腦利鈉肽前體proBNP作業(yè)指導(dǎo)書

1、文件編號：LAB OP- MY020第1頁，共6頁版乙A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導(dǎo)書Elecsys E 170/E 411 腦利鈉肽前體(proBNP)1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個過程 18分鐘完成。第1步：20 口1標本、生物素化的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體和釘（Ru）標記的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體混勻，形成夾心復(fù)合物。第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。第3步：反應(yīng)混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光

2、電倍增管進行測定。Elecsys自動將標本產(chǎn)生的光電信號與從腦利鈉肽前體定標液得出的Cutoff值相比較。2. 標本要求血清：按標準常規(guī)方法采集或用含有分離膠的試管。血漿：含肝素鋰或肝素胺抗凝劑。標本穩(wěn)定性：20 "C 25C穩(wěn)定3天，在2 8度可穩(wěn)定6天，-20oC可穩(wěn)定12個月。含沉淀的標本使用前需離心；不要使用加熱 滅活的標本；標本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標本、定標液和質(zhì)控品在測定前的溫度應(yīng)與室溫平衡；放入儀器后應(yīng)在2小時內(nèi)測定以避免蒸發(fā)的影響。標本、定標液和質(zhì)控品在測定前應(yīng)預(yù)溫到室溫。3. 試劑、校準品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M 鏈霉親和素包被的微粒

3、（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml，含防腐劑。R1：生物素化的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體（灰蓋），1瓶,9ml,濃度1.5ug/l，磷酸緩沖液40mmol/l , pH7.4含防腐劑。R2： Ru（bpy）32+標記的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體（黑蓋），1瓶,9ml。濃度高于1.7ug/ml，磷酸緩沖液40mmol/l ， pH7.4含防腐劑。校準品:Cal 1陰性定標液（白蓋），2*1mlCal 2陽性定標液（黑蓋），2*1ml質(zhì)控品:Elecsys腦利鈉肽前體質(zhì)控品1 和 2(PreciCo ntrol Cardiac)貨號 03530477其他所需材料:Elecsys

4、2010/cobas e 411 分析儀需要:貨號 11662988,Elecsys系統(tǒng)緩沖液（ProCell ） 6X380毫升貨號 11662970,Elecsys測量池清洗液（CleanCell ） 6X380毫升貨號 11930346,Elecsys添加劑液（SysWash 1X500毫升貨號 11933159,Elecsys系統(tǒng)清洗液支架（Adapter for SysClean ）貨號 11706802,Elecsys 2010 反應(yīng)杯(Assay Cup)貨號 11706799,Elecsys 2010 吸樣頭(Assay Tip )E170/cobas e 601分析儀需要:貨

5、號 12135019,Elecsys系統(tǒng)緩沖液（ProCell M ）貨號 12135027,Elecsys測量池清洗液（CleanCell M ）貨號 03023141,Elecsys系統(tǒng)緩沖液/測量池清洗液預(yù)熱杯（PC/CC-Cup貨號 12102137, Elecsys反應(yīng)杯 / 吸樣頭盒(AssayCups/AssayTips CombimagazineM)貨號 03023150, Elecsys廢物盒(wasteliner)文件編號：LAB OP- MY020第5頁，共6頁版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導(dǎo)書Elecsys E 1

6、70/E 411貨號 03027651, Elecsys 系統(tǒng)清洗液支架（SysClean Adapter M）各種分析儀均適用的材料貨號 11298500, Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean） , 5X 100ml系統(tǒng)洗液4. 儀器和校準使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn) Elecsys 2010/E 170/E 411/e 601全自動電化學(xué)發(fā)光免疫自動分析儀儀器校準：每批腦利鈉肽前體試劑盒必須用新鮮試劑和腦利鈉肽前體Cal 1,Cal 2 定標一次。另外，以下情況需要再次定標：Elecsys2010 : 一個月（同一批號試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒）各種分析儀均適用的情況

7、：根據(jù)要求進行標定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時；根據(jù)規(guī)定進行多次標定。5. 操作步驟（以E 170為例）5.1校準操作步驟：在編緝各項目的參數(shù)時，已經(jīng)在 Application Calib菜單中定義好了定標類型和幾點定標。因此在對各項目進行定標時， 只需在定標菜單Calibration 中進行即可。3.2進入Calibration Status菜單，用鼠標選擇需定標的項目，再根據(jù)需要點單點 定標（BLANK建）或兩點定標（TWGPOINT鍵）、跨距定標（SPAN建）、多點定標（FULL鍵），再選擇其它項目進行相應(yīng)選擇，最 后點SAVE將定標物放入在 Calibration Calibrator中定義

8、好的位置，點 Start，再點Start，儀器開始定標。在Calibration Status菜單中看定標結(jié)果，點 Calibration Result 鍵看定標結(jié)果，點 Reaction Monitor 鍵看每個定標 物的反應(yīng)曲線。5.2樣本檢測程序：單個樣本輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection ，在Sequenee No欄輸入標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目點 SAVE建，樣本號自動累加。批量常規(guī)標本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection ，在Sequenee No欄輸入起始標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或

9、組合項目點REPEAT輸入該批標本的最后一個標本號，點0K即可。進樣分析，將標本按在Workplace菜單中輸入的標本號順序在樣本架上排好，放入進樣盤內(nèi)，按START鍵，輸入該批上機標本的起始標本號，再點 START鍵，儀器自動開始推架檢測標本。6. 質(zhì)量控制用Elecsys腦利鈉肽前體質(zhì)控品1和2 （ PreciControl ）。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控 間隔期應(yīng)適用于各實驗室的具體要求。檢測值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計算方法儀器會自動根據(jù)Cal 1和Cal 2的測定值計算Cut-off值。每一個標本的結(jié)果以有

10、反應(yīng)性或無反應(yīng)性以及 Cutoff指數(shù)形式（標 本信號/ Cutoff ）報告。8. 參考范圍從參考組的信息中得出最合適的域值125pg/ml。9. 分析性能精密度嚴格按照修訂方案的NCCLSEP-5A文件規(guī)則：每天6次，10天; E170上批內(nèi)精確性，n= 21。使用試劑，人血清和質(zhì)控測定得 到重復(fù)性。SD及 CV直如下表所示：Elecsys2010/e411批內(nèi)精密度總精密度Elecsys E 170/E 411均值標準差CV%標準差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol/l人血清117520.74.670.563.2人血清235541.9

11、8.6812.4人血清31068126人血清4496258686.910.31.811413.52.3proBNP質(zhì)控 143451.27.690.911.8proBNP質(zhì)控 2678180011813.91.814617.22.2E170批內(nèi)精密度總精密度均值標準差CV%標準差標準差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol/l人血清147455.94.330.510.949458.328.73.395.8人血清2800594585101.1782792432137

12、.884.1人血清3136821614118.513.980.913143155149057.83.7proBNP質(zhì)控 120825.51.740.210.820023.68.951.064.5proBNP質(zhì)控 23786447114.513.534002472144173.6分析靈敏度5pg/ml(0.6pmol/L)分析靈敏度只能區(qū)分空白與最低限。功能靈敏度<50pg/ml (<5.9pmol/L)功能靈敏度指NT-proBNF檢測在CV為20%寸的最低限。分析特異性Elecsys proBNP檢測時，對于下列物質(zhì)無交叉反應(yīng)10.干擾因素該方法不受黃疸（膽紅素35mg/dl）、

13、溶血（血紅蛋白1.4g/dl ）、脂血（脂質(zhì)4000mg/dl ）和生物素30ng/ml干擾；接受高劑量生物素（5mg慶）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時后才能采血；不受類風濕因子干擾（1500U/ml）;proBNP濃度在300,000ng/ml以內(nèi)無鉤狀效應(yīng);在51種常用藥上進行體外測試，未發(fā)現(xiàn)干擾。測試品和少數(shù)血清間潛在免疫相互作用引起的干擾風險已通過合適的添加劑降到最小。極少情況下，由極高濃度Streptavidin和ruthenium引起的干擾可發(fā)生。ProBNP含添加劑減小這些影響。11.臨床意義左心室功能不全發(fā)生在冠心病，動脈高血壓，瓣膜疾病，原發(fā)性心臟病等疾病之后。

14、如果左心室功能不全得不到治療或進 展，由于心臟猝死的原因，其潛在的死亡率較高。慢性心功能不全是由心臟泵功能受損引起的臨床綜合征。可以根據(jù)臨床癥狀 進行分級。如：紐約心臟協(xié)會（NYHA分級為I , II , III , IV。臨床檢測及影像檢測用于診斷左心室功能不全。利鈉肽類物質(zhì) 在心血管系統(tǒng)功能的控制中的意義已經(jīng)得到證實。早期的研究顯示利鈉肽類物質(zhì)可用于診斷與左心室功能不全相關(guān)的疾病。該 類物質(zhì)如下列：心鈉肽（ANR，腦鈉肽（BNP，C-型利鈉肽（CNP。AN與BNP通過其促尿鈉排泄、利尿的作用，以及作為腎素-血管緊張素-醛固酮的拮抗物質(zhì)，從而影響人體的電解質(zhì)-體液平衡。ProBNF由 108

15、個氨基酸構(gòu)成，主要由心室分泌。然后Elecsys E 170/E 411被裂解為具有生物活性的BNP （77-108氨基酸）和N-端proBNP （1-76氨基酸）。Elecsys proBNP試劑含有多克隆抗體，可以識別 N-端proBNP （1-76氨基酸）上的抗原決定簇。左心室功能不全的患者血清/血漿中的BN濃度增高，作為BN降解產(chǎn)物，無生物活性的NT-proBNP濃度也同樣增高。研究表明，NT-proBNF可以用于以下的診斷目的：提示左心室功能不全的預(yù)后；心源/非心源性疾病的鑒別診斷；血清/血漿NT-proBNP水平的變化，還可用于評價左心室功能不全的療效；以及心肌重塑的評估。13.參

16、考文獻i. 忖上1曰丁 白丄Lflih yeNP 3PCr黠:j 第ymctcir電飛時：幾爭RXXE Clh Dl 門 5半.Pnmtn 匚蘭i.占叮峽c±i &屮dacfeus soracy ma *uiy-aj3i5d 審 cttocivi：ifn 常 aoer” 時場 0 屮冬 N-ierr-jraJTgirer- or :常 p-peprce cf 刊 r乍漳黑怖 fGrerttwt i3re cryuarry.忒tr 廣 mr施囂割眄OJS fcr Drar natrurc ssTKH ard sirs njtiurec 馬b比Cin cren a 悄工 XC4

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23、 1933；2C '3I-1G?S17. MjTPJ FIdisx: AM. Nncs VG,D：l7 Fh 氐廠gE?_iijn：ne j：*t irrnrltnri ?。?yal-GFjrg-齊環(huán):r-PROBN-i、z mr*j£憎“dw: mparteiLc n Ercccfln；!庁汀*3-:匪XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導(dǎo)書Elecsys E 170/E 411文件編號：LAB OP- MY020 第5頁，共6頁版本：A/0生效日期：2008-02-0118. Talwai Sr Squire IB. Davies JE. Barnett OB,

24、Mg LL Plasma N-terminjkl proirain nnbiuiecic pfptidt and the ECG n the assessnient “ left-TeTtikblar stu ic d/Stunct»n n a high ri曲 populaLon. Eur Heart J 1999:20 17961744.t9. Fi5"ier C et n. hTT pro&NP Predicts Prognosis n Patients wth Chloric Hear: Failbre. Hear: 2003.B9.B79-312Q Jan

25、es SK el a . NT proBP and cttier Risk 倫您氐 forlhe Sspaate 円眈 ideri r Mcrhlil' srrd Subi&querl Myccaid a Hiiicticn n Pnti鬥性 with linkable Coronary Arten,' Disease GUSTO Iv Substud?. Circula：iai 2003.108:275-281.2 Daibar D Davidson MCh Gilles N. Choy A4U, Lang CC. SrYhe*al. Diagnostic value

26、 出 B-7yp& Nafiurdic Pepliae Concerrtraliorts in Pamirs With Acute Myocardal Infarcban. A J Cardial l996;7B&4-2fl7.22. McDonagh TA. Robb SD. Murdoch DR, Morton JJP Fa用 I. Mom son CEt ft a. Biccnem cal detector of i百twentriuulmr systolic dydtjnc：iari Lancet 1990.35113.23 Yeo KT et jl. Mutioenfer 別aluazion or te Roche NTp(oBNF assay and coinpiiiMn Io the B osi:e Triagfi B：MP siy. Clin Chim Ada 20臨3茨:佃巾宜24. Cowie KIR et al Cl iica applic