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文檔簡(jiǎn)介
1、日本錦鯉感染嗜水氣單胞菌引起的相關(guān)病毒血癥的組織病理學(xué)觀察摘要:嗜水氣單胞菌感染引發(fā)相關(guān)ANA-AKI-BYO病毒血癥是目前在日本錦鯉有高度傳染性的一種疾病。當(dāng)前的研究,是為了確定電暈狀病毒和A之間的相互關(guān)系。我們通過(guò)患病鯉魚(yú)與正常鯉魚(yú)之間的自然同居進(jìn)行細(xì)菌的人為傳染實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)正常鯉魚(yú)皮膚已被輕微受損。實(shí)驗(yàn)成功表現(xiàn)出電暈狀病毒病毒血癥和A的聯(lián)合作用。在嗜水氣單胞菌的感染中。患病的鯉魚(yú)表現(xiàn)出規(guī)模囊性水腫,腹水及眼球突出,皮膚形成潰瘍等癥狀。另外還有由于電暈狀病毒和A引起感染的病理變化。發(fā)生嗜水氣單胞菌感染后,全身水腫的皮膚表現(xiàn)出表皮分離,擴(kuò)大規(guī)模液囊,以及真皮水腫并伴有出血和壞死。底層橫紋肌水腫且
2、肌肉纖維發(fā)生明顯萎縮。肝細(xì)胞發(fā)生萎縮或腫脹呈顆粒狀。腎小管細(xì)胞呈空泡變性,混濁腫脹,壞死和損傷。在脾和造血組織的巨噬細(xì)胞以及肝細(xì)胞中發(fā)生鐵血黃素沉積。因?yàn)榧?xì)菌細(xì)胞不直接侵入這些受影響的組織,所以這些變化可能受細(xì)菌毒素誘導(dǎo)。 關(guān)鍵詞:病毒血癥 科羅納類(lèi)病毒 嗜水氣單胞菌 鯉魚(yú) 皮膚潰瘍 全身水腫 腎病簡(jiǎn)介 據(jù)最近報(bào)道,一種新的病毒病,viremia - associated ANA-AKI-BYO,在日本錦鯉中普遍流行(宮崎等,2000)。我們確定首次患電暈狀病毒(CLV)血癥的患病鯉魚(yú)是受到水傳播的二次細(xì)菌入侵,導(dǎo)致皮膚潰瘍的形成。且CLV對(duì)鯉魚(yú)本身是致死的。 1999年,通過(guò)長(zhǎng)期觀察發(fā)現(xiàn)患病
3、鯉魚(yú)出現(xiàn)規(guī)模囊水腫,眼球突出,腹水以及皮膚潰瘍等癥狀。另外可以從病變真皮和內(nèi)臟器官分離的CLV,從水腫鱗片囊,潰瘍性病變和腹水中分離嗜水氣單胞菌。病毒血癥CLV與嗜水氣單胞菌聯(lián)合感染并不令人意外,因?yàn)樗耙驯淮蟊娝?。雖然病毒和細(xì)菌,以及其病理特征之間的相互關(guān)系尚未完全確定,但眾所周知,患病鯉魚(yú)患有“鯉春病毒血癥”(Rhab- dovirus鯉魚(yú)感染,F(xiàn)ijan等1971)常常是因?yàn)楦腥臼人畾鈫伟?。而?fù)感染被稱(chēng)為“傳染性水腫'(Fijan1972)。 在本研究中,這種復(fù)雜的疾病被發(fā)現(xiàn)在飼養(yǎng)有高度傳染性鯉魚(yú)群的池塘中。因此,我們進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)以確定病毒和細(xì)菌是如何被同居的自然患病鯉魚(yú)傳
4、染給皮膚已經(jīng)輕微受損的健康鯉魚(yú)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),合并感染成功實(shí)現(xiàn)。并通過(guò)電子顯微鏡檢查病魚(yú)組織,觀察其復(fù)雜的病理特征來(lái)確定疾病與CLV和嗜水氣單胞菌之間的相互關(guān)系。 材料與方法患病的鯉魚(yú)和鯽魚(yú)的健康:患病鯉魚(yú)(3歲齡,200300克),;來(lái)至于飼養(yǎng)在1999年6月和七月之間的寒春的魚(yú)群中,通常表現(xiàn)為水腫但不發(fā)生皮膚潰爛。在六月收集五條病魚(yú)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查和病毒和細(xì)菌分離。七月,從同一組的魚(yú)中再次收集16條病魚(yú)作為供體進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)。為實(shí)驗(yàn)從池塘中挑選未感染“viremia-associated ana-aki-byo”病毒的健康鯉魚(yú)(2至4歲齡)。這些魚(yú)立即以50ppm的福爾馬林溶液浸泡24小時(shí)以除
5、去皮膚和鰓上的寄生物。感染實(shí)驗(yàn):每?jī)芍黄つw潰瘍且自然患病的鯉魚(yú)被安置在6個(gè)養(yǎng)魚(yú)池(30L 20)中通氣,而剩下的病魚(yú)被放養(yǎng)在水箱中(300 L 20)。 在實(shí)驗(yàn)期間,當(dāng)病魚(yú)在養(yǎng)魚(yú)池中死亡,需要從另備份組中選取另一條病魚(yú)替換。同居前,去除掉幾個(gè)身體受到輕度損傷的健康鯉魚(yú)(2年生,40至70g)。在每一個(gè)養(yǎng)魚(yú)池中,3或四只健康魚(yú)與兩條病魚(yú)進(jìn)行共同飼養(yǎng)。當(dāng)實(shí)驗(yàn)魚(yú)變得奄奄一息,立即清除它們,并更換新的實(shí)驗(yàn)魚(yú)。這個(gè)實(shí)驗(yàn)中,在30 天20°C環(huán)境下,.共有30條實(shí)驗(yàn)魚(yú)經(jīng)歷了同居實(shí)驗(yàn)。作為對(duì)照,6例健康魚(yú)(2歲,50克)的皮膚已經(jīng)損傷,以同樣的方式作為實(shí)驗(yàn)魚(yú)的健康鯉魚(yú)(3歲,類(lèi)似于自然病
6、魚(yú)的大?。┮渤霈F(xiàn)相同癥狀。病毒和細(xì)菌的分離:根據(jù)宮崎等人的說(shuō)法,CLV病毒是從天然病魚(yú)和實(shí)驗(yàn)病魚(yú)中分離出來(lái)的 (2000)。從潰瘍性病變皮膚,水腫鱗片囊,腹水和腎中分離的細(xì)菌,在心臟浸液瓊脂平皿上20下進(jìn)行3天培養(yǎng)。對(duì)于大多數(shù)從水腫鱗片囊,腹水和腎臟的樣品,采用API20測(cè)試生長(zhǎng)在瓊脂平板上單一類(lèi)型的細(xì)菌是否是嗜水氣單胞菌。這種細(xì)菌表現(xiàn)出對(duì)綿羊血瓊脂平板上溶血活性。這顯示出突出的均裂一些菌落選擇人工感染。人工感染嗜水氣單胞菌:CLV的致病性在我們以前的研究(宮崎等,2000)有所描述。我們對(duì)分離的嗜水氣單的致病性進(jìn)行了檢測(cè)。生物體在20下培養(yǎng)在心臟浸液肉湯(HI肉湯)48小時(shí)。離心培養(yǎng)物以30
7、00×g的速度離心15分鐘,使細(xì)胞懸浮在鹽水上。向10條鯉魚(yú)進(jìn)行皮下注射菌懸液(0.5毫升),劑量為7.8×104.0 CFU ml-1。為對(duì)照,將5條鯉魚(yú)注射相同量的無(wú)菌鹽水。如后面所指出的,在HI肉湯培養(yǎng)所述細(xì)菌并不致病。我們?cè)噲D在Luria-BERTANI肉湯(LB肉湯用于培養(yǎng)大腸桿菌;細(xì)菌蛋白胨10克,酵母提取物5g,氯化鈉5克,水1000ml)中培養(yǎng)細(xì)菌,其中補(bǔ)充有從健康鯉魚(yú)(4年生2公斤)中提取的5鯉魚(yú)血清。因?yàn)槭人畾鈫伟?jīng)常被發(fā)現(xiàn)在患病金魚(yú)鯽魚(yú)(Kubota等.1981),鯽魚(yú)內(nèi)(Miyazaki & Kaige ,1986年)和日本鰻鱺鰻鱺(Egu
8、sa 1978, Miyazaki 1980, Kubota 等. 1981),以及健康魚(yú)(Sorimachi & Egusa 1971, Aoki 1974, 1975, Kanai 等. 1977)的消化腸道中,所以選擇使用LB培養(yǎng)基。因此,在該方面,嗜水氣單胞菌類(lèi)似于大腸桿菌。此外,嗜水氣單胞菌出現(xiàn)在患病鯉魚(yú)的鱗片囊和腹水中。因此,我們選用LB培養(yǎng)基為基礎(chǔ)液,用鯉魚(yú)血清補(bǔ)充它。細(xì)菌在20下可以良好生長(zhǎng)在該培養(yǎng)基中48小時(shí)。再次制備細(xì)菌懸浮液,5條鯉魚(yú)注入2.6×10 5.0 CFU毫升-1或1 ml的劑量于皮膚下,在6條鯉魚(yú)腹部空腔內(nèi)注射同樣劑量0.5ml 5.2
9、15;10 5.0 CFU毫升-1的菌懸液。建立兩個(gè)對(duì)照組,每一個(gè)類(lèi)型的注射,5魚(yú)注射等量的無(wú)菌生理鹽水并在20°C下的養(yǎng)魚(yú)池中.喂養(yǎng)觀察了30天,然后取樣進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。沒(méi)有注射的魚(yú)觀測(cè)其死亡期。病理組織學(xué)和電子顯微鏡檢查:用1.5氨基甲酸乙酯溶液進(jìn)行麻醉,對(duì)外部采樣后再進(jìn)行內(nèi)部解剖和觀察。用于組織學(xué)觀察的病變真皮和內(nèi)臟器官的組織固定在10磷酸鹽緩沖的福爾馬林溶液中。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備蘇木精 - 伊紅(HE),阿贊,吉姆薩(對(duì)于細(xì)菌),柏林藍(lán)(對(duì)于含鐵血黃素)和高碘酸希夫(PAS)用于固定組織的生化反應(yīng)。根據(jù)電子顯微鏡(EM)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將剩余的病變真皮,心臟,脾和腎的組織用70的K
10、arnovsky和1OSO4的溶液處理并固定。 結(jié)論 病魚(yú)的自然爆發(fā) 自然患病鯉魚(yú)出現(xiàn)松果樣外觀(規(guī)模囊性水腫)腫脹并伴隨著皮內(nèi)出血及毛細(xì)血管擴(kuò)張,眼球突出和腹部腹水膨脹另外還形成了皮膚潰瘍(圖1A)。皮膚潰瘍發(fā)生后的10到14天,病魚(yú)逐漸發(fā)展上述水腫變化且活著。腹腔內(nèi)包含有清晰血性腹水。肝,脾,腎和鰓表色蒼白。在一些魚(yú)中,腸和脾出血,橫紋肌有明顯水腫,并含有渾濁或發(fā)白肌纖維。在所有的病魚(yú)中,可以從規(guī)模囊水腫和腹水和A.中分離出嗜水氣單胞菌進(jìn)行純培養(yǎng)。從病變的潰瘍皮膚中將嗜水氣單胞菌與其他細(xì)菌進(jìn)行分離。我們可以成功的從潰瘍性皮膚,脾,腎和心臟中分離出宮崎等人(2000)所說(shuō)的能導(dǎo)致相同的細(xì)胞病
11、變效應(yīng)的那種病毒。圖.1.鯉魚(yú) (A)自然患病鯉魚(yú)吻部,和鰓蓋尾鰭顯示潰瘍性病變,且有規(guī)模囊水腫,內(nèi)皮出血,腹水及眼球突出。(B)患病實(shí)驗(yàn)用鯉魚(yú)與同居自然病魚(yú):這種魚(yú)表現(xiàn)在對(duì)一個(gè)受傷的部位的身體發(fā)生皮膚潰瘍伴且隨著出血和水腫規(guī)模囊。 潰瘍性病變損失的組織病理學(xué)癥狀大多與“viremia-associated ANA-AKI-BYO'相同(Miyazaki等人,2000)。然而,在一些區(qū)域顯示水腫規(guī)模囊和皮內(nèi)出血,且水腫規(guī)模囊不斷擴(kuò)大,表皮脫落,真皮疏松結(jié)締中組織規(guī)模囊周?chē)鲅?,壞死纖維細(xì)胞,裂解紅細(xì)胞和擴(kuò)張毛細(xì)血管上層有纖維蛋白的沉積。底層真皮致密結(jié)締組織也出現(xiàn)水腫。皮下脂肪組織有明
12、顯的出血和炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)。橫向肌肉有明顯的水腫和出血,肌肉纖維是廣泛萎縮且變得破碎(圖2A)。雖然細(xì)菌是從水腫規(guī)模型囊分離的,但是姬姆薩染色結(jié)果顯示,細(xì)菌細(xì)胞在這些病變沒(méi)有顯著倍增。在電鏡觀察下,皮膚損傷處中毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(圖2B)和纖維細(xì)胞(圖2D)中顯示的許多CLV顆粒伴隨著形成電子致密夾雜物,但在細(xì)胞質(zhì)中沒(méi)有狹窄管狀結(jié)構(gòu)。此外,許多壞死毛細(xì)血中的血管內(nèi)皮細(xì)胞呈現(xiàn)細(xì)胞核退化,線(xiàn)粒體退化現(xiàn)象,基底膜很多小塊狀物質(zhì)且邊界不清。因此,毛細(xì)管被部分損壞,并允許紅細(xì)胞從毛細(xì)血管(圖2C)泄漏。受毛細(xì)血管影響的周邊膠原纖維發(fā)生水腫分離并呈邊界不清帶型。底層的橫向肌肉包含許多肌纖維呈現(xiàn)出碎片化的肌原纖
13、維,線(xiàn)粒體退化和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大。 在心臟的心室和心房,心臟肌纖維含有支離破碎的肌原纖維發(fā)生空泡變性,或包含凝結(jié)肌原纖維存在萎縮心肌的內(nèi)層。在心肌的外層,出血有時(shí)發(fā)生在受損的肌肉纖維(圖3A)。紅細(xì)胞的小血塊形成在管腔心內(nèi)膜上。在一些魚(yú)中,管腔包含了很多來(lái)源于紅細(xì)胞裂解的細(xì)胞核。心外膜表現(xiàn)出血和周?chē)鷶U(kuò)張血管炎性細(xì)胞滲透。然而,沒(méi)有證據(jù)表明,在壞死性病變心臟內(nèi)有任何增殖活躍的細(xì)菌細(xì)胞。電子顯微鏡下的心肌纖維,通常受影響的纖維具有零散肌原纖維束,許多線(xiàn)粒體退化,而且?guī)缀鯖](méi)有糖原顆粒(圖3B)。這一批肌纖維均顯著零散和紊亂,或者是裂解伴有腫脹帶狀。退化線(xiàn)粒體顯示2種不同類(lèi)型損壞的:要么擴(kuò)大要么凝固。擴(kuò)大線(xiàn)
14、粒體通常顯示為圓形,嵴損壞且無(wú)規(guī)則。在凝結(jié)的線(xiàn)粒體中,嵴大部分消失了,取而代之用非晶體物質(zhì)。二價(jià)陽(yáng)離子的許多基質(zhì)的電子致密顆粒會(huì)沉積在這些損傷的線(xiàn)粒體??张菁±w維具有很多空的空間,在肌漿中有擴(kuò)展流暢的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(SER)和小數(shù)目CLV顆粒,而萎縮的肌肉纖維的肌漿中的CLV粒子通常很難觀察到.圖.2. 鯉魚(yú)在自然爆發(fā)。(A-D)水腫病變皮膚。(A)皮膚水腫病變。表皮被分離。底層真皮疏松結(jié)締組織是高度水腫,并伴隨著輕微的出血。出血性皮損好發(fā)于皮下的脂肪組織和肌肉外側(cè)。 HE。比例尺=200微米。(B)真皮毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞的電子顯微鏡照片,出現(xiàn)許多電暈狀病毒(CLV)顆粒(箭頭)并伴隨著電子致密物質(zhì)的
15、生成的夾雜結(jié)晶?;啄るy以界定。=1微米。 (C)真皮毛細(xì)血管的電子顯微照片展現(xiàn)具有壞死內(nèi)皮細(xì)胞和未清除的基底膜。毛細(xì)血管(箭頭)被部分損壞,并允許紅細(xì)胞漏出。比例尺= 2.5微米。(D)一種皮膚纖維細(xì)胞的電子顯微照片。許多CLV顆粒(箭頭)和電子致密材料出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中。比例尺=2m的。 B:基底膜; C:膠原纖維; D:真皮致密結(jié)締組織; E:紅細(xì)胞; G:粒細(xì)胞; H:出血;I:含結(jié)晶夾雜電子致密材料; L:真皮疏松結(jié)締組織; M:橫向肌肉 在肝臟中,肝細(xì)胞萎縮或腫脹且呈粒狀外形(圖3C)。有少數(shù)肝細(xì)胞呈現(xiàn)含鐵血黃素沉積顆粒和含鐵血黃素巨噬細(xì)胞的血竇。該含鐵血黃素顆粒柏林藍(lán)染色后
16、為深藍(lán)色。在電子顯微鏡觀察下的混濁腫脹肝細(xì)胞,其擴(kuò)大核邊際顯示有染色質(zhì)沉積,嵴破壞的線(xiàn)粒體明顯擴(kuò)大,支離破碎,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增大(RER),沒(méi)有糖原顆粒,且電子透亮細(xì)胞質(zhì)中無(wú)CLV顆粒(圖3D)。一些膨脹RER包含電子致密物質(zhì)。萎縮肝細(xì)胞具有少量凝結(jié)的線(xiàn)粒體,許多零散的RER,含鐵血黃素的夾雜物具有高電子密度的細(xì)顆粒和無(wú)糖原顆粒。脾中許多壞死細(xì)胞在漿和護(hù)套組織發(fā)生纖維蛋白沉積。脾中大多數(shù)巨噬細(xì)胞顯示有許多有吞噬作用的紅細(xì)胞和含鐵血黃素沉積或蠟樣色素(圖4A)。電子顯微鏡下的脾臟,可見(jiàn)護(hù)套組織中的網(wǎng)狀細(xì)胞在包含了眾多的含鐵血黃素電子致密細(xì)顆粒。(圖4B)。網(wǎng)狀細(xì)胞的護(hù)套組織和血竇壞死并顯示許多CLV
17、顆粒,在電子透亮的細(xì)胞質(zhì)中有許多狹窄管狀,含有結(jié)晶夾雜電子致密物質(zhì),和脹擴(kuò)大的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(圖4C)。 腎臟顯示出腎小管上皮細(xì)胞混濁腫脹,空泡變性并伴隨有核變性,管狀破壞隨后壞死(圖4D)。有時(shí),這些受影響腎小管細(xì)胞,像正常腎小管上皮細(xì)胞一樣,含有含鐵血黃素顆粒。腎小球包含的壞死細(xì)胞有時(shí)會(huì)被部分摧毀。這些壞死性病變并沒(méi)有表現(xiàn)出任何細(xì)菌入侵的證據(jù)。在電子顯微鏡下,空泡腎小管細(xì)胞顯示出有巨大的空余空間,變圓,線(xiàn)粒體發(fā)生退化,電子透亮細(xì)胞質(zhì)發(fā)生網(wǎng)狀擴(kuò)大(圖5A)。凝固性壞死的腎小管細(xì)胞表現(xiàn)出濃縮線(xiàn)粒體中的嵴消失。在整個(gè)細(xì)胞(圖5B)中沉積許多為二價(jià)陽(yáng)離子的基層電子致密顆粒。此外,壞死的腎小管上皮細(xì)胞有明顯
18、破裂的嵴且擴(kuò)大了的線(xiàn)粒體和在電子透亮細(xì)胞質(zhì)中的廣大RER(圖5C)。因此,在細(xì)胞質(zhì)或管狀細(xì)胞周?chē)娜魏渭?xì)菌細(xì)胞內(nèi)都沒(méi)有顯示出任何能影響腎小管細(xì)胞的CLV粒子。在造血組織中,有廣泛的壞死細(xì)胞和少量巨噬細(xì)胞顯示有吞噬紅細(xì)胞和含鐵血黃素沉積。在電鏡下,各種各樣的細(xì)胞壞死且顯示出許多CLV顆粒,在電子透亮細(xì)胞質(zhì)中電子致密物質(zhì)含有結(jié)晶夾雜物和管狀結(jié)構(gòu)。圖. 3. 鯉魚(yú)在自然中爆發(fā)。(A)在心肌外層,出血發(fā)生在肌肉受損纖維中。內(nèi)層心肌纖維是高度空泡化。 HE。比例尺=100微米。(B)心肌纖維的電子顯微照(米),肌原纖維束支離破碎呈現(xiàn)腫帶型。一個(gè)開(kāi)放的箭頭指示許多腫脹與嵴破壞的線(xiàn)粒體。黑色箭頭示出許多凝固
19、線(xiàn)粒體。糖原顆粒消失在一個(gè)高度空泡的肌漿中。比例尺=1微米。(C)在肝臟中,肝細(xì)胞顯示出顆粒狀且腫脹的外觀。一個(gè)箭頭指向含鐵血黃素的巨噬細(xì)胞在正弦位置。 HE。比例尺= 50微米。(D)電子顯微照片中飯肝細(xì)胞呈現(xiàn)混濁腫脹。細(xì)胞擁有2膨脹核邊際顯示染色質(zhì)沉積,有明顯損管狀嵴且膨脹的線(xiàn)粒體破,破碎膨脹擴(kuò)大的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(RER),而在電子透亮細(xì)胞質(zhì)中沒(méi)有糖原顆粒。比例尺=1微米。圖. 4.鯉魚(yú)在自然中爆發(fā)。(A)脾臟中巨噬細(xì)胞中有許多吞噬紅細(xì)胞和柏林藍(lán)染色為陽(yáng)性含鐵血黃素沉積。比例尺=100微米。(B)從電子顯微照片中觀察到,脾臟的保護(hù)組織中有吞噬作用的巨噬細(xì)胞存在。它們包含許多含鐵血黃素電子致密細(xì)
20、顆粒。比例尺=2微米。(C)病毒感染的電子顯微鏡照片中,網(wǎng)狀細(xì)胞排列在脾竇內(nèi)。出現(xiàn)許多CLV顆粒(箭頭)和管狀結(jié)構(gòu)。小箭頭指向細(xì)胞質(zhì)中CLV病毒粒子。一個(gè)大箭頭指示出從細(xì)胞釋放出來(lái)的CLV病毒粒子。比例尺= 900納米。 (D)腎臟中,顯示許多腎小管上皮細(xì)胞空泡變性,壞死,腎小管被破壞。 HE。比例尺=100微米。 H:含鐵血黃素顆粒的團(tuán)塊; R:網(wǎng)狀纖維; S:脾竇。 圖.5 .健康鯉魚(yú)。(A-C)自然病魚(yú)。(A)電子顯微照片中腎小管上皮細(xì)胞呈現(xiàn)空泡變性。電子透亮細(xì)胞質(zhì)有空泡變圓且退化的的線(xiàn)粒體。比例尺= 5微米。(B)在電子顯微圖中,腎小管上皮細(xì)胞呈現(xiàn)凝固性壞死。顯示有無(wú)嵴凝集的線(xiàn)粒體,整
21、個(gè)細(xì)胞中沉積有許多電子二價(jià)陽(yáng)離子的致密顆粒。比例尺=4微米。(C)電子顯微鏡圖可見(jiàn)壞死的腎小管上皮細(xì)胞。它們有邊緣色素沉著的細(xì)胞核,嵴破損的增大線(xiàn)粒體,電子透亮細(xì)胞質(zhì)中的增大RER。比例尺=2微米。(D)在沒(méi)有表現(xiàn)外部病變實(shí)驗(yàn)病魚(yú)的造血組織的電子顯微圖。壞死的細(xì)胞含有許多CLV顆粒(箭頭)。比例尺=2微米。 B:腎小管上皮基底膜; C:毛細(xì)管上腎小管。共養(yǎng)的感染實(shí)驗(yàn) 共有30條實(shí)驗(yàn)鯉魚(yú)經(jīng)歷與自然患病鯉魚(yú)的同居,其中28條死亡或?yàn)l死再第4日至28天之間(圖6)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后只有2條活且著沒(méi)有發(fā)生任何病理變化。一共有8條瀕死的魚(yú)除了僅在受傷部位有輕微出血外沒(méi)有其他任何跡象。這8條魚(yú)中有五條瀕死在第
22、4天和6天之間,其他3條瀕死在第10天和16天之間。這些垂死的魚(yú)組織顯示在脾和造血組織有大量的壞死細(xì)胞。其心肌纖維呈萎縮性或空泡化。 電子顯微鏡顯示在脾和造血組織的壞死細(xì)胞中有許多CLV的粒子(圖5D)。與此相反,一共有20條魚(yú)顯示潰瘍性皮膚病變。在4條魚(yú)中,潰瘍性病變形成在傷口部位且它們?yōu)l死于第4天。潰瘍性病變表現(xiàn)壞死的真皮被許多細(xì)菌細(xì)胞入侵。這些魚(yú)在內(nèi)臟器官顯示的病理變化同發(fā)生在垂死魚(yú)的病理變化相似,且沒(méi)有外部跡象。在7天后剩余16魚(yú)變得奄奄一息且通常顯示皮膚潰瘍不僅發(fā)生在傷口部位,此外,在其他一些身體部位也發(fā)生規(guī)模囊水腫,眼球突出和腹水等癥狀(圖1B)。潰瘍性病變顯示的病理組織學(xué)特點(diǎn)大多
23、于自然爆發(fā)找到的那些相同。病變顯示規(guī)模囊水腫水腫的變化和真皮和外側(cè)肌肉的出血(圖7A)。在潰瘍性病變及病變水的皮膚腫中,成纖維細(xì)胞經(jīng)常含有CLV顆粒。其內(nèi)臟器官也表現(xiàn)出于自然爆發(fā)中相同病理跡象。心肌纖維呈萎縮或空泡化,并包含CLV顆粒,肌原纖維束支離破碎,線(xiàn)粒體退化,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大且無(wú)糖原顆粒(圖7B)。在一些魚(yú)中,心腔包含許多裂解紅細(xì)胞且外層心肌出血。在腎臟,在腎病變化的腎小管細(xì)胞通常會(huì)發(fā)生但于自然爆發(fā)的那些魚(yú)比較發(fā)生較少(圖7C)。在造血組織中,壞死細(xì)胞包含許多CLV顆粒,含電子致密物質(zhì)有結(jié)晶內(nèi)含物和管狀結(jié)構(gòu)存在(圖7D)。此外,巨噬細(xì)胞中吞噬紅細(xì)胞和含鐵血黃素,和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量增加。脾臟通
24、常包含大量的壞死細(xì)胞和含吞噬紅細(xì)胞和含鐵血黃素的巨噬細(xì)胞。在肝臟中,表現(xiàn)出的肝細(xì)胞混濁腫脹,并擁有管狀嵴受損的線(xiàn)粒體,擴(kuò)大內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和次級(jí)溶酶體。在大多數(shù)的這些20條魚(yú),嗜水氣單胞菌從可從潰瘍性病變或腹水中分離。CLV也可從脾臟分離。圖7.鯉魚(yú)(A-D)實(shí)驗(yàn)病魚(yú)表現(xiàn)皮膚潰瘍。(A)在水腫患處皮膚,真皮和外側(cè)的肌肉是廣泛水腫和出血。 HE。比例尺=200微米。(B)心肌纖維的電子顯微照片。肌原纖維束支離破碎呈現(xiàn)腫帶型。線(xiàn)粒體擁有零散嵴。糖原顆粒消失。比例尺=1微米。(C)在腎臟中,大部分腎小管上皮細(xì)胞是壞死并裂解。 HE。比例尺=100微米。(D)造血組織電子顯微鏡照片。一個(gè)壞死的細(xì)胞含有許多CLV
25、顆粒(箭頭),含有結(jié)晶夾雜物和管狀結(jié)構(gòu)的電子致密物質(zhì)。巨噬細(xì)胞,紅細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量增加。比例尺=2微米。人工感染嗜水氣單胞菌 注射了加有5鯉魚(yú)血清HI肉湯和LB肉湯培養(yǎng)的細(xì)菌,所有的魚(yú)沒(méi)有顯示任何死亡或任何病理變化,在實(shí)驗(yàn)期間,即使在注射部位的身體。在大多數(shù)的魚(yú)中,細(xì)菌沒(méi)有從腎臟再次分離。在任何被檢查魚(yú)器官內(nèi)臟中也未出現(xiàn)明顯的組織學(xué)變化。討論 Viremia-associated ana-aki-byo是在日本錦鯉中流行的一種病毒。我們確定肌膚潰瘍性病變是CLV細(xì)菌通過(guò)水傳播二次入侵進(jìn)入皮膚被損壞真皮(Miyazaki等人,2000)。A和嗜水氣單胞菌混合感染發(fā)生會(huì)使患病鯉魚(yú)顯示除了皮膚
26、潰瘍以外地規(guī)模囊水腫,眼球突出及腹水等癥狀。這些水腫變化沒(méi)有在只由CLV感染患病的鯉魚(yú)中觀察到。(Miyazaki等人,2000)。與此相反,感染A與嗜水氣單胞菌會(huì)造成鯉魚(yú)水腫變化和皮膚出血,但不會(huì)發(fā)生皮膚潰瘍。在傳輸實(shí)驗(yàn)的同居自然患病鯉魚(yú)中,皮膚已經(jīng)受傷實(shí)驗(yàn)鯉魚(yú)會(huì)瀕死并展出1的2種不同類(lèi)型的外部特征:沒(méi)有外部標(biāo)志,或同時(shí)發(fā)生水腫體征和皮膚潰瘍。在垂死的魚(yú)沒(méi)有外部跡象,有嚴(yán)重心肌損傷,脾和造血組織廣泛壞死。此外CLV可成功分離,顯微鏡顯示壞死細(xì)胞有許多CLV顆粒。這些結(jié)果表明,由于病毒CLV致使這些鯉魚(yú)瀕死。這些魚(yú)的癥狀與那些通過(guò)腹腔內(nèi)接種CLV人工感染的魚(yú)相同(Miyazaki等人,2000)。自然病魚(yú)真皮纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞含有CLV顆粒。VLC似乎是通過(guò)損壞表皮被釋放到水中。因此,健康的鯉魚(yú)通過(guò)輕微的傷口獲得來(lái)自患病鯉魚(yú)體內(nèi)病毒。 與此相反,除了皮膚潰瘍顯示水腫體征實(shí)驗(yàn)患病鯉魚(yú)顯示心肌出血,肝細(xì)胞變性,腎病和含鐵血黃素沉著。電子顯微鏡顯示出真皮損傷纖維細(xì)胞,心肌纖維,脾細(xì)胞和造血細(xì)胞中的CLV顆粒,從而確定CMV感染,含鐵血黃素沉著似乎是由溶
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