微生物遺傳復(fù)習(xí)

1、ames試驗 原理：鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株，在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中，除極少數(shù)自發(fā)回復(fù)突變細(xì)胞外，只能分裂幾次，形成顯微鏡下才可見的 微菌落。 受誘變劑作用后，大量細(xì)胞回復(fù)突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成肉眼可見的菌落。菌株鑒定：用于測試的菌株，需經(jīng)基因型和生物學(xué)性狀鑒定，符合要求才能投入使用。 鑒定項目：脂多糖屏障丟失；r因子；紫外線損傷修復(fù)缺陷；自發(fā)回變；回變特性1.脂多糖屏障丟失（rfa）用濾紙浸染結(jié)晶紫溶液，貼放在平板上與各接種平行線垂直相交，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。2.r因子用濾紙條浸濕氨芐青霉素鈉溶液，貼放在平板上，再另用濾紙條浸濕四環(huán)素溶液后貼放于劃線接種的平板上。3.

2、紫外線損傷修復(fù)缺陷（uvrb）劃線接種后，一半接種線用黑玻璃遮蓋，另一半暴露于紫外光下8sec，然后蓋好皿蓋并用黑紙包裹平皿，防止可見光修復(fù)作用。培養(yǎng)同上。4. 自發(fā)回變預(yù)先制備底平板；向滅菌并在水浴內(nèi)保溫45的上層軟瓊脂中注入0.1ml菌液；混勻后傾于底平板上并鋪平。平皿倒置于37溫箱培養(yǎng)48h。5. 回變特性診斷性試驗上層軟瓊脂中除菌液外，還注入已知陽性物之溶液，需活化系統(tǒng)者并加入s9mix，余同上。 組氨酸營養(yǎng)缺陷型由自發(fā)回變即可知。目前推薦使用的一套菌株是ta97、ta98、ta100和ta102。鑒定前先進(jìn)行增菌培養(yǎng)。為鑒定結(jié)果可靠，需同時培養(yǎng)野生型tv菌株，作為測試菌基因型之對照。

3、3、 試驗方法1.斑點試驗1).吸取菌液0.1ml，注入融化并保溫45左右的上層軟瓊脂中混勻，傾于平板上，鋪平冷凝。2).用紙片浸濕受試物溶液，或直接取固態(tài)受試物，貼放于上層培養(yǎng)基的表面，做溶劑對照和陽性對照。在紙片外圍長出密集菌落圈，為陽性；菌落散布，密度與自發(fā)回變相似，為陰性。 2.平板摻入試驗1).將樣液和測試菌液均加入上層軟瓊脂中，混勻后迅速倒平板。2).同時做陰性和陽性對照，每種處理做3個平行。試樣通常設(shè)4個5個劑量。同一劑量各皿回變菌落均數(shù)與各陰性對照皿自發(fā)回變菌落均數(shù)之比，為致變比（mr）。mr值2，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系，背景正常，則判為致突變陽性。四、應(yīng)用1斑點試驗只局限于能在瓊

4、脂上擴散的化學(xué)物質(zhì)，適用于快速篩選大量受試化合物。 2平板摻入試驗可定量測試樣品致突變性的強弱。此法較敏感，獲陽性結(jié)果所需的劑量較低。 3致變作用遲緩或有抑菌作用的試樣，培養(yǎng)時間延長至72h。 4揮發(fā)性液體和氣體試樣，可用干燥器內(nèi)試驗法測試。 5目前，ames試驗作為檢測環(huán)境誘變劑的一組試驗中的首選試驗，廣泛應(yīng)用于致突變化學(xué)物的初篩端粒酶如何保護(hù)染色體的-端粒酶解決末端丟失問題的原因 真核生物線性dna的復(fù)制始于內(nèi)部起始點，以短鏈rna分子作引物，沿5 3方向延伸互補鏈。其中，前導(dǎo)鏈連續(xù)合成，后隨鏈先分段沿5 3方向合成岡崎片段 ，然后切去各段引物，再由dna 連接酶將岡崎片段連接成完整的dn

5、a鏈。分析上 述過程時不難發(fā)現(xiàn)，由于dna聚合酶不能催化 dna鏈3 5方向的延伸，子代dna鏈5端的引 物被切去后會留下一段空隙，導(dǎo)致子代dna分子上 有一段不完整的5末端，dna鏈也會隨著不斷的復(fù)制而逐漸縮短。 端粒酶是一種能將真核生物染色體末端dna端粒dna加以延伸的酶它是一種核酸蛋白質(zhì)復(fù)合物目前認(rèn)為端粒酶是由端粒酶rna組分(telomer2lse rna，tr)，端粒酶相關(guān)蛋白和端粒酶催化亞基三部分組成的蛋自質(zhì)復(fù)合物 p123和est2蛋白上的逆轉(zhuǎn)錄酶基序?qū)τ诙肆Ｃ复?化延伸端粒至關(guān)重要，說明端粒酶是一種特殊類型 的逆轉(zhuǎn)錄酶，其能以自身含有的rna為模板，延伸 染色體的端粒，保證染

6、色體末端復(fù)制的完整。 端粒酶催化端粒延伸模型 嗜熱四膜蟲端粒g鏈上帶有一個13個堿基的懸突(0velllng) (1)端粒酶識別端粒底物末端的ttgggg重復(fù)序列，并與端粒 酶rna上的5"-caaccccaa-3 7模板序列配對；(2)合成trg序 列；(3)端粒酶移位使末端的trggggtiv,重新與模板序列配 對；(4)繼續(xù)延伸端粒，復(fù)制模板序列完成ttggggtrg序列的 合成。能沿 3硝方向先將g鏈延長，再以此為模板合成互補 的c鏈，這樣就保證了子代dna鏈5端的完整性測定從單個細(xì)菌中裂解的噬菌體的數(shù)目 實驗原理：利用單細(xì)胞裂解實驗，將感染噬菌體的細(xì)菌懸浮液在潛伏期之前進(jìn)行

7、高倍稀釋，注入多個試管中，使每個試管中的細(xì)菌數(shù)量不超過一個。經(jīng)過一段時間發(fā)生溶菌后，測定各試管中產(chǎn)生的全部噬菌體數(shù)，得知各個細(xì)胞產(chǎn)生的噬菌體數(shù)目。研究噬菌體感染的方法1.噬菌斑 是噬菌體感染宿主細(xì)菌后在含受體菌的涂布平板上形成肉眼可見的透明圈。嗜菌斑的大小、形狀和透明度、邊緣是噬菌體的特征。一個嗜菌斑是由原來的一個噬菌體侵染細(xì)菌后再反復(fù)侵染造成細(xì)菌裂解的結(jié)果。2感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection，m)m值為單個宿主細(xì)菌細(xì)胞感染的噬菌體顆粒數(shù)， 它等于試驗時所用的噬菌體與細(xì)菌的數(shù)量比例， 即：m 噬菌體顆粒數(shù)/宿主細(xì)菌細(xì)胞數(shù) m值>1000時，宿主細(xì)胞常因噬菌體的

8、過度侵染而 死亡，以致難于實現(xiàn)噬菌體的復(fù)制和擴增。因此， 通常在制備、擴增或保存噬菌體裂解液時，應(yīng)將m 值控制在25之間。進(jìn)行噬菌體雜交試驗時，m值 以510為宜。測定噬菌體的一步生長曲線或裂解 液效價時，m值應(yīng)更低，通常為10-6數(shù)量級實驗材料：e. coli k12 f菌種，牛肉膏蛋白胨固，液體培養(yǎng)基，磷酸緩沖液，氯仿，噬菌體裂解液，素瓊脂液體。實驗步驟：1.制備一定濃度的大腸桿菌懸浮液2.制備一定濃度的噬菌體試樣3.將試樣噬菌體與敏感大腸桿菌細(xì)胞按一定m值混合4.稀釋混合菌液，并分裝到一系列試管保存5.將試管中樣品與大量敏感細(xì)菌混合6.涂布培養(yǎng)7.觀察并記錄每個培養(yǎng)皿上長出的噬菌斑的個數(shù)

9、1.制備一定濃度敏感的大腸桿菌懸浮液 從e. coli k12 f菌種斜面上取一環(huán)菌種，接種于2ml牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，離心10min，棄去上清液，用等體積磷酸緩沖液懸浮細(xì)胞，制成菌懸液。將菌懸液加至帶有攪拌子的小培養(yǎng)皿中，并將培養(yǎng)皿置于紫外燈下方的磁力攪拌器上，先照射1min后打開皿蓋，同時打開攪拌器開關(guān)，用紫外線準(zhǔn)確照射13s后馬上蓋上皿蓋。處理后加入2ml牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，37條件下恒溫避光培養(yǎng)2h。 取上述已避光培養(yǎng)的培養(yǎng)液4ml，加至無菌離心管中，然后加入0.2ml氯仿，振蕩，靜置5min后離心10min。并將上清液吸入新的無菌試管中，在4冰箱中冷凍備用。2.制備一定濃度

10、的噬菌體試樣 將噬菌體裂解液活化后，取0.5ml，用4.5ml/管的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基進(jìn)行10倍系列稀釋至稀釋到原液的10-4。將素瓊脂培養(yǎng)基融化后向每個試管中加入4ml50的素瓊脂液體，待使用。3.將供試噬菌體與敏感細(xì)菌按一定的m值混合，吸附5min后立即取樣并將菌液稀釋至每毫升只含2-3個敏感細(xì)菌細(xì)胞，再從中取 0.2ml分裝到一系列試管中(這樣每一試管平均 不到1個寄主細(xì)胞)。保存30min后將樣品與大量敏感細(xì)菌混合后再涂布在培養(yǎng)平板上，經(jīng)培養(yǎng)后將從每一培養(yǎng)皿上長出的噬菌斑數(shù)平均，即為該噬菌體的裂解量。預(yù)測實驗結(jié)果實驗結(jié)果有三種類型：第一種是大部分培養(yǎng)皿上沒有噬菌斑； 第二種是少數(shù)培

11、養(yǎng)皿上出現(xiàn)幾十甚或一千以上個噬菌斑；第三種是大部分是單個細(xì)菌所釋放的噬菌體所形成 的噬菌斑。噬菌體ti的單菌釋放量多數(shù)是100200。ms2可 高達(dá)510 × 103。兩種噬菌體同時感染，出現(xiàn)噬菌斑則為什么說是突變不同基因位點未出現(xiàn)噬菌斑為什么說突變同一個基因的不同位點噬菌體互補測驗 實驗材料為：五種噬菌體：riia1 riia2 riib1 riib2 野生型 兩種受體細(xì)菌：k12（）型 b型概念：噬菌體t4突變體rii的很多表型相同的突變型，能在e.collb中生長，不能在e.collk(）中生長。已知野生噬菌體能產(chǎn)生噬菌斑，riia1，riia2，riib1，riib2均不能單

12、獨產(chǎn)生噬菌斑。證明突變的顯隱性：和野生型噬菌體同時入侵一個大腸桿菌，若有噬菌斑則突變?yōu)殡[性，若沒有噬菌斑則突變?yōu)轱@性。用兩種突變噬菌體同時入侵大腸桿菌噬菌體突變型的互補測試質(zhì)粒消除時，用的方法都是會引起基因突變的誘變劑，在進(jìn)行質(zhì)粒消除實驗時，如何進(jìn)行區(qū)分？質(zhì)粒消除方法燃料類 非啶類，二苯甲烷類表面活性劑 十二烷基磺酸鈉 苯硫酚 某些脂肪酸抗生素 福利脫氧尿苷 利福平 大炭霉素其他 高溫 紫外線輻射 胸腺嘧啶饑餓處理pcr利用已知序列，篩選質(zhì)粒特定序列，并設(shè)計引物配制體系，進(jìn)行pcr將反應(yīng)產(chǎn)物跑dna瓊脂糖凝膠電泳1.若出現(xiàn)條帶則，說明質(zhì)粒消除失敗2.若不出現(xiàn)條帶，則說明質(zhì)粒消除成功質(zhì)粒篩選抗性

13、利用已知序列，分析篩選是否有抗性基因（如氨芐青霉素抗性、卡納抗生素抗性）利用固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)（加抗生素）1.若菌生長，則說明質(zhì)粒消除失敗2.若菌不生長，則說明質(zhì)粒消除成功瓊脂糖電泳利用一定方法抽提dna（如ctab法、異硫氰酸胍法、堿裂解等）將抽取的dna跑瓊脂糖凝膠電泳1.若出現(xiàn)兩條帶，則質(zhì)粒消除失敗2.若出現(xiàn)單一條帶，則質(zhì)粒消除成功回復(fù)突變將菌在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上培養(yǎng)并傳代1.若傳代若干次后，產(chǎn)生原有性狀菌體，則質(zhì)粒消除失敗2.若傳代若干次后，不產(chǎn)生原有性狀菌體，則質(zhì)粒消除成功如何分析兩個質(zhì)粒是否能共存于同一個宿主細(xì)胞中？質(zhì)粒的不相容性質(zhì)粒不相容性的定義：1. 同種的或親緣關(guān)系相近的兩種質(zhì)粒不

14、能同時穩(wěn)定地保持在一個細(xì)胞內(nèi)的現(xiàn)象，稱為質(zhì)粒不相容性2. 當(dāng)一種新的質(zhì)粒進(jìn)入已經(jīng)含有質(zhì)粒的細(xì)胞中時，若兩種質(zhì)粒同源或近緣，它們就會競爭資源，而競爭的結(jié)果就是一個勝利另一個則被消除。但此過程需要幾代或幾十代或更長的細(xì)菌繁殖周期，而并不是一個快速的過程。（存在松弛控制型質(zhì)粒）3. 不相容群：兩種質(zhì)粒被吸入同一個細(xì)胞內(nèi)，則他們是相容的，屬于不同的不相容群。若兩種質(zhì)粒不能共存于統(tǒng)一細(xì)胞內(nèi)，那么它們是不相容的。質(zhì)粒不相容的機制：1.在保有質(zhì)粒來說十分重要的某個階段，它們不能彼此區(qū)分，這些階段如dna復(fù)制和分離。2.阻遏蛋白：細(xì)菌質(zhì)粒復(fù)制過程中產(chǎn)生一種專一性的阻遏蛋白，它抑制質(zhì)粒的進(jìn)一步復(fù)制，阻遏蛋白本身

15、也同時停止增加。在細(xì)菌生長分裂過程中，阻遏蛋白逐漸稀釋，這時質(zhì)粒便開始復(fù)制。3.負(fù)控制模型：同一不相容群中的不同質(zhì)粒，若復(fù)制子高度同源時，其產(chǎn)生的阻遏蛋白相同，因此若其中一個質(zhì)粒復(fù)制后，增加了阻遏蛋白的濃度，從而阻止第二個質(zhì)粒的復(fù)制，保證正常的拷貝數(shù)，使得同一不相容群中的不同質(zhì)粒不能共存于同一細(xì)胞中。質(zhì)粒不相容的原因：有著相似的分配系統(tǒng)兩個質(zhì)粒也有可能不相容。如果分配裝置形成了一個不同質(zhì)粒的混合對，這可能會導(dǎo)致在細(xì)胞分列式一個質(zhì)粒的兩個拷貝進(jìn)入相同的子細(xì)胞，其結(jié)果是每個細(xì)胞都不攜帶兩個質(zhì)粒。質(zhì)粒不相容的檢驗：質(zhì)粒的不相容性可以使用將一個質(zhì)粒轉(zhuǎn)入含有另一個已知質(zhì)粒的菌體，看其是否能夠獲得新的質(zhì)粒

16、進(jìn)行確定。如果所有的菌株都失去了原有的質(zhì)粒，那么這兩個質(zhì)粒就屬于同一不相容群。（此種方法只適用于嚴(yán)謹(jǐn)控制型質(zhì)粒。）trp突變株遺傳分析本實驗為什么使用不加色氨酸的基本培養(yǎng)基？如果添加色氨酸結(jié)果如何？ 本實驗的目的在于各突變株在特定條件下的表達(dá)情況，其判斷指標(biāo)為能否在給定的培養(yǎng)基上生長。如果實驗所用的培養(yǎng)基加入trp，無論各突變株的表達(dá)情況如何，所有突變株都能獲得所必需的色氨酸而于培養(yǎng)基上正常生長，進(jìn)而就不能考察各突變株的色氨酸表達(dá)情況。trp101trp107哪些屬于條件突變，是否為錯義、無義、移碼、插入或缺失突變？為什么？無義突變：單個堿基置換導(dǎo)致出現(xiàn)終止密碼子（uag、uaa、uga）時，

17、多肽鏈將提前終止合成，所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)（或酶）大都失去活性或喪失正常功能。錯義突變：堿基置換后結(jié)果產(chǎn)生異常蛋白質(zhì)和酶。但也有不少基因由于錯義突變而產(chǎn)生部分降低活性和異質(zhì)組分的酶，從而不完全抑制了催化反應(yīng)，這種基因稱為漏出基因移碼突變：dna鏈上插入或丟失非3的整數(shù)倍個堿基，在讀碼時，由于原來的密碼子移位，導(dǎo)致在插入或丟失堿基部位以后的編碼都發(fā)生了相應(yīng)改變。移碼突變造成的肽鏈延長或縮短。插入、缺失突變：dna分子插入、丟失一段堿基序列。由本例現(xiàn)有信息及上述分析推斷可知，103、104 、 105 、 106 、 107為條件突變且同時最可能是缺失突變。101為無義突變，102最可能為錯義突變。解釋

18、912的雙突變結(jié)果，是否可判斷這些基因產(chǎn)物在色氨酸合成途徑中的作用順序？如何選擇trp101的回復(fù)突變？選擇適當(dāng)?shù)姆椒ê驮噭rp101突變株進(jìn)行誘導(dǎo)；將上述經(jīng)誘導(dǎo)處理的突變株接種到基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)；再將上述培養(yǎng)得到的每系株種經(jīng)饑餓處理后分別接種到相同溫度梯度的一系列不含色氨酸的基本培養(yǎng)基上；最后記錄各株種的生長情況，統(tǒng)計生長情況，分析得出結(jié)論。問答題設(shè)計從土壤中篩選能產(chǎn)生淀粉酶的地衣芽孢桿菌的實驗過程。1) 采樣  （1分） 2） 富集培養(yǎng)  取土樣平攤于一干凈的紙上，從四個角和中央各取一點土，混勻，稱取1g，置于裝有肉

19、湯培養(yǎng)基的三角瓶中，于8090熱水浴中保溫1015min，然后于28搖床上振蕩（120r/min）培養(yǎng)24h。（2分） 3） 涂布分離  將培養(yǎng)液再一次熱處理后，以10倍稀釋法適當(dāng)稀釋，取最后三個稀釋度的稀釋液各0.1ml于無菌的淀粉培養(yǎng)基平板中，每個稀釋度平均兩皿。（2分）  用滅過菌的涂布棒將菌液均勻涂布在淀粉培養(yǎng)基平板上，倒置于30培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h。 挑菌落  用碘液滴加在具有單菌落的淀粉平板中的菌落周圍，由于菌落周圍淀粉被水解而為無色透明，遠(yuǎn)離菌落的淀粉會與碘液反應(yīng)呈蘭色，因此可以根據(jù)透明圈

20、直徑和菌落直徑比值(h/c)大小，挑取比值大的菌落，接種于斜面，30培養(yǎng)24h，備用。（3分） 4）純種鑒定  菌種經(jīng)革蘭氏染色，油鏡觀察，從細(xì)胞形態(tài)及菌落特征進(jìn)行鑒別。（1分） 5）純化  將選定的菌株，于淀粉培養(yǎng)基平板上采用平板劃線分離技術(shù)進(jìn)行純化。（1分） 2.在人類基因組計劃的執(zhí)行甲，為什么要進(jìn)行以微生物為主體的模式生物的全基因組序列測定?哪幾種生物分別是已完成全基因組測序的第一個獨立生活的生物?第一個真核生物?第一個自養(yǎng)生活的生物?因為微生物基因組小，便于測定和分析，可從中獲取經(jīng)驗改進(jìn)技術(shù)方法，從而大大加快了人類基

21、因組計劃的進(jìn)展。此外，微生物基因組包含著原核生物和真核生物，具有一定的代表性。第一個測序的自由生活的生物是流感嗜血桿菌，第一個測序的真核生物是釀酒酵母，第一個測序的自養(yǎng)生活的生物是詹氏甲烷球菌. 3.在細(xì)菌細(xì)胞中，均以環(huán)狀形式存在的染色體dna和質(zhì)粒dna，在質(zhì)粒提取過程中發(fā)生了什么變化?這種變化對質(zhì)粒的檢測和分離有什么利用價值?由于染色體dna分子比質(zhì)粒dna分子大得多，在提取過程中易于斷裂成大小不同的分子片段，但一般情況下仍然比質(zhì)粒大，因此在瓊脂糖凝膠電泳過程中隨機斷裂的染色體dna片段，泳動速度較慢且?guī)筒徽R，而質(zhì)粒dna由于相對分子質(zhì)量小，在提取過程中一般不會斷裂成小片段，

22、相對分子質(zhì)量一致，因此，泳動速度較快，且?guī)驼R，與染色體dna分開，從而有利于質(zhì)粒dna的檢測和分離。 4.根據(jù)你所學(xué)的關(guān)于誘發(fā)突變的知識，你認(rèn)為能否找到一種僅對某一基因具有特異性誘變作用的化學(xué)誘變劑?為什么?理化誘變劑的作用主要是隨機引起dna鏈上堿基發(fā)生置換、顛換或其他損傷，雖然有突變熱點，但并非針對某一基因，誘變劑無基因特異性，誘變作用主要是提高突變率。因此，要獲得某一基因的突變不是靠選用何種誘變劑，而是靠合適的篩選方法。 5.根據(jù)突變的光復(fù)活修復(fù)作用、原理，你認(rèn)為在進(jìn)行紫外線誘變處理時，應(yīng)注意什么?為了使被誘變的細(xì)胞能均勻地受到紫外線照射，你將如何做?在進(jìn)行紫外線

23、誘變處理時應(yīng)注意避光，以防光復(fù)活修復(fù)作用。一般在紅光下操作，在黑暗中培養(yǎng)。在紫外線照射時，盛菌液的培養(yǎng)皿應(yīng)置于磁力攪拌器上，邊照射邊攪拌使細(xì)胞能均勻受到紫外線照射。 6.請設(shè)計實驗來決定在一種特定的細(xì)菌中發(fā)生的遺傳轉(zhuǎn)移過程是轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)還是接合?說明每一種的預(yù)期結(jié)果。設(shè)想有下列條件和材料可以利用：(1)合適的突變株和選擇培養(yǎng)基。(2)dnase(一種降解裸露dna分子的酶)。(3)兩種濾板：一種能夠持留細(xì)菌和細(xì)菌病毒，但不能持留游離的dna分子；另一種濾板只能持留細(xì)菌。(4)一種可以插入濾板使其分隔成兩個空間的玻璃容器(如u型管)。a將兩種不同的二重或三重營養(yǎng)缺陷型菌株混合培養(yǎng)，在基本

24、培養(yǎng)基上長出的菌落為重組菌株(發(fā)生了遺傳交換)。b如果在混合培養(yǎng)期間加入dnase，在基本培養(yǎng)基上無重組菌落出現(xiàn)，這說明上述重組是因細(xì)胞間的接觸轉(zhuǎn)化所致；如果仍有重組落產(chǎn)生，說明可能是由于接合和轉(zhuǎn)導(dǎo)所致。c利用只能持留細(xì)菌的濾板相隔的u型管進(jìn)行試驗，如果在基本培養(yǎng)基上不產(chǎn)生重組菌落，則判斷為接合作用，如果產(chǎn)生重組菌落，則又有兩種可能，即轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)。d利用能持留細(xì)菌和細(xì)菌病毒而不能持留dna的濾板相隔的u型臂試驗，如果不產(chǎn)生重組菌落則為轉(zhuǎn)導(dǎo)，如果仍產(chǎn)生重組菌落則為轉(zhuǎn)化。 7.在第(6)題的實驗中，為什么用雙重或三重營養(yǎng)缺陷型？為了排除在基本培養(yǎng)基上長出的原養(yǎng)型菌落是由于回復(fù)突變這一可能

25、性。因為同時發(fā)生2個基因或3個基因的基因突變是不可能的。在大腸桿菌中，單營養(yǎng)缺陷型的回復(fù)突變率大約是10-8。 8.hfr ?/span> f-和f ?f-雜交得到的接合子都有性菌毛產(chǎn)生嗎?它們是否都能被m13噬菌體感染呢?hfr × f-中，由于hfr菌株的染色體在向f-的轉(zhuǎn)移過程中，整合在染色體上的f因子除先導(dǎo)區(qū)外，絕大部分處于轉(zhuǎn)移染色體的末端，由于轉(zhuǎn)移過程中常被中斷，因此p因子不易轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中，所以hfr × f-得到的接合子仍然是f-，無性菌毛產(chǎn)生；f+ ×

26、 f-得到的接合子有性菌毛產(chǎn)生，能被m13噬菌體感染，因為m13的侵染途徑是性菌毛。 9.為什么導(dǎo)致蛋白質(zhì)表面氨基酸變化的突變一般不會引起表型的變化?而蛋白質(zhì)內(nèi)部氨基酸的替換則會引起表型變化?蛋白質(zhì)表面氨基酸的變化一般不影響蛋白質(zhì)的功能，因此一般不會引起表型的變化，但如果突變引起蛋白質(zhì)內(nèi)部的氨基酸發(fā)生變化(包括酶的活性位點)，就可能劇烈地改變蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，從而改變其功能，破壞酶的活性。 10.dna鏈上發(fā)生的損傷是否一定發(fā)生表型的改變?盡你所能說出理由？不一定，如下列情況：同義突變或沉默突變；發(fā)生了基因內(nèi)另一位點或是另一基因的抑制突變(一般指trna基因的突變

27、)使突變得到校正；即使是錯義突變，但是否改變表型還視置換的氨基酸是否影響蛋白質(zhì)的功能；各種修復(fù)機制可清除dna的各種損傷，使其表型不發(fā)生改變。11.何為sd序列，如何對翻譯進(jìn)行調(diào)控？sd(shine-dalgarno)序列：存在于rbs中，一般為5個核苷酸組成的富含g和a的短小序列。其功能是與核糖體16srrna的3端互補配對，使核糖體結(jié)合到mrna上，以利于翻譯的起始。調(diào)控機制：(1)sd序列與16s rrna序列的互補程度；(2)aug到sd序列的距離，一般為410個核苷酸，9個最好；(3)mrna 5端的空間結(jié)構(gòu)影響30s亞基和mrna的結(jié)合。 12簡述不依賴于因子的終止子的結(jié)構(gòu)及其終止轉(zhuǎn)錄的機制。結(jié)構(gòu)特點：在轉(zhuǎn)錄終止點之前有一段長度為720bp的反向重復(fù)序列，反向重復(fù)序列中g(shù)c含量高，而且反向重復(fù)序列下游常有68個a。轉(zhuǎn)錄終止機制：反向重復(fù)序列轉(zhuǎn)錄后，在轉(zhuǎn)錄泡中，形成的mrna容易形成rna-rna發(fā)夾結(jié)構(gòu)，其穩(wěn)定性比轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mrna和dna的結(jié)合穩(wěn)定性高，導(dǎo)致rna從rna-dna雜合鏈上脫離，結(jié)果rna聚合酶和r