置水浴溫?zé)岵嚢枋谷苌?，加硅藻?g，拌勻，置100烘箱中，烘干，轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，并用水5ml洗滌燒杯及玻棒，洗液并入錐形瓶中，置100烘箱中，烘干，精密加入鹽酸-乙醇（1：25）混合溶液50ml，

8、稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）10 min，置水浴上加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用鹽酸-乙醇（1：25）混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10ml，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液2。 2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取除大黃以外的處方中其余藥材的十分之一量，按法制成大蜜丸，再按供試品溶液制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。 2.3 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見(jiàn)，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置

9、上，有相同保留時(shí)間（1.大黃素：15.692min；2. 大黃酚：20.110 min）的色譜峰，陰性試驗(yàn)無(wú)干擾。 2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品貯備液（大黃素：0.1004mg·ml-1 ，大黃酚0.1002 mg·ml-1）各適量，分別置于10ml量瓶中，加甲醇定容，配成濃度分別為大黃素：10.04、20.08、30.12、40.16、50.20g·ml-1，大黃酚：20.04、30.06、40.08、50.10、60.12g·ml-1的溶液，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液各10l，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，其濃度（C）為

10、橫坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸，大黃素回歸方程為：A=5.79X107C-2.72X104，r =0.9998；大黃酚回歸方程為：A=43.3X107C-3.74X104，r =1.0000。結(jié)果表明，大黃素在10.0450.20g·ml-1范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系；大黃酚在20.0460.12g·ml-1范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系。 2.5 精密度 取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量10l，在上述色譜條件下求得大黃素峰面積的RSD為0.9%，大黃酚峰面積的RSD為1.1%(n=5)。 2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，在0、6、1、24、48 h分別進(jìn)行測(cè)定，峰

11、面積結(jié)果，大黃素峰面積的RSD為0.6%，大黃酚峰面積的RSD為0.8%(n=5)。 2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品（批號(hào)6015504）共5份，分別按“2.2.2”方法制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，求得大黃素含量的RSD為1.6%，大黃酚含量的RSD為1.3%(n=5)，表明重復(fù)性較好。 2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)6015504，大黃素含量0.066mg·g-1，大黃酚含量0.098 mg·g-1，平均丸重2.940g·丸-1）適量，共6份，分別置燒杯中，分別精密加入大黃素對(duì)照品貯備液（0.1004mg·ml-1）、大黃酚對(duì)照品貯備

12、液（0.1002 mg·ml-1）3.5及4.5 ml各適量，按 “2.2.2供試品溶液的制備”方法操作，依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表13。表1 大黃素、大黃酚加樣回收率試驗(yàn) 2.9 樣品含量測(cè)定 分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定三批樣品中大黃素、大黃酚峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算其含量（n=5），結(jié)果見(jiàn)表2。 表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果（ 3 討論 3.1 試驗(yàn)中曾試用過(guò)流動(dòng)相：甲醇-0.05%高氯酸溶液（73：27）4，后又反復(fù)試用過(guò)不同比例的甲醇和不同濃度的磷酸溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行分離，結(jié)果甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20，V/V）能使樣品峰與相鄰雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離。 3.2 通過(guò)對(duì)3批樣品中大黃素、大黃酚的測(cè)定，結(jié)果表明大黃素最高含量為0.41mg·丸-1，最低為0.33mg·丸-1；大黃酚最高含量為0.64 mg·丸-1，最低為0.52mg·丸-1。綜合考慮確定限量，每丸含大黃素不得低于0.25mg，含大黃酚不得低于0.30mg。 3.3 本方法結(jié)果準(zhǔn)確，方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性及回收率均理想，可以作為該制