植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)周祖富 黎兆安 主編廣 西 大 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 規(guī) 則1. 做好實(shí)驗(yàn)前的預(yù)習(xí)及準(zhǔn)備。每次實(shí)驗(yàn)前務(wù)必將指定項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)仔細(xì)閱讀，熟悉每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的目的、原理、方法和操作程序，并復(fù)習(xí)教材或筆記中有關(guān)部分，使實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)能獨(dú)立操作及分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果2. 保特室內(nèi)安靜，在實(shí)驗(yàn)中不得隨意走動(dòng)或談話，以免影響他人實(shí)驗(yàn)。3. 要愛惜國家財(cái)物。每一位同學(xué)應(yīng)本著愛護(hù)國家資財(cái)及節(jié)約的精神，對(duì)器具謹(jǐn)慎使用，如有損壞，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師，并進(jìn)行登記。 4. 遵守儀器、器具使用規(guī)定。貴重儀器使用時(shí)，應(yīng)有教師在旁指導(dǎo)，未明了正確使用方法前，切勿亂動(dòng)，以免損壞儀器。凡屬公用器具及藥品，不得拿到自己桌上，用后應(yīng)放回原處

2、，以便他人使用。 5. 保特室內(nèi)的清潔衛(wèi)生。實(shí)驗(yàn)室不準(zhǔn)隨地吐痰或亂擲廢紙屑。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組負(fù)責(zé)清洗并整理本組的實(shí)驗(yàn)器具及桌面，以養(yǎng)成良好的工作習(xí)慣；值日生應(yīng)負(fù)責(zé)掃地、抹桌、倒污水等工作，以保特實(shí)驗(yàn)室的整潔。 6. 認(rèn)真做好實(shí)驗(yàn)觀察及實(shí)驗(yàn)報(bào)告。當(dāng)實(shí)驗(yàn)有繼續(xù)觀察必要時(shí)，應(yīng)按時(shí)觀察。凡需同學(xué)負(fù)責(zé)照管的實(shí)驗(yàn)，必須按規(guī)定管理。 7. 實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)按規(guī)定格式書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，并按指定日期交給指導(dǎo)教師批閱。實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括：實(shí)驗(yàn)日期；實(shí)驗(yàn)題目；實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；?shí)驗(yàn)基本原理；實(shí)驗(yàn)材料、儀器設(shè)備、藥品；實(shí)驗(yàn)方法與步驟；實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析。 8. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)所得如實(shí)記錄，不得擅自修改。如因不嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)操作

3、規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗時(shí)，必須重做。前 言 植物生理學(xué)是農(nóng)學(xué)、園藝、植保、農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境和生物技術(shù)等專業(yè)必修的專業(yè)基礎(chǔ)課程，植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)是該課程重要的實(shí)踐性教學(xué)環(huán)節(jié)。通過實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步加深學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)理論的認(rèn)識(shí)和理解，加強(qiáng)對(duì)學(xué)生基本實(shí)驗(yàn)技能的訓(xùn)練和動(dòng)手能力的培養(yǎng)，使學(xué)生初步掌握植物生理的基本測(cè)定方法和技術(shù)，提高學(xué)生分析問題和解決問題的能力，為今后參與科學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。 本教材根據(jù)植物生理學(xué)的各章節(jié)內(nèi)容編寫，目的在于讓學(xué)生較全面接觸和了解植物生理學(xué)各個(gè)過程的實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法。在編寫過程中，參閱了大量相關(guān)資料，并結(jié)合我們長期以來從事植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，對(duì)原有的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目、內(nèi)容及部分實(shí)驗(yàn)方法

4、作了修訂和完善，增添了新的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，吸收了新的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法。在實(shí)驗(yàn)內(nèi)容上體現(xiàn)了科學(xué)性、實(shí)用性。 全書編入實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目46項(xiàng)，共66項(xiàng)，附錄4項(xiàng)。本教材既滿足了農(nóng)類、生物類本科各專業(yè)植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的需要，也可作為本科生、研究生畢業(yè)論文實(shí)驗(yàn)及相關(guān)科研人員科學(xué)研究的參考書。 這本植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教材是廣西大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革、更新立項(xiàng)項(xiàng)目， 由周祖富、黎兆安主持立項(xiàng)建設(shè)，在立項(xiàng)過程中，得到了學(xué)校設(shè)備處的大力支持；在編寫過程中，得到了林炎坤教授的關(guān)心、指導(dǎo)和幫助，并審閱了全書，同時(shí)也得到了本教研室老師們的支持和幫助，在此一并表示誠摯的感謝。 由于編者水平有限，錯(cuò)漏在所難免，書中有不當(dāng)之處，敬請(qǐng)使用者給

5、子批評(píng)指正。 編者 2005年3月實(shí) 驗(yàn) 規(guī) 則1. 做好實(shí)驗(yàn)前的預(yù)習(xí)及準(zhǔn)備。每次實(shí)驗(yàn)前務(wù)必將指定項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)仔細(xì)閱讀，熟悉每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的目的、原理、方法和操作程序，并復(fù)習(xí)教材或筆記中有關(guān)部分，使實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)能獨(dú)立操作及分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果2. 保特室內(nèi)安靜，在實(shí)驗(yàn)中不得隨意走動(dòng)或談話，以免影響他人實(shí)驗(yàn)。3. 要愛惜國家財(cái)物。每一位同學(xué)應(yīng)本著愛護(hù)國家資財(cái)及節(jié)約的精神，對(duì)器具謹(jǐn)慎使用，如有損壞，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師，并進(jìn)行登記。 4. 遵守儀器、器具使用規(guī)定。貴重儀器使用時(shí)，應(yīng)有教師在旁指導(dǎo)，未明了正確使用方法前，切勿亂動(dòng)，以免損壞儀器。凡屬公用器具及藥品，不得拿到自己桌上，用后應(yīng)放回原處，以便他人使用。 5

6、. 保特室內(nèi)的清潔衛(wèi)生。實(shí)驗(yàn)室不準(zhǔn)隨地吐痰或亂擲廢紙屑。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組負(fù)責(zé)清洗并整理本組的實(shí)驗(yàn)器具及桌面，以養(yǎng)成良好的工作習(xí)慣；值日生應(yīng)負(fù)責(zé)掃地、抹桌、倒污水等工作，以保特實(shí)驗(yàn)室的整潔。 6. 認(rèn)真做好實(shí)驗(yàn)觀察及實(shí)驗(yàn)報(bào)告。當(dāng)實(shí)驗(yàn)有繼續(xù)觀察必要時(shí)，應(yīng)按時(shí)觀察。凡需同學(xué)負(fù)責(zé)照管的實(shí)驗(yàn)，必須按規(guī)定管理。 7. 實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)按規(guī)定格式書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，并按指定日期交給指導(dǎo)教師批閱。實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括：實(shí)驗(yàn)日期；實(shí)驗(yàn)題目；實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；?shí)驗(yàn)基本原理；實(shí)驗(yàn)材料、儀器設(shè)備、藥品；實(shí)驗(yàn)方法與步驟；實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析。8. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)所得如實(shí)記錄，不得擅自修改。如因不嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而導(dǎo)致實(shí)

7、驗(yàn)失敗時(shí)，必須重做。實(shí)驗(yàn)一 植物細(xì)胞的活體染色和死活的鑒定一、目的練習(xí)以堿性染料中性紅進(jìn)行活體染色的方法。通過活體染色及質(zhì)壁分離，進(jìn)行細(xì)胞死活的鑒定。二、原理用某種對(duì)植物無害的染料稀溶液對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色稱活體染色。中性紅是常用的活體染料之一。在中性或微堿性環(huán)境下，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅并向液泡排泄，液泡一般呈酸性，進(jìn)入液泡的中性紅解離出大量陽離子而呈櫻桃紅色, 原生質(zhì)及壁不染色。死細(xì)胞的液泡已消失因而不產(chǎn)生液泡著色現(xiàn)象，中性紅陽離子卻與帶一定負(fù)電荷的原生質(zhì)及細(xì)胞核結(jié)合而使原生質(zhì)及細(xì)胞核染色。成長的細(xì)胞是一個(gè)滲透系統(tǒng)，活的原生質(zhì)具有選擇透性，原生質(zhì)內(nèi)部包含著一個(gè)大液泡，具有一定的溶質(zhì)勢(shì)。當(dāng)

8、細(xì)胞與外界低水勢(shì)溶液接觸時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的水分外滲，原生質(zhì)隨著液泡一起收縮而發(fā)生質(zhì)壁分離；其后，當(dāng)與清水（或高水勢(shì)溶液）接觸，細(xì)胞又因液泡的吸水膨脹而發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。死細(xì)胞因其原生質(zhì)的選擇透性已遭破壞，故與低水勢(shì)溶液接觸時(shí)不產(chǎn)生質(zhì)壁分離。三、材料、儀器設(shè)備及試劑1. 材料：洋蔥鱗莖；玉蔥鱗莖。2. 儀器設(shè)備：刀片；鑷子；吸水紙；酒精燈；載玻片；蓋玻片；膠頭滴管；顯微鏡。3. 試劑：0.8mol · L1 蔗糖液；0.03中性紅溶液。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 制片染色用尖頭鑷子撕取洋蔥（玉蔥）鱗片內(nèi)表皮薄片，浸到0.03中性紅溶液中1015min進(jìn)行染色。2. 觀察2.1 將染色后的植物材料放到載

9、玻片上，蓋好蓋玻片，在蓋玻片的一側(cè)滴加無離子水（或pH略高于7.0的自來水），另一側(cè)放吸水紙吸干，以洗凈撕片外粘附的中性紅溶液，然后在顯微鏡下觀察，可以看出液泡染成櫻桃紅色；原生質(zhì)層（細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞）則無色透明緊貼細(xì)胞壁（在細(xì)胞的角隅上可以看見）。2.2 在第1項(xiàng)觀察后，接著從蓋玻片的一邊滴2滴0.8mol·L1蔗糖液, 在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸蓋玻片下的水，將蔗糖液引入蓋玻片下浸漬植物材料，并立即鏡檢，可以看到細(xì)胞很快發(fā)生質(zhì)壁分離。先是凹形質(zhì)壁分離，而后變?yōu)橥剐钨|(zhì)壁分離。2.3 在第2項(xiàng)觀察后，接著在蓋玻片的一邊加入23滴無離子水，在另一邊用吸水紙吸去糖液，將無離子水引入蓋玻片底，

10、立即鏡檢可以看到帶有液泡的原生質(zhì)體重新吸水膨大，最后充滿整個(gè)細(xì)胞腔，即質(zhì)壁分離復(fù)原（復(fù)原緩慢進(jìn)行時(shí)，細(xì)胞仍可正常存活；如果進(jìn)行很快，則會(huì)因原生質(zhì)機(jī)械破壞而死亡）。2.4 將一片經(jīng)中性紅染色的植物材料放在載玻片上，加一滴無離子水后加蓋玻片，在酒精燈火焰上微微加熱，然后在顯微鏡下觀察，可以看到細(xì)胞質(zhì)凝結(jié)成不均勻的凝膠狀，與細(xì)胞核一起染成紅色。然后按(2.2)法加0.8mol·L1蔗糖液也不發(fā)生質(zhì)壁分離。實(shí)驗(yàn)二 環(huán)境條件對(duì)淀粉酶活性的影響一、目的植物組織中存在有淀粉酶（分、兩種），能將貯藏淀粉水解成麥芽糖。從而影響種子的萌發(fā)或植物的生長。本實(shí)驗(yàn)的目的在于測(cè)定淀粉酶活性并觀察環(huán)境條件（如溫度

11、、pH）及某些化學(xué)物質(zhì)對(duì)淀粉酶活性的影響。二、原理淀粉酶的活性和其他酶一樣，受環(huán)境條件的影響，尤其是對(duì)溫度及pH的變化非常敏感，表現(xiàn)有最適溫度和最適pH的現(xiàn)象。在最適溫度及最適pH的環(huán)境中，酶的活性最強(qiáng)，酶促反應(yīng)速度最高；低于或高于最適溫度和最適pH，酶活性變?nèi)?，酶促反?yīng)速度降低。除溫度及pH外，某些化學(xué)物質(zhì)可抑制或促進(jìn)酶的活性?？梢种泼富钚缘幕瘜W(xué)物質(zhì)，稱為酶的抑制劑，可促進(jìn)酶活性的化學(xué)物質(zhì)，稱為酶的活化劑。受環(huán)境條件影響后，淀粉酶活性的強(qiáng)弱可用碘試法來檢查。三、材料、儀器設(shè)備及試劑1. 材料：小麥種子；水稻種子。2. 儀器設(shè)備：恒溫水?。缓銣嘏囵B(yǎng)箱；試管；150ml三角瓶；研缽；燒杯；移液管

12、；膠頭滴管；試管架；溫度計(jì)。3. 試劑：系列磷酸鹽檸檬酸緩沖液；pH5.0醋酸緩沖液（按附錄二配制）。 IKI溶液：稱取2g KI溶于蒸餾水中，然后加入1g I2 ，待全部溶解后，用蒸餾水定容至300ml，貯存于棕色瓶備用。0.5淀粉溶液。1CuSO4溶液。1KI溶液。0.1HgCl2溶液。1NaCl溶液。0.1%AgNO3溶液。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 淀粉酶的提取取已發(fā)芽的水稻或小麥種子（幼芽長34cm）20粒，放在研缽中研磨，勻漿用100ml水分多次沖洗，集中于150ml三角瓶并充分?jǐn)嚢?、靜置1小時(shí)后，過濾入另一三角瓶，濾液中即含有淀粉酶，若要短期保存時(shí)，可加甲苯數(shù)滴防腐，并放入冰箱中。2. 溫

13、度對(duì)活性的影響淀粉酶取試管5支，分別作15、30、45、60、75溫度標(biāo)記，并注明“酶液管”,各加入酶提取液5ml；另取5支試管，也分別作15、30、45、60、75溫度標(biāo)記，并注明“淀粉液管”，各加入0.5淀粉液5ml；然后各管分別置于相對(duì)應(yīng)溫度的水浴中，約5min后，待管內(nèi)外溫度一致，將酶液倒入相同溫度的淀粉液管中，搖勻并記下時(shí)間，10min后取出（不同處理之間，時(shí)間要一致），放入冰水中冷卻1min后，往每管加入IKI溶液5滴，搖勻。觀察顏色有何不同，比較不同溫度對(duì)淀粉酶活性的影響，判斷最適宜的酶促作用溫度。3. pH對(duì)淀粉酶活性的影響：取4支中型試管，分別加入下列系列pH的磷酸鹽檸檬酸鹽

14、緩沖液3ml，并作標(biāo)記：pH 3.6、4.8、6.0、7.2。每管加入淀粉液3ml和淀粉酶提取液2ml，充分搖勻，記下時(shí)間，放置30左右溫度下20min后，向每管加入IKI溶液5滴，搖勻，根據(jù)生成的顏色，比較淀粉酶的活性。4. 化學(xué)物質(zhì)對(duì)淀粉酶活性的影響取6支試管，編上16號(hào)，每管加入淀粉酶提取液1ml及pH5.0醋酸鹽緩沖液1ml，然后往1號(hào)管加蒸餾水1ml（對(duì)照）。2號(hào)管加1NaCl 1ml，3號(hào)管加1碘化鉀1ml，4號(hào)管中加1CuSO41ml，5號(hào)管加0.1AgNO31ml，6號(hào)管加入0.1HgCl2（注意，有毒?。?ml，各管再加0.5淀粉液2ml，搖勻后置于40恒溫水浴中，并記錄開始

15、時(shí)間，保溫810min,取出試管，冷卻后向各管加入IKI溶液5滴，搖勻，觀察各管顏色的差異。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄及分析1. 用文字說明經(jīng)不同溫度，pH及各種化學(xué)物質(zhì)處理后各試管所顯示的顏色。2. 用文字簡要分析環(huán)境條件對(duì)淀粉酶活性的影響。實(shí)驗(yàn)三 植物組織中自由水和束縛水含量的測(cè)定一、目的植物組織中的水分以兩種不同的狀態(tài)存在；一種是與原生質(zhì)膠體緊密結(jié)合著的束縛水，另一種是不與原生質(zhì)膠體緊密結(jié)合而可以自由移動(dòng)的自由水。自由水與束縛水含量高低與植物的生長及抗性有著密切的關(guān)系。自由水/束縛水比值較高時(shí)，植物組織或器官的代謝活動(dòng)一般比較旺盛，生長也較快；反之則較慢，但抗性常較強(qiáng)。因此，自由水和束縛水的相對(duì)含

16、量可以作為植物組織代謝活動(dòng)及抗逆性強(qiáng)弱的重要生理指標(biāo)，故在植物生理的研究上常需測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)的目的在于掌握自由水與束縛水含量的測(cè)定原理及方法。二、原理植物組織在與高濃度的糖液接觸時(shí)，束縛水因被原生質(zhì)膠體顆粒吸附而留在組織中；自由水則因未被原生質(zhì)膠體顆粒吸附而順著水勢(shì)梯度外滲到糖液中，使糖液的濃度降低。組織浸泡在糖液中一定時(shí)間后，根據(jù)糖液濃度降低的情況可算出組織中自由水的含量，而束縛水含量則可通過烘干植物組織計(jì)算出總含水量，再減去自由水含量而求得。三、材料、儀器設(shè)備及試劑1. 材料：馬鈴薯；田間生長的任何植物。2. 儀器設(shè)備：稱量瓶；打孔器（直徑0.5cm）；阿貝折射儀；手持糖量計(jì)；電子分析天平；

17、快速水分分析儀；恒溫烘箱。 3試劑及配制：蔗糖溶液（6065）。稱取蔗糖6065g, 溶于4035ml蒸餾水，攪拌均勻即可。 四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 植物組織中自由水含量的測(cè)定1.1 取稱量瓶3個(gè)（三次重復(fù)），依次編號(hào)并分別稱取瓶重。1.2 選取生長一致的植物數(shù)株，并取部位、長勢(shì)、葉齡一致的有代表性的葉子數(shù)片，用直徑為0.5cm打孔器鉆取圓片（注意避開粗大的葉脈），每瓶隨機(jī)裝入50片，立即加蓋，并稱取被測(cè)樣品鮮重。如果被測(cè)植物是塊莖（馬鈴薯），則先用打孔器鉆取圓條，然后切成約1 厚度的圓片，每處理稱取11.2 g圓片(按實(shí)際稱重記錄)。1.3 各瓶迅速加入6065的蔗糖溶液5ml左右（注意搖勻，不能

18、讓圓片重疊在一起），并稱取每瓶糖液重。1.4 把瓶放在暗處46 h（若實(shí)驗(yàn)用植物塊莖如馬鈴薯則處理1 h左右，不需放在暗處），其間經(jīng)常輕輕搖動(dòng)。1.5 到預(yù)定時(shí)間后，充分搖動(dòng)糖液。然后用手持糖量計(jì)或阿貝折射儀（使用方法見附錄）測(cè)定各瓶糖液的濃度（）及原來糖液的濃度（）。所測(cè)得的糖濃度按表1或表2進(jìn)行校正，再按公式（2）計(jì)算植物組織自由水含量。2. 植物組織總含水量的測(cè)定 （介紹兩種方法）2.1 烘干稱重法 2.1.1 取稱量瓶3個(gè)，依次編號(hào)，分別稱取空瓶重。 2.1.2 取上述相同的植物材料，用打孔器鉆取圓片。立即放入稱量瓶中（每瓶隨機(jī)取樣放50片），加蓋，準(zhǔn)確稱出被測(cè)樣品鮮重（如果被測(cè)植物是

19、塊莖，切成約1 厚度圓片，準(zhǔn)確稱取1 g樣品測(cè)定）。 2.1.3 把3瓶稱重后的樣品放入烘箱100105烘干后，再置于干燥器冷卻恒重后稱取干重。并按公式（1）求出植物組織總含水量（）。2.2 快速水分分析儀測(cè)定法2.2.1 取上述相同的植物葉片，用打孔器鉆取圓片，立即稱取被測(cè)樣品11.5g（如果被測(cè)植物是塊莖，先用打孔器鉆取圓條，取約2 cm長 (11.5g )，然后用刀片切成約1mm厚度圓片）。用快速水分分析儀直接測(cè)定植物組織總含水量（）。五、植物組織中自由水和束縛水含量的計(jì)算W1W2組織總含水量（）=×100 （1） W1公式中：W1樣品鮮重（g）W2樣品干重（g）糖液原來濃度（

20、） 浸葉后糖液濃度（） 糖液重（g）× 浸葉后糖液濃度（）自由水含量（）= 100（2） 植物組織鮮重（g）束縛水含量（）= 組織總含水量（）自由水含量（） （3）六、記錄結(jié)果 按下表記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果植物組織中自由水和束縛水含量測(cè)定記錄表植物處理組織總含水量（）組織鮮重（g）糖液重（g）糖液濃度（）自由水量（）束縛水量（）自由水量/ 束縛水量原濃度浸葉后注：表中第4項(xiàng)記錄組織鮮重為測(cè)定自由水的材料重量實(shí)驗(yàn)四 植物組織水勢(shì)的測(cè)定植物體內(nèi)的生理生化活動(dòng)與其水分狀況密切相關(guān)，而植物組織的水勢(shì)是表示植物水分狀況的一個(gè)重要生理指標(biāo)。目前，植物組織水勢(shì)的測(cè)定主要有幾種方法：小液流法、折射儀

21、法、壓力室法、露點(diǎn)法、熱電偶法。前兩種方法雖然簡便，但精確性差。壓力室法較適于測(cè)定枝條或葉柄導(dǎo)管的水勢(shì)。露點(diǎn)法、熱電偶法較適宜測(cè)定柔軟葉片的水勢(shì)，且精確度高，可在一定范圍內(nèi)重復(fù)測(cè)定葉片的水勢(shì)，是較好的水勢(shì)測(cè)定方法。植物的水勢(shì)可作為制定灌溉的生理指標(biāo)。、小液流法一、目的 通過實(shí)驗(yàn)，掌握用小液流法測(cè)定植物組織水勢(shì)的原理和方法。二、原理水勢(shì)代表水的能量水平，水總是從水勢(shì)高處流向低處。水進(jìn)入植物體內(nèi)并分布到各組織器官中的快慢或難易由水勢(shì)差來決定，水勢(shì)越高，植物組織的吸水能力越差，而供給水能力越強(qiáng)。當(dāng)植物組織與一系列濃度遞增的溶液接觸后，如果植物組織水勢(shì)大于（或小于）外液的水勢(shì)，則組織失水（或吸水），使

22、外液濃度變低（或變高），密度變?。ɑ蜃兇螅Ｈ绻参锝M織的水勢(shì)等于外液的水勢(shì)時(shí)，植物組織既不失水也不吸水，外液濃度不變。當(dāng)取浸泡過植物組織的溶液的小滴（亦稱小液流，為便于觀察應(yīng)先染色），分別放入原來濃度相同而未浸泡植物組織的溶液中部時(shí)，小液流就會(huì)因密度不同而發(fā)生上升或下沉或不動(dòng)的情況。小液流在其中不動(dòng)的溶液的水勢(shì)（該溶液為等滲濃度），即等于植物組織的水勢(shì)。三、材料、設(shè)備及試劑1. 材料：植物葉片；馬鈴薯塊莖等。2. 儀器設(shè)備：試管；小瓶；小塞子；打孔器(直徑0.5)；尖頭鑷子；移液管（1ml、5ml、10ml）；注射針鉤頭滴管；刀片。3. 試劑：1mol·L1蔗糖液；甲烯藍(lán)粉。四、實(shí)

23、驗(yàn)步驟 1. 系列糖濃度配制1.1 取干燥潔凈試管6支，貼上標(biāo)簽，編號(hào)，用1mol·L1蔗糖母液配成0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.30 mol·L1濃度的糖液，各管總量為10ml，并塞上塞子（防止?jié)舛雀淖儯?，作為甲組。1.2 另取干燥潔凈的小瓶6個(gè)，標(biāo)明0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mol·L1濃度,分別從甲組取相應(yīng)濃度糖液1ml盛于小瓶中，隨即塞上塞子，作為乙組。2. 取樣及測(cè)定2.1選取生長一致的葉片，用直徑為0.5cm的打孔器鉆取圓片，在玻璃皿內(nèi)混勻，然后用鑷子把圓片放進(jìn)乙組小瓶中，每瓶放1520片，（若采用植

24、物塊莖如馬鈴薯，先用打孔器鉆取圓條，然后切成約1mm厚圓片，每瓶放5片），立即塞緊塞子，放置40min左右 ，其間輕輕搖動(dòng)幾次，以加速平衡。2.2 到預(yù)定時(shí)間后，各小瓶加入幾粒甲烯藍(lán)粉染色，搖勻，取6支干燥潔凈的注射針鉤頭滴管，分別從乙組中取出溶液，插入甲組原相應(yīng)濃度蔗糖溶液的中部，輕輕擠出鉤頭滴管內(nèi)的溶液，使成小液滴，并小心地抽出鉤頭滴管（注意勿攪動(dòng)溶液），注意觀察那些管的小液滴往上移動(dòng)，那些管的小液滴往下移動(dòng)，那一管的小液滴靜止不動(dòng)。如果某一管中的小液滴懸浮不動(dòng)，則說明該管溶液與小液流的密度相等，也即植物組織與該濃度糖液間未發(fā)生水分凈交換，植物組織的水勢(shì)等于該糖液的水勢(shì)，根據(jù)公式算出該糖液

25、水勢(shì)也即得出植物組織水勢(shì) 。若前一濃度溶液小液流下沉，而后一濃度溶液中上浮，則組織的水勢(shì)值介于兩糖液水勢(shì)之間，可取平均值計(jì)算。2.3 結(jié)果記錄按下表記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果系列濃度糖液的配置和實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表需配糖液濃度（mol·L1）1 mol·L1糖液（ml） 蒸餾水 (ml)小液流移動(dòng)方向（上、下或不動(dòng)）0.05 0.5 9.50.10 1.0 9.00.15 1.5 8.50.20 2.0 8.00.25 2.5 7.5 0.30 3.0 7.0五、植物組織水勢(shì)值計(jì)算將測(cè)得的等滲濃度值代入以下公式計(jì)算出植物組織的水勢(shì)：公式中：W=iCRT（MPa）W 植物組織水勢(shì),單位：Mpa（

26、兆帕） 溶液的滲透勢(shì)（即溶液的水勢(shì)） C 等滲濃度（mol·L1） R 氣體常數(shù)（0.0083 L·MPa·mol1·K1）T 熱力學(xué)溫度（273 + t） i 解離系數(shù)（蔗糖 =1；CaCl2 =2.60）六、注意事項(xiàng)1. 配制糖液濃度要準(zhǔn)確，并充分搖勻。2. 取樣時(shí)選材要一致。3. 打孔時(shí)要避開大葉脈。4. 加甲烯藍(lán)要適量，過多會(huì)影響溶液濃度，過少則很難識(shí)別小液流移動(dòng)方向。目 錄實(shí)驗(yàn)一 植物細(xì)胞的活體染色和死活鑒定 實(shí)驗(yàn)二 環(huán)境條件對(duì)淀粉酶活性的影響 實(shí)驗(yàn)三 植物組織中自由水和束縛水含量的測(cè)定（馬林契克法） 實(shí)驗(yàn)四 植物組織水勢(shì)的測(cè)定 .小液流法.壓

27、力室法實(shí)驗(yàn)五 植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定（質(zhì)壁分離法） 實(shí)驗(yàn)六 環(huán)境因子對(duì)植物吐水的影響 實(shí)驗(yàn)七 水在植物體內(nèi)的運(yùn)輸途徑與速度及維管束運(yùn)輸潛力的觀察 實(shí)驗(yàn)八 植物蒸騰速率的測(cè)定（離體快速稱重法） 實(shí)驗(yàn)九 小孔擴(kuò)散的觀察 實(shí)驗(yàn)十 氣孔狀況的觀察 實(shí)驗(yàn)十一 植物根系對(duì)離子的選擇吸收（pH測(cè)定法）實(shí)驗(yàn)十二 植物根系活力的測(cè)定 .萘胺法 .TTC法實(shí)驗(yàn)十三 根系體積的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)十四 植物根系傷流量的測(cè)定及傷流液中氨基酸的鑒定 .植物根系傷流量的測(cè)定（容積法）.植物傷流液中氨基酸總量的的測(cè)定（分光光度法）.植物傷流液中氨基酸成分分析（紙譜分析法） 實(shí)驗(yàn)十五 植物的溶液培養(yǎng)和缺乏必需元素時(shí)的癥狀 實(shí)驗(yàn)十六 單鹽

28、的毒害作用及離子間的對(duì)抗作用 實(shí)驗(yàn)十七 植物體內(nèi)硝酸還原酶活性的測(cè)定（分光光度法） 實(shí)驗(yàn)十八 植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量的測(cè)定（分光光度法） 實(shí)驗(yàn)十九 葉綠體色素的提取、分離及理化性質(zhì)的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)二十 葉綠素含量的測(cè)定（分光光度法） 實(shí)驗(yàn)二十一 希爾反應(yīng)的觀察 實(shí)驗(yàn)二十二 植物光合速率的測(cè)定 .改良半葉測(cè)定法 .TPS1光合系統(tǒng)測(cè)定法 .CB1101光合、蒸騰作用系統(tǒng)測(cè)定法 實(shí)驗(yàn)二十三 植物呼吸速率的測(cè)定 .小筐子法.測(cè)壓法.氣流法實(shí)驗(yàn)二十四 水稻種子萌發(fā)對(duì)氧的需要 實(shí)驗(yàn)二十五 植物體內(nèi)抗壞血酸氧化酶活性的測(cè)定（滴定法） 實(shí)驗(yàn)二十六 植物體內(nèi)多酚氧化酶活性的測(cè)定（分光光度法） 實(shí)驗(yàn)二十七 植物體內(nèi)過氧

29、化氫酶活性的測(cè)定（碘量法） 實(shí)驗(yàn)二十八 植物組織中糖和淀粉含量的測(cè)定 .還原糖的測(cè)定（二硝基水楊酸法） .蔗糖含量的測(cè)定.淀粉含量的測(cè)定 .植物組織中可溶性總糖含量的測(cè)定（蒽酮法） 實(shí)驗(yàn)二十九 植物體內(nèi)可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的測(cè)定（分光光度法） 實(shí)驗(yàn)三十 植物組織中維生素C含量的測(cè)定（滴定法） 實(shí)驗(yàn)三十一 生長素對(duì)綠豆苗發(fā)根的影響 實(shí)驗(yàn)三十二 赤霉素對(duì)水稻幼苗生長的影響 實(shí)驗(yàn)三十三 細(xì)胞分裂素對(duì)離體子葉的增重效應(yīng) 實(shí)驗(yàn)三十四 細(xì)胞分裂素對(duì)離體子葉的保綠效應(yīng) 實(shí)驗(yàn)三十五 乙烯利對(duì)果實(shí)的催熟作用 實(shí)驗(yàn)三十六 乙烯利對(duì)雌花的誘導(dǎo)作用 實(shí)驗(yàn)三十七 脫落酸對(duì)植物葉柄的脫落效應(yīng) 實(shí)驗(yàn)三十八 植物生長

30、延緩劑多效唑的壯苗效應(yīng) 實(shí)驗(yàn)三十九 種子生活力的快速測(cè)定 .剝胚法.染色法.熒光法實(shí)驗(yàn)四十 光對(duì)植物生長的影響 實(shí)驗(yàn)四十一 植物光周期現(xiàn)象的觀察 實(shí)驗(yàn)四十二 植物體內(nèi)丙二醛含量的測(cè)定（分光光度法） 實(shí)驗(yàn)四十三 植物體內(nèi)游離脯氨酸含量的測(cè)定 （分光光度法）實(shí)驗(yàn)四十四 植物體內(nèi)過氧化物酶活性的測(cè)定（分光光度法） 實(shí)驗(yàn)四十五 植物細(xì)胞質(zhì)膜透性的測(cè)定（電導(dǎo)儀率法） 實(shí)驗(yàn)四十六 植物體內(nèi)氧自由基含量的測(cè)定（分光光度法） 附錄一 物質(zhì)的量與物質(zhì)的量濃度及常用酸堿的密度和濃度的關(guān)系 1. 物質(zhì)的量（n）與物質(zhì)的量濃度（C） 2.常用酸堿的密度和濃度的關(guān)系 3.常用酸堿指示劑 附錄二 常用緩沖液的配制 1.磷

31、酸緩沖液 2. Tris緩沖液 3.醋酸鹽緩沖液 4.檸檬酸磷酸緩沖液 附錄三 一些常用計(jì)量單位及其換算表 135111113161819202223262727303233333435384041454750535454565963636570737578808282838586889093949698100101103104106106107110112113114116118119121124124124125125125126126127128實(shí)驗(yàn)一 植物細(xì)胞的活體染色和死活的鑒定一、目的練習(xí)以堿性染料中性紅進(jìn)行活體染色的方法。通過活體染色及質(zhì)壁分離，進(jìn)行細(xì)胞死活的鑒定。二、原理用某種

32、對(duì)植物無害的染料稀溶液對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色稱活體染色。中性紅是常用的活體染料之一。在中性或微堿性環(huán)境下，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅并向液泡排泄，液泡一般呈酸性，進(jìn)入液泡的中性紅解離出大量陽離子而呈櫻桃紅色, 原生質(zhì)及壁不染色。死細(xì)胞的液泡已消失因而不產(chǎn)生液泡著色現(xiàn)象，中性紅陽離子卻與帶一定負(fù)電荷的原生質(zhì)及細(xì)胞核結(jié)合而使原生質(zhì)及細(xì)胞核染色。成長的細(xì)胞是一個(gè)滲透系統(tǒng)，活的原生質(zhì)具有選擇透性，原生質(zhì)內(nèi)部包含著一個(gè)大液泡，具有一定的溶質(zhì)勢(shì)。當(dāng)細(xì)胞與外界低水勢(shì)溶液接觸時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的水分外滲，原生質(zhì)隨著液泡一起收縮而發(fā)生質(zhì)壁分離；其后，當(dāng)與清水（或高水勢(shì)溶液）接觸，細(xì)胞又因液泡的吸水膨脹而發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。死

33、細(xì)胞因其原生質(zhì)的選擇透性已遭破壞，故與低水勢(shì)溶液接觸時(shí)不產(chǎn)生質(zhì)壁分離。三、材料、儀器設(shè)備及試劑1. 材料：洋蔥鱗莖；玉蔥鱗莖。2. 儀器設(shè)備：刀片；鑷子；吸水紙；酒精燈；載玻片；蓋玻片；膠頭滴管；顯微鏡。3. 試劑：0.8mol · L1 蔗糖液；0.03中性紅溶液。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 制片染色用尖頭鑷子撕取洋蔥（玉蔥）鱗片內(nèi)表皮薄片，浸到0.03中性紅溶液中1015min進(jìn)行染色。2. 觀察2.1 將染色后的植物材料放到載玻片上，蓋好蓋玻片，在蓋玻片的一側(cè)滴加無離子水（或pH略高于7.0的自來水），另一側(cè)放吸水紙吸干，以洗凈撕片外粘附的中性紅溶液，然后在顯微鏡下觀察，可以看出液泡染成

34、櫻桃紅色；原生質(zhì)層（細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞）則無色透明緊貼細(xì)胞壁（在細(xì)胞的角隅上可以看見）。2.2 在第1項(xiàng)觀察后，接著從蓋玻片的一邊滴2滴0.8mol·L1蔗糖液, 在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸蓋玻片下的水，將蔗糖液引入蓋玻片下浸漬植物材料，并立即鏡檢，可以看到細(xì)胞很快發(fā)生質(zhì)壁分離。先是凹形質(zhì)壁分離，而后變?yōu)橥剐钨|(zhì)壁分離。2.3 在第2項(xiàng)觀察后，接著在蓋玻片的一邊加入23滴無離子水，在另一邊用吸水紙吸去糖液，將無離子水引入蓋玻片底，立即鏡檢可以看到帶有液泡的原生質(zhì)體重新吸水膨大，最后充滿整個(gè)細(xì)胞腔，即質(zhì)壁分離復(fù)原（復(fù)原緩慢進(jìn)行時(shí)，細(xì)胞仍可正常存活；如果進(jìn)行很快，則會(huì)因原生質(zhì)機(jī)械破壞而死亡）。2

35、.4 將一片經(jīng)中性紅染色的植物材料放在載玻片上，加一滴無離子水后加蓋玻片，在酒精燈火焰上微微加熱，然后在顯微鏡下觀察，可以看到細(xì)胞質(zhì)凝結(jié)成不均勻的凝膠狀，與細(xì)胞核一起染成紅色。然后按(2.2)法加0.8mol·L1蔗糖液也不發(fā)生質(zhì)壁分離。實(shí)驗(yàn)二 環(huán)境條件對(duì)淀粉酶活性的影響一、目的植物組織中存在有淀粉酶（分、兩種），能將貯藏淀粉水解成麥芽糖。從而影響種子的萌發(fā)或植物的生長。本實(shí)驗(yàn)的目的在于測(cè)定淀粉酶活性并觀察環(huán)境條件（如溫度、pH）及某些化學(xué)物質(zhì)對(duì)淀粉酶活性的影響。二、原理淀粉酶的活性和其他酶一樣，受環(huán)境條件的影響，尤其是對(duì)溫度及pH的變化非常敏感，表現(xiàn)有最適溫度和最適pH的現(xiàn)象。在最

36、適溫度及最適pH的環(huán)境中，酶的活性最強(qiáng)，酶促反應(yīng)速度最高；低于或高于最適溫度和最適pH，酶活性變?nèi)酰复俜磻?yīng)速度降低。除溫度及pH外，某些化學(xué)物質(zhì)可抑制或促進(jìn)酶的活性?？梢种泼富钚缘幕瘜W(xué)物質(zhì)，稱為酶的抑制劑，可促進(jìn)酶活性的化學(xué)物質(zhì)，稱為酶的活化劑。受環(huán)境條件影響后，淀粉酶活性的強(qiáng)弱可用碘試法來檢查。三、材料、儀器設(shè)備及試劑1. 材料：小麥種子；水稻種子。2. 儀器設(shè)備：恒溫水浴；恒溫培養(yǎng)箱；試管；150ml三角瓶；研缽；燒杯；移液管；膠頭滴管；試管架；溫度計(jì)。3. 試劑：系列磷酸鹽檸檬酸緩沖液；pH5.0醋酸緩沖液（按附錄二配制）。 IKI溶液：稱取2g KI溶于蒸餾水中，然后加入1g I2

37、，待全部溶解后，用蒸餾水定容至300ml，貯存于棕色瓶備用。0.5淀粉溶液。1CuSO4溶液。1KI溶液。0.1HgCl2溶液。1NaCl溶液。0.1%AgNO3溶液。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 淀粉酶的提取取已發(fā)芽的水稻或小麥種子（幼芽長34cm）20粒，放在研缽中研磨，勻漿用100ml水分多次沖洗，集中于150ml三角瓶并充分?jǐn)嚢?、靜置1小時(shí)后，過濾入另一三角瓶，濾液中即含有淀粉酶，若要短期保存時(shí)，可加甲苯數(shù)滴防腐，并放入冰箱中。2. 溫度對(duì)活性的影響淀粉酶取試管5支，分別作15、30、45、60、75溫度標(biāo)記，并注明“酶液管”,各加入酶提取液5ml；另取5支試管，也分別作15、30、45、60、7

38、5溫度標(biāo)記，并注明“淀粉液管”，各加入0.5淀粉液5ml；然后各管分別置于相對(duì)應(yīng)溫度的水浴中，約5min后，待管內(nèi)外溫度一致，將酶液倒入相同溫度的淀粉液管中，搖勻并記下時(shí)間，10min后取出（不同處理之間，時(shí)間要一致），放入冰水中冷卻1min后，往每管加入IKI溶液5滴，搖勻。觀察顏色有何不同，比較不同溫度對(duì)淀粉酶活性的影響，判斷最適宜的酶促作用溫度。3. pH對(duì)淀粉酶活性的影響：取4支中型試管，分別加入下列系列pH的磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液3ml，并作標(biāo)記：pH 3.6、4.8、6.0、7.2。每管加入淀粉液3ml和淀粉酶提取液2ml，充分搖勻，記下時(shí)間，放置30左右溫度下20min后，向每管加

39、入IKI溶液5滴，搖勻，根據(jù)生成的顏色，比較淀粉酶的活性。4. 化學(xué)物質(zhì)對(duì)淀粉酶活性的影響取6支試管，編上16號(hào)，每管加入淀粉酶提取液1ml及pH5.0醋酸鹽緩沖液1ml，然后往1號(hào)管加蒸餾水1ml（對(duì)照）。2號(hào)管加1NaCl 1ml，3號(hào)管加1碘化鉀1ml，4號(hào)管中加1CuSO41ml，5號(hào)管加0.1AgNO31ml，6號(hào)管加入0.1HgCl2（注意，有毒?。?ml，各管再加0.5淀粉液2ml，搖勻后置于40恒溫水浴中，并記錄開始時(shí)間，保溫810min,取出試管，冷卻后向各管加入IKI溶液5滴，搖勻，觀察各管顏色的差異。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄及分析1. 用文字說明經(jīng)不同溫度，pH及各種化學(xué)物質(zhì)處理

40、后各試管所顯示的顏色。2. 用文字簡要分析環(huán)境條件對(duì)淀粉酶活性的影響。實(shí)驗(yàn)三 植物組織中自由水和束縛水含量的測(cè)定一、目的植物組織中的水分以兩種不同的狀態(tài)存在；一種是與原生質(zhì)膠體緊密結(jié)合著的束縛水，另一種是不與原生質(zhì)膠體緊密結(jié)合而可以自由移動(dòng)的自由水。自由水與束縛水含量高低與植物的生長及抗性有著密切的關(guān)系。自由水/束縛水比值較高時(shí)，植物組織或器官的代謝活動(dòng)一般比較旺盛，生長也較快；反之則較慢，但抗性常較強(qiáng)。因此，自由水和束縛水的相對(duì)含量可以作為植物組織代謝活動(dòng)及抗逆性強(qiáng)弱的重要生理指標(biāo)，故在植物生理的研究上常需測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)的目的在于掌握自由水與束縛水含量的測(cè)定原理及方法。二、原理植物組織在與高濃

41、度的糖液接觸時(shí)，束縛水因被原生質(zhì)膠體顆粒吸附而留在組織中；自由水則因未被原生質(zhì)膠體顆粒吸附而順著水勢(shì)梯度外滲到糖液中，使糖液的濃度降低。組織浸泡在糖液中一定時(shí)間后，根據(jù)糖液濃度降低的情況可算出組織中自由水的含量，而束縛水含量則可通過烘干植物組織計(jì)算出總含水量，再減去自由水含量而求得。三、材料、儀器設(shè)備及試劑1. 材料：馬鈴薯；田間生長的任何植物。2. 儀器設(shè)備：稱量瓶；打孔器（直徑0.5cm）；阿貝折射儀；手持糖量計(jì)；電子分析天平；快速水分分析儀；恒溫烘箱。 3試劑及配制：蔗糖溶液（6065）。稱取蔗糖6065g, 溶于4035ml蒸餾水，攪拌均勻即可。 四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 植物組織中自由水含量

42、的測(cè)定1.1 取稱量瓶3個(gè)（三次重復(fù)），依次編號(hào)并分別稱取瓶重。1.2 選取生長一致的植物數(shù)株，并取部位、長勢(shì)、葉齡一致的有代表性的葉子數(shù)片，用直徑為0.5cm打孔器鉆取圓片（注意避開粗大的葉脈），每瓶隨機(jī)裝入50片，立即加蓋，并稱取被測(cè)樣品鮮重。如果被測(cè)植物是塊莖（馬鈴薯），則先用打孔器鉆取圓條，然后切成約1 厚度的圓片，每處理稱取11.2 g圓片(按實(shí)際稱重記錄)。1.3 各瓶迅速加入6065的蔗糖溶液5ml左右（注意搖勻，不能讓圓片重疊在一起），并稱取每瓶糖液重。1.4 把瓶放在暗處46 h（若實(shí)驗(yàn)用植物塊莖如馬鈴薯則處理1 h左右，不需放在暗處），其間經(jīng)常輕輕搖動(dòng)。1.5 到預(yù)定時(shí)間后

43、，充分搖動(dòng)糖液。然后用手持糖量計(jì)或阿貝折射儀（使用方法見附錄）測(cè)定各瓶糖液的濃度（）及原來糖液的濃度（）。所測(cè)得的糖濃度按表1或表2進(jìn)行校正，再按公式（2）計(jì)算植物組織自由水含量。2. 植物組織總含水量的測(cè)定 （介紹兩種方法）2.1 烘干稱重法 2.1.1 取稱量瓶3個(gè)，依次編號(hào)，分別稱取空瓶重。 2.1.2 取上述相同的植物材料，用打孔器鉆取圓片。立即放入稱量瓶中（每瓶隨機(jī)取樣放50片），加蓋，準(zhǔn)確稱出被測(cè)樣品鮮重（如果被測(cè)植物是塊莖，切成約1 厚度圓片，準(zhǔn)確稱取1 g樣品測(cè)定）。 2.1.3 把3瓶稱重后的樣品放入烘箱100105烘干后，再置于干燥器冷卻恒重后稱取干重。并按公式（1）求出植

44、物組織總含水量（）。2.2 快速水分分析儀測(cè)定法2.2.1 取上述相同的植物葉片，用打孔器鉆取圓片，立即稱取被測(cè)樣品11.5g（如果被測(cè)植物是塊莖，先用打孔器鉆取圓條，取約2 cm長 (11.5g )，然后用刀片切成約1mm厚度圓片）。用快速水分分析儀直接測(cè)定植物組織總含水量（）。五、植物組織中自由水和束縛水含量的計(jì)算W1W2組織總含水量（）=×100 （1） W1公式中：W1樣品鮮重（g）W2樣品干重（g）糖液原來濃度（） 浸葉后糖液濃度（） 糖液重（g）× 浸葉后糖液濃度（）自由水含量（）= 100（2） 植物組織鮮重（g）束縛水含量（）= 組織總含水量（）自由水含量（

45、） （3）六、記錄結(jié)果 按下表記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果植物組織中自由水和束縛水含量測(cè)定記錄表植物處理組織總含水量（）組織鮮重（g）糖液重（g）糖液濃度（）自由水量（）束縛水量（）自由水量/ 束縛水量原濃度浸葉后注：表中第4項(xiàng)記錄組織鮮重為測(cè)定自由水的材料重量實(shí)驗(yàn)四 植物組織水勢(shì)的測(cè)定植物體內(nèi)的生理生化活動(dòng)與其水分狀況密切相關(guān)，而植物組織的水勢(shì)是表示植物水分狀況的一個(gè)重要生理指標(biāo)。目前，植物組織水勢(shì)的測(cè)定主要有幾種方法：小液流法、折射儀法、壓力室法、露點(diǎn)法、熱電偶法。前兩種方法雖然簡便，但精確性差。壓力室法較適于測(cè)定枝條或葉柄導(dǎo)管的水勢(shì)。露點(diǎn)法、熱電偶法較適宜測(cè)定柔軟葉片的水勢(shì)，且精確度高，可在一

46、定范圍內(nèi)重復(fù)測(cè)定葉片的水勢(shì)，是較好的水勢(shì)測(cè)定方法。植物的水勢(shì)可作為制定灌溉的生理指標(biāo)。、小液流法一、目的 通過實(shí)驗(yàn)，掌握用小液流法測(cè)定植物組織水勢(shì)的原理和方法。二、原理水勢(shì)代表水的能量水平，水總是從水勢(shì)高處流向低處。水進(jìn)入植物體內(nèi)并分布到各組織器官中的快慢或難易由水勢(shì)差來決定，水勢(shì)越高，植物組織的吸水能力越差，而供給水能力越強(qiáng)。當(dāng)植物組織與一系列濃度遞增的溶液接觸后，如果植物組織水勢(shì)大于（或小于）外液的水勢(shì)，則組織失水（或吸水），使外液濃度變低（或變高），密度變?。ɑ蜃兇螅Ｈ绻参锝M織的水勢(shì)等于外液的水勢(shì)時(shí)，植物組織既不失水也不吸水，外液濃度不變。當(dāng)取浸泡過植物組織的溶液的小滴（亦稱小液流，

47、為便于觀察應(yīng)先染色），分別放入原來濃度相同而未浸泡植物組織的溶液中部時(shí)，小液流就會(huì)因密度不同而發(fā)生上升或下沉或不動(dòng)的情況。小液流在其中不動(dòng)的溶液的水勢(shì)（該溶液為等滲濃度），即等于植物組織的水勢(shì)。三、材料、設(shè)備及試劑1. 材料：植物葉片；馬鈴薯塊莖等。2. 儀器設(shè)備：試管；小瓶；小塞子；打孔器(直徑0.5)；尖頭鑷子；移液管（1ml、5ml、10ml）；注射針鉤頭滴管；刀片。3. 試劑：1mol·L1蔗糖液；甲烯藍(lán)粉。四、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 系列糖濃度配制1.1 取干燥潔凈試管6支，貼上標(biāo)簽，編號(hào)，用1mol·L1蔗糖母液配成0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.30

48、 mol·L1濃度的糖液，各管總量為10ml，并塞上塞子（防止?jié)舛雀淖儯鳛榧捉M。1.2 另取干燥潔凈的小瓶6個(gè)，標(biāo)明0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mol·L1濃度,分別從甲組取相應(yīng)濃度糖液1ml盛于小瓶中，隨即塞上塞子，作為乙組。2. 取樣及測(cè)定2.1選取生長一致的葉片，用直徑為0.5cm的打孔器鉆取圓片，在玻璃皿內(nèi)混勻，然后用鑷子把圓片放進(jìn)乙組小瓶中，每瓶放1520片，（若采用植物塊莖如馬鈴薯，先用打孔器鉆取圓條，然后切成約1mm厚圓片，每瓶放5片），立即塞緊塞子，放置40min左右 ，其間輕輕搖動(dòng)幾次，以加速平衡。2.2 到預(yù)定時(shí)間后，各小瓶加入幾粒甲烯藍(lán)粉染色，搖勻，取6支干燥潔凈的注射針鉤頭滴管，分別從乙組中取出溶液，插入甲組原相應(yīng)濃度蔗糖溶液的中部，輕輕擠出鉤頭滴管內(nèi)的溶液，使成小液滴，并小心地抽出鉤頭滴管（注意勿攪動(dòng)溶液），注意觀察那些管的小液滴往上移動(dòng)，那些管的小液滴往下移動(dòng)，那一管的小液滴靜止不動(dòng)。如果某一管中的小液滴懸浮不動(dòng)，則說明該管溶液與小液流的密度相等，也即植物組織與該濃