原發(fā)胃癌中p15、p16基因蛋白的表達及臨床意義

1、原發(fā)胃癌中 p15、 p16 基因蛋白的表達及臨 床意義作者：高云升作者單位：蓋州市中心醫(yī)院普通外科 , 遼寧 蓋州115200【摘要】 目的 檢測原發(fā)胃癌原發(fā)灶及癌旁正常組織中 p15、p16 基因蛋白表達情況 ,探討 p15、p16 基因失活與胃癌發(fā)生發(fā)展及臨床病 理特征的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測 32 例進展期胃癌石 蠟標本中 p15、p16 的表達，并探討其表達與臨床病理特征之間的關(guān) 系。結(jié)果 p16 、p15 在原發(fā)灶與癌旁正常組織中陽性表達率差異有統(tǒng) 計學(xué)意義 (P<0.05) ，p15、p16 基因表達在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不同 TNM 分期的病例之間差異均有統(tǒng)計學(xué)

2、意義 (P<0.05) 。結(jié)論 p15 、p16 蛋白 表達可能與胃癌癌變過程相關(guān) , 并可以作為臨床治療提供理論依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】 胃腫瘤 免疫組織化學(xué) p15 p16The Clinical Significance and Expression of p15 asWell as p16 in Primary Gastric CancerGAO Yun-sheng(Department of General Surgery, Gaizhou Central Hospital, Gaizhou 115200 China) 【 Abstract 】 Objective To test th

3、e expression of p15 and p16 in primary gastric cancer and its normal tissue and to discuss the relation between the geneticlosing activity of p15 together with p16 and the development of gastric cancer as well as the features of clinical pathology. Methods 32 cases of the expression of p15 and p16 i

4、n samples of paraffin wax of gastric cancer were tested by immunohistochemistry method and tried to discuss the relationship between the expression of p15 and p16 and the features of clinical pathology. Results It had the significance in terms of statistics in the difference in positive expression r

5、ates of p15 and p16 in primary gastric carcinoma and normal tissue of adjacent to cancer (P<0.05) as well as the difference between the cases with lymphnode metastasis or not and different clinical pathological stages (P<0.05). Conclusions The protein expression of p15 and p16 may be related t

6、o the cancerization of gastric cancer, and it can be used for providing the theoretical evidence as the clinical treatment.【Key words】 gastric carcinoma;immunohistochemistry;p15; p16國內(nèi)外研究提示 , 胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個多基因共同參與的多突 變的過程。但具體的癌變機制目前尚不完全明確 1 。p16、p15 定位 于人第九號染色體 21區(qū)域。其為細胞周期的負性調(diào)節(jié)因子 , 阻止細胞進入 S期, 故可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)

7、展中起重要作用 2 。本研究采用免 疫組織化學(xué)方法 ,檢測 32例原發(fā)胃癌原發(fā)灶與癌旁正常組織中胃癌 p15、p16 基因蛋白表達情況，旨在探討 p15、p16基因失活與胃癌發(fā) 生發(fā)展及與臨床病理特征的關(guān)系，為胃癌的治療提供理論依據(jù)。1 材料與方法1.1 臨床資料收集蓋州市中心醫(yī)院 2005年 8月至 2007年5月收治并行手術(shù)治 療的 32例胃癌患者胃癌組織及癌旁正常組織標本。 其中男 18 例、女 14例，平均年齡 (51±6.32) 歲， (3578歲) 。TNM 分期: 期 6例， 期 12 例，期 10 例，期 4 例。所有入組患者術(shù)前均未進行化 療、放療及生物治療。1.2

8、 方法兔抗人 p15 多克隆抗體購自美國 Santa Cruz 公司、兔抗人 p16 多克隆抗體購自北京萊博生物試驗材料研究所、 SP免疫組化試劑盒 購自上海麥莎生物科技有限公司。采用鏈霉素生物素 - 過氧化物酶， 常規(guī)切片脫水，石蠟包埋。行 4 5m切片后，二甲苯脫蠟、水化， 微波抗原修復(fù) , 山羊血清封閉間質(zhì)反應(yīng)。 加抗、抗后酶標 SP、DAB 顯色，蘇木素復(fù)染后脫水、封固、鏡檢。1.3 結(jié)果判斷p16 表達為細胞質(zhì)棕黃著色， p15 表達為胞核或胞質(zhì)棕黃著色。 結(jié)果判斷中，小于 25%的細胞著色為陰性 , 大于 25%的細胞著色為陽 性。1.4 統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)差異比較用 2 檢驗,P&l

9、t;0.05 認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義2 結(jié)果2.1 p16 、p15 的表達32例胃癌標本 p15 陽性表達的病例 , 原發(fā)灶為 11例(34.38%), 癌旁組織為 25例(78.13%) ，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05) 。 p16 陽性表達的病例，原發(fā)灶為 8例(25.00%), 癌旁組織為 22 例 (68.75%), 兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05) 。2.2 p16 、p15表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系見表 1。表 1 胃癌原發(fā)灶與癌旁正常組織 p15、p16 基因表達水平比較 臨 床病理特征例數(shù) p15例數(shù) 2Pp16例數(shù) 2P年齡 602070.

10、010.9250.001.00>601243 癌灶數(shù)單發(fā) 2883.340.0761.520.22 多發(fā) 432 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有1485.720.0264.230.04 無 1832組織類型分化 1571.890.1777.070.01未分化 1741TNM分期、 期 19106.910.01 73.500.07 、期 13113 討論惡性腫瘤發(fā)生機制為遺傳學(xué)和表遺傳學(xué)共同作用的結(jié)果， p15、 p16 基因的突變或缺失可能在胃癌的發(fā)生及發(fā)展中起一定的作用 1 ， 2110-119,224-228 。目前研究提示， p16 基因在原發(fā)性腫瘤中雖然 檢不出突變，但存在不表達，檢測 p16 有

11、無缺失表達對胃癌早期診 斷具有一定意義 3 ，4560-564,4646-4654 。而 p15基因的缺失機制 在這些惡性瘤中還沒有定論。從表遺傳學(xué)角度， 基因的甲基化導(dǎo)致其相應(yīng)蛋白的表達缺失被認 為是散在發(fā)生的惡性腫瘤出現(xiàn)的主要機制。這些突變可以被藥物逆 轉(zhuǎn)，所以研究 p15、p16 基因表達缺失機制對胃癌治療有一定意義。 p15 基因啟動子區(qū)高甲基化可使 p15 基因失活，原發(fā)胃癌的 p15 基 因及其甲基化的異常集中在低分化胃癌。 p16 基因失活與 5' 端啟動 子區(qū)域 CpG 島異常甲基化密切相關(guān) 5-7 。近年來，國內(nèi)外許多研究 表明，不管是原發(fā)性胃癌組織還是胃癌細胞系，

12、不管采取何種方法均 發(fā)現(xiàn)了較高的 p16 基因異常甲基化率，而非腫瘤組織中則沒有或是 出現(xiàn)極低的甲基化 2 ，3，7224-228,560-564,2033-2040 。本實驗對 32例胃癌原發(fā)灶與癌旁正常組織中 p15、p16 的表達情 況進行了探討。結(jié)果提示，原發(fā)灶 p15、p16 基因表達率明顯低于癌 旁正常組織，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 p15、p16 基因表達在有無淋 巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不同 TNM分期的病例之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 不同組織 學(xué)類型中 p16表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義， 而 p15的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意 義，可能與本揚就讓本量有限有關(guān)。所以本研究結(jié)果提示， p15、p16 的表達缺失

13、在胃癌的發(fā)生發(fā)展中均具有一定的作用， 可以為胃癌的早 期診斷和判斷預(yù)后提供理論依據(jù)。參考文獻】1 Smiraglia DJ ，Plass C.The development of CpG island methylationbiomarkers using restriction landmark genomic scanning J.Ann N Y Sci,2003,983(1):110- 119.2 Sarbia M，Geddert H，Klump B.Hypermethylation of tumor suppressorgenes (p16INK4A， p14ARFa nd APC)

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