葉綠素含量的測定3頁

1、植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)題目：葉綠素含量的測定姓名 班級(jí) 學(xué)號(hào) 一、 實(shí)驗(yàn)原理和目的 根據(jù)朗伯比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比 。葉綠素(丙酮)在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。葉綠素(95%乙醇)在665nm、649nm，類胡蘿卜素在470nm有最大吸收峰，根據(jù)在分光光度計(jì)下測定的吸光度，求得葉綠素的含量二、 實(shí)驗(yàn)器具和步驟 植物材料： 女貞實(shí)驗(yàn)器具： 分光光度計(jì)；電子天平； 研缽； 試管； 小漏斗；濾紙； 吸水紙； 移液管 ；量筒； 剪刀試劑： 95乙醇（或80丙酮）；石英砂；碳酸鈣粉步驟：1.稱取剪碎的新鮮樣品0.1g 左右，放入研

2、缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及35ml 95乙醇，研成均漿，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置35min2. 取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到10ml試管中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，最后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?3.用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入漏斗中。直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止。最后用乙醇定容至10 ml ，搖勻4. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95乙醇為空白，在波長665nm、649nm、470nm下測定吸光度5. 計(jì)算公式： 葉綠素的含量（mg/g）= (濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)）/樣品鮮重。 Ca

3、=13.95A6656.88A649；Cb=24.96A6497.32A665 C類=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 單位：mg/L 三、 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和作業(yè)2、計(jì)算葉綠素含量 計(jì)算公式： 葉綠素的含量（mg/g）= (濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)）/樣品鮮重。Ca=13.95A6656.88A649；Cb=24.96A6497.32A665 C類=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 單位：mg/L由上面的公式進(jìn)行代入計(jì)算，有： Ca=13.95*1.820-6.88*0.953=18.83236 Cb=24.96*0.953-7.32*1.820=10.46448 C類=（1000*1.948-2.05*18.83236-114.8*10.46448）/245=2.8901則：葉綠素含量=（29.29684*10*0.001*1）/0.1=2.9297四、 數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)中可能清洗研缽和濾紙不是特別干凈可能造成誤差五、 思考題 為什么提取葉綠素時(shí)干材料一定要用 80的丙酮，而新鮮的材料可以用無水丙酮提??？ 答：因?yàn)槿~綠素