實驗八絨毛細胞染色體標本的制備與觀察

1、實驗八 絨毛細胞染色體標本的制備與觀察 實驗?zāi)康?1. 初步掌握絨毛細胞染色體標本的制備與觀察。2. 了解人類染色體的形態(tài)和計數(shù)分析方法。 實驗原理 人類細胞染色體標本制備常用的材料為外周血淋巴細胞、培養(yǎng)的體細胞和骨髓細胞等。而 絨毛組織細胞具有活躍的增殖力， 取材后不需經(jīng)過體外培養(yǎng)的無菌處理， 此時用有絲分裂阻斷劑 秋水仙素處理細胞，可使正在分裂的細胞停止在中期，再經(jīng)低滲、 固定等處理， 便可得到較多可 供分析的中期染色體。絨毛細胞是在受精卵分裂胚胎發(fā)育過程中形成的，其遺傳物質(zhì)與胎兒相同。在孕4555天絨毛細胞具有較高的分裂活性，可用其自然分裂細胞制備染色體標本，具有早期、快速、簡便和準確的

2、優(yōu)點。適用于臨床的細胞遺傳學的產(chǎn)前診斷研究等。 實驗用品 1. 材料：絨毛組織。5ml 離心管、吸管、試管0.075mol/l kcl 溶液、無2. 器材：顯微鏡、離心機、恒溫水浴箱、眼科鑷子、眼科剪子、 架、玻璃筆、載玻片、吸水紙。3. 試劑：培養(yǎng)皿、rpmi-1640 培養(yǎng)液、秋水仙素（2卩g /ml ）、菌生理鹽水、檸檬酸鈉、60%冰乙酸、甲醇：冰乙酸（3 : 1）固定液、giemsa染液、磷酸緩沖液ph6.8 ) 實驗內(nèi)容與方法 1. 秋水仙素處理：選取分芽多、末端粗鈍的絨毛枝 23枝剪下、用生理鹽水漂洗、再將絨毛枝放入含有終濃度2卩g/ml秋水仙素的5ml rpmi-1640培養(yǎng)液或

3、hanks液的離心管中、37 C溫育處理約 30 分鐘。2. 吸去培養(yǎng)液，加入 37C預(yù)熱的1%檸檬酸鈉和0.075mol/l kcl （1 : 1）低滲液4ml 37 C 下處理 1015分鐘。3. 加入 1ml 固定液混勻后吸去上清液。4. 加入 3ml 固定液固定 30 分鐘，（甲醇:冰乙酸 3: 1）。5. 吸去上清液，加 60%冰乙酸 1ml 解離 1.52分鐘再加入 3ml 甲醇，處理 2分鐘，吸出 絨毛枝。6. 以 800r/min 離心 5 分鐘，棄上清液。7. 加 5 滴固定液，混勻制成細胞懸液，冰濕片滴片、干燥。8. giemsa 染色68分鐘。9. 鏡下觀察25個分裂相并進行染色體計數(shù)及性別鑒定。 注意事項 1. 絨毛組織取出后應(yīng)立即放入固定液中。1）2. 觀察標本時，應(yīng)選擇成株的絨毛絲或分散的合體細胞進行檢查。3. 可記數(shù)細胞應(yīng)是胞漿、 胞核著色清晰， 如標本胞漿不透明或胞核腫脹， 可能是由于：酒精濃度不夠，脫水不徹底；（2）酸化、堿化不當；（ 3）細胞本身已退變。4. 胞核染色不正常，而呈藍色或黑色，則是染色時間過長。5. 如果胞漿著色不鮮艷，可能是染液配制不合適。 實驗報告與思考題 繪圖繪制染色體