smad3在馬兜鈴酸腎病中的作用機制參考PPT

1、logosmad3smad3在馬兜鈴酸腎病在馬兜鈴酸腎病中中的的作用機制作用機制 參考文獻：參考文獻：1.diverse roles of tgf-/smads in renal fibrosis and inflammation2.mechanism of chronic aristolochic acid nephropathy:role of smad3馬兜鈴酸腎病馬兜鈴酸腎病u馬兜鈴酸腎?。R兜鈴酸腎病（aan）：為一種全球性疾病，是使用為一種全球性疾病，是使用中草藥中草藥嚴重的并發(fā)癥嚴重的并發(fā)癥之一之一。然然而而導致導致aan的發(fā)病機制的發(fā)病機制尚不尚不明確明確，繼而阻礙了對繼而阻礙

2、了對aan病人的有效治療。病人的有效治療。uaan的特征是的特征是進行性腎損害進行性腎損害，表現為腎小管壞死、萎，表現為腎小管壞死、萎縮和腎間質纖維化?？s和腎間質纖維化。腎小管間質纖維化腎小管間質纖維化是終末期腎病是終末期腎病的共同特征，也是決定腎臟疾病進展的主要因素，因的共同特征，也是決定腎臟疾病進展的主要因素，因此深入研究腎纖維化發(fā)生發(fā)展的機制尤為重要。此深入研究腎纖維化發(fā)生發(fā)展的機制尤為重要。u腎臟纖維化是以腎臟纖維化是以膠原蛋白膠原蛋白合成增加、降解受到抑制導合成增加、降解受到抑制導致大量致大量細胞外基質（細胞外基質（ecm）不恰當沉積和分布為特點。不恰當沉積和分布為特點。tgf-tg

3、f-的生物特性的生物特性u各種腎病發(fā)展至腎纖維化與多種細胞因子有關，其中轉化生長因子（tgf-）/smad信號通路在腎纖維化過程中起重要作用，并且被公認為是最主要的致纖維化通路。utgf-(transforming growth factor beta,轉化生長因子-beta)是一種多向性、多效性的細胞因子，以自分泌或旁分泌的方式通過細胞表面的受體信號轉導途徑調節(jié)細胞的增殖、分化、凋亡，對細胞外基質的合成、創(chuàng)傷的修復、免疫功能等有重要的調節(jié)作用。創(chuàng)傷的修復、免疫功能等有重要的調節(jié)作用。smads smads 蛋白蛋白smadssmads蛋白是蛋白是tgf-tgf- / smad/ smad信號

4、通路中信號通路中細胞內信號轉導細胞內信號轉導的中的中介分子。介分子。smad蛋白家族受體調節(jié)型smad蛋白receptor regulate smad共同調節(jié)型smad蛋白common mediator smad抑制型smad蛋白inhabitory smadsmad2、smad3smad1、smad5smad8、smad9smad4smad6、smad7紅色標記者為參與紅色標記者為參與tgf-tgf-信號傳導的信號傳導的smadsmad蛋白。蛋白。tgf-/smad3信號通路的傳導信號通路的傳導信號通路在傳導中的信號通路在傳導中的3 3個主要步驟個主要步驟1 1、tgf-tgf-與細胞表面受

5、體結合，形成異源三聚體與細胞表面受體結合，形成異源三聚體2 2、異源三聚體通過激活、異源三聚體通過激活r-smadr-smad蛋白，將信號傳導蛋白，將信號傳導至胞漿內至胞漿內3 3、r-smadr-smad與與co-smadco-smad結合后，轉移至細胞核，與結合后，轉移至細胞核，與靶基因結合，調節(jié)蛋白合成靶基因結合，調節(jié)蛋白合成tgf-/smad3信號轉導示意圖信號轉導示意圖u本研究進行了一項本研究進行了一項假設假設試驗，即假設轉化生長因子試驗，即假設轉化生長因子/smad3是導致慢性是導致慢性aan的關鍵途徑。的關鍵途徑。u本研究分為體內試驗和體外試驗兩部分。本研究分為體內試驗和體外試驗

6、兩部分。體內試驗體內試驗技術路線技術路線ihc、rt-pcrt-ihc、western blot 、rt-pcrihc、rt-pcrtgf-i，p-smad2/3-sma 和e-cadcol.i和col.iii腎功能檢測建立smad3 wt/ko caan模型血清肌酐試劑盒考馬斯-尿蛋白結果結果結果結果b：4周后，smad wt小鼠scr含量升高顯著，smad3 ko升高減弱。c：整體水平上smad3ko小鼠蛋白尿量增加不明顯。說明smad3ko對腎損 傷有保護作用smad3 wt col1和3大量積聚，smad3 ko未出現積聚現象。結果結果e-cad和-smaa和b:smad3 wt腹腔注

7、射4周 c:smad3 ko腹腔注射4周a.b.d:-sma（肌成纖維細胞）大量蓄積c.d:蓄積程度減弱。結果結果wt型-sma表達顯著增加，ko型沒有出現增加顯著現象。體外試驗總結體外試驗總結 小結（一）小結（一）u以上實驗結果表明以上實驗結果表明smad3蛋白在蛋白在caan過程中有過程中有重要作用，基因敲除重要作用，基因敲除smad3后可明顯減少后可明顯減少caan模型中模型中scr和蛋白尿的含量，有效降低和蛋白尿的含量，有效降低col.i、col.iii、-sma、tgf-1、p-smad2/3的的表達量，從而抑制了細胞外基質大量蓄積造成的纖表達量，從而抑制了細胞外基質大量蓄積造成的纖

8、維化以及其它更嚴重的腎臟疾病。維化以及其它更嚴重的腎臟疾病。體外試驗體外試驗細胞試驗細胞試驗aaaa處理處理retcretcaa處理導入sirna后的retctgf-1、col.i、-sma、e-cadaa處理正常處理正常tec以上細胞外實驗說明aa對腎小管上皮細胞有較嚴重的損傷作用，導致col.i、-sma、tgf-1大量蓄積，e-cad表達量下降。aa處理正常處理正常teca表示smad2的sirna不影響smad3的表達，smad3的sirna不影響smad2的表達然后進行b實驗b表示添加aa和s3-sirna的細胞中，-sma下降，e-鈣粘蛋白升高；添加aa和s3-sirna的細胞中，

9、-sma和e-鈣粘蛋白都有上升趨勢。aa處理導入干擾處理導入干擾rna的的tecsmad3 sirna：本該升高的降低了，smad2 sirna：原來升高的現在還是升高。結論結論 小結（二）小結（二）uaaaa可引起大鼠腎小管上皮細胞可引起大鼠腎小管上皮細胞col.icol.i、-sma-sma、tgf-1tgf-1上調，引起上調，引起e-e-鈣粘蛋白下調，且都呈現一鈣粘蛋白下調，且都呈現一定的時間依賴性和濃度依賴性。加入干擾定的時間依賴性和濃度依賴性。加入干擾rnarna后后證明證明smad3smad3干擾干擾rnarna可以有效的抑制可以有效的抑制col.icol.i、-sma-sma、tgf-1tgf-1的上調及的上調及e-e-鈣粘蛋白的下調，而鈣粘蛋白的下調，而smad2smad2沒沒有明顯作用。有明顯作用?？偨Y總結utgf-/smad3tgf-/smad3信號通路在信號通路在caancaan有重要作用，特有重要作用，特