反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者淋巴細胞亞群和免疫球蛋白檢測的臨床意義

1、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者淋巴細胞亞群和免疫球蛋白檢測的臨床意義【摘要】 目的： 研究反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎(ReA)患者外周血淋巴細胞亞群以及血清免疫球蛋白的變化及臨床意義。方法： 采用流式細胞術(shù)檢測56例ReA患者和53例健康對照組外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD16+56+NK、CD19+B細胞的百分率;免疫比濁法檢測血清IgG 、IgA及IgM含量。結(jié)果： ReA患者與正常對照組比較,CD4+T淋巴細胞百分率、CD4+/CD8+比值及CD19+B淋巴細胞百分率均明顯增高(P<0.01);血清IgG水平升高(P<0.05);CD15+56+NK細胞百分率明顯降低(P

2、<0.01);CD3+T、CD8+T淋巴細胞的百分率及血清IgM、IgA含量與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論： 反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)細胞和體液免疫功能紊亂,監(jiān)測ReA患者體內(nèi)淋巴細胞亞群和免疫球蛋白水平,對于ReA的免疫治療具有重要的臨床意義。 【關(guān)鍵詞】 反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎; T細胞亞群; NK淋巴細胞; B淋巴細胞; 血清免疫球蛋白Abstract Objective: To study the changes of lymphocyte subsets in peripheral blood and serum immunoglobulin of patients with

3、 reactive arthritis (ReA) and their clinical significance. Methods： CD3+T, CD4+T, CD8+T,CD16+56+NK, CD19+B positive rate (with flow cytometry) and serum IgG, IgA, IgM levels (with immunoturbidity) were measured in 56 patients with ReA and 53 normal controls. Results： Compared with the normal control

4、s, the percentage of CD4+T lymphocyte,CD4+/CD8+ratio and CD19+B cell percentage increased significantly (P<0.01) in ReA patients. IgG level slightly increased (P<0.05). While, NK cell percentage reduced obviously (P<0.01). There were no statistical difference between ReA patient

5、s and normal controls about the levels of CD3+T, CD8+T cell and IgM, IgA (P>0.05). Conclusion： Cellular and humoral immune function were significantly abnormal in patients with reactive arthritis. Detection of lymphocyte subsets and serum immunoglobulin had important clinical significane for

6、ReAs immunotherapy.Key words reactive arthritis; T lymphocyte subsets; NK lymphocyte; B lymphocyte; serum immunoglobulin反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎(reactive arthritis, ReA)是在關(guān)節(jié)外遠端部位發(fā)生微生物感染后產(chǎn)生的慢性無菌性炎癥,其病因與病原體、免疫、遺傳有關(guān)。該疾病發(fā)病機制尚未明確,目前認為其本質(zhì)上都有抗原微生物侵入黏膜內(nèi),而且機體免疫防御系統(tǒng)存在功能紊亂1。本研究采用流式細胞技術(shù)檢測反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者與健康人群外周血T淋巴細胞亞群、NK淋巴細胞及B淋巴細胞百分率,采

7、用免疫比濁法檢測血清IgA、IgG、IgM含量,觀察ReA患者體內(nèi)細胞免疫、體液免疫指標的變化和規(guī)律,并探討其臨床意義。1 材料和方法1.1 材 料1.1.1 對象 病例來源于2007年9月至2009年10月我院免疫風濕科住院患者。診斷標準符合1990年公布的Amor診斷標準2。ReA患者56例,男30例,女26例,年齡2574歲,中位年齡53歲。正常對照組為53例本院健康體檢者,男27例,女26例,年齡1778歲。1.1.2 試劑 試劑均由BD公司提供,包括:熒光抗體CD3percp/CD4FITC/CD8PE;CD3FITC/CD16+CD56+PE;CD19cy5;溶血素,鞘液等。免疫球

8、蛋白試劑盒由BEHRING 公司提供。1.2 方 法1.2.1 標本采集 抽取病例組和對照組外周靜脈血1 ml,注入EDTAK2抗凝管中,室溫保存,在24 h內(nèi)用于流式細胞儀檢測;同時抽取4 ml靜脈血注入真空采血管中,用于檢測血清免疫球蛋白。1.2.2 淋巴細胞亞群檢測 取50 l上述抗凝血分別加入兩個試管中,一管加入10 l熒光抗體CD3percp/CD4FITC/CD8PE;另一管加入熒光抗體CD3FITC/CD16+CD56+PE和CD19cy5各10 l,充分混勻后避光室溫孵育20 min后,每管加入溶血素(110稀釋)1 ml,避光放置至透明后1 000 r/min離心5 min,

9、棄去上清液體,加入1 ml PBS洗滌細胞2次,最后加入500 l PBS溶液混勻直接上流式細胞儀(德國PARTEC公司)檢測。1.2.3 免疫球蛋白檢測 每個樣本分離出血清,在特種蛋白分析儀(德國BEHRING公司)上測定血清中IgG 、IgA、IgM的含量。1.3 統(tǒng)計學處理應(yīng)用SPSS13.0處理數(shù)據(jù),結(jié)果以±s表示, t檢驗比較各組間差異,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2 結(jié) 果2.1 ReA患者的淋巴細胞亞群流式細胞儀檢測散點圖采用CD3+T為總T細胞,CD3+CD4+T細胞為輔助性T細胞,CD3+CD8+T為抑制性T細胞,CD3-CD16+CD56+為NK

10、細胞,CD19+為B細胞。設(shè)門分析各淋巴細胞亞群的百分比。典型檢測結(jié)果見圖1。a為FSC和SSC的散點圖,R1區(qū)為淋巴細胞區(qū);b為CD3和CD4的散點圖,Q2區(qū)為輔助性T細胞(CD3+CD4+);c為CD3和CD8的散點圖,QA2為抑制性T細胞(CD3+CD8+);d為CD4和CD8的散點圖,QB4為CD4+T細胞,QB1為CD8+T細胞;e為CD3和CD19的散點圖,Q4為B細胞(CD19+);f為CD16+56和CD3的散點圖,QB1為NK細胞(CD3-CD16+56+)。圖1 流式細胞儀檢測ReA患者外周血淋巴細胞亞群Fig 1 Lymphocyte subsets in periphe

11、ral blood with ReA detected by flow cytometry2.2 ReA患者的淋巴細胞亞群檢測結(jié)果ReA患者CD4+T淋巴細胞百分率、CD4+/CD8+比值及CD19+B淋巴細胞百分率均明顯高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);而CD16+56+NK細胞百分率明顯低于正常對照組(P<0.01);CD3+T、CD8+T淋巴細胞百分率與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表1。表1 ReA患者及正常對照組外周血T淋巴亞群,NK細胞及B細胞水平與對照組比較,a:P<0.012.3 ReA

12、患者的免疫球蛋白檢測結(jié)果ReA患者的血清IgG含量與正常對照組相比明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);血清IgA、IgM水平與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表2。表2 兩組血清免疫球蛋白水平與對照組比較,b:P<0.053 討 論T細胞亞群對機體免疫功能的穩(wěn)定起著重要的調(diào)節(jié)作用,尤其是輔助性T細胞和抑制性T細胞之間的相互協(xié)調(diào)與制約,產(chǎn)生適度的免疫應(yīng)答,使之既能清除異物抗原,又不至于損傷自身組織。CD4+T細胞為輔助/誘導T細胞(Th/Ti),CD8+T細胞為抑制/殺傷細胞(Ts/CTL)。正常情況下CD4+和CD8+T細胞之

13、間始終保持一恒定的比例,構(gòu)成宿主細胞免疫調(diào)節(jié)的重要環(huán)節(jié)。CD4+與CD8+T細胞的平衡在抑制腫瘤、抗感染和自身免疫性疾病中起著重要作用3。本組資料分析了56例反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者的T淋巴細胞亞群,發(fā)現(xiàn)ReA患者CD4+T細胞百分率、CD4+/CD8+比值明顯升高,CD3+和CD8+T細胞百分率無明顯變化,與文獻報道的類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)及強直性脊柱炎(AS)結(jié)果基本一致4,5。這些提示反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者輔助性T細胞數(shù)量增多,抑制性T細胞數(shù)量相對減少,導致Th細胞功能亢進,Ts細胞抑制功能相對不足,使T細胞的免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)失衡,引起細胞介導的免疫損傷。免疫球蛋白是由漿細胞合成和分泌的一組能與抗原發(fā)生特異

14、性結(jié)合的球蛋白,是免疫細胞受到病原微生物等抗原刺激后產(chǎn)生的重要免疫分子。CD19+是B淋巴細胞膜表面標志,B細胞識別抗原后增殖分化為漿細胞,漿細胞分泌免疫球蛋白進而介導體液免疫。本研究結(jié)果顯示反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者CD19+B細胞百分率明顯升高，血清IgG含量也升高。王喜英等6在類風濕關(guān)節(jié)炎中也有類似的報道。這些表明ReA患者的體液免疫存在一定程度上的亢進,外周血中B細胞明顯增多,免疫球蛋白表達失控,產(chǎn)生大量自身抗體,導致免疫病理反應(yīng)造成組織器官的損傷。CD16+CD56+是NK細胞的標志物,表達的量可能與NK細胞的數(shù)量或功能有關(guān)。NK細胞作為先天性免疫系統(tǒng)中的重要成分,與先天性和獲得性免疫系統(tǒng)其他

15、成分間存在廣泛而復雜的相互關(guān)系,在機體免疫監(jiān)視過程中發(fā)揮重要功能。Ohtsuka等7研究表明系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者NK細胞的數(shù)量和功能較正常人低下。AzuzLiberman等8研究發(fā)現(xiàn)AS患者的NK細胞活性被抑制,NK細胞在AS發(fā)病機制中起作用。分析本組資料發(fā)現(xiàn)ReA患者與對照組相比,NK細胞數(shù)量明顯降低,提示ReA患者的先天性免疫存在異常,而NK細胞對T、B細胞有協(xié)調(diào)作用,同時NK細胞還能抑制B細胞的活化,調(diào)節(jié)抗體的產(chǎn)生,NK細胞的活性降低可導致B細胞過度增殖,因此NK細胞也參與了ReA的發(fā)病過程。綜上所述,ReA患者體內(nèi)CD4+T細胞百分率及CD4+/CD8+比值明顯增高,B細胞及血

16、清免疫球蛋白的水平升高,NK細胞數(shù)量明顯降低。這些免疫指標顯示ReA患者體內(nèi)細胞免疫紊亂,體液免疫增強,天然免疫功能低下。故監(jiān)測ReA患者外周血淋巴亞群和免疫球蛋白有助于了解機體的免疫狀態(tài),對于我們尋找有效方法重建免疫平衡,調(diào)節(jié)患者體內(nèi)免疫失衡狀態(tài),治療反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎,具有一定的臨床價值?！緟⒖嘉墨I】 1 Rihl M, Klos A, Kler L, et al. Infection and musculoskeletal conditions: Reactive arthritisJ. Best Pract Res Clin Rheumatol, 2006, 20(6): 1119-1137

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