FQ-PCR檢測HBVDNA效果分析

1、fq-pcr檢測hbv dna效果分析馮國鋼(百色市人民醫(yī)院檢驗科廣西百色533000)【中圖分類號1r512.6+2【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】a【文章編號11672-5085(2013)25-0257-02【摘要】目的 檢測血清中乙型肝炎病毒(hbv)dna拷貝數(shù)，分析乙型肝炎病毒 dna(hbv-dna)與血清免疫標(biāo)志物的關(guān)系。方法 采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng) (fq-pcr)檢測血清樣木中hbv-dna含量；同時酶聯(lián)免疫吸附法(elisa)檢測hbv血 清標(biāo)志物(hbvm),并對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 在hbsag(+)hbeag(+)hbcab(+) 組(大三陽組)和hbsag(+) hbeag(+

2、)組hbv-dna陽性率分別為96.1% (298/310) 和 96.6% (28/29),病毒含量為：1.85×108copies/ml； hbsag(+)hbeab(+)hbcab(+)組(小三陽組)和 hbsag(+)hbcab(+)組患者血清 hbv-dna陽性率分別為44.2%(80/181)和82.9% (31/41),病毒含量為： 4.8×106copies/ml血清中hbeag與hbvdna含量密切相關(guān)。結(jié)論熒光定 量pcr在乙肝的診斷、判斷傳染性強(qiáng)弱及評價抗病毒治療效果方面具有較大的臨 床應(yīng)用價值。【關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒 熒光聚合酶鏈

3、反應(yīng)hbv-dnahbv血清標(biāo)記物檢測是乙型肝炎病原學(xué)診斷的指標(biāo)，包括hbsag、hbsab、 hbeag、hbeab和hbcab五項指標(biāo)，是目前診斷乙型肝炎最常用的指標(biāo)，臨床上 常用酶聯(lián)免疫吸附法(elisa)檢測，能反映人體對乙肝病毒的免疫狀態(tài)，但不能直 接反映hbv在患者體內(nèi)的復(fù)制與傳染情況。夕碉血中hbv-dna是診斷乙型肝炎、 判斷病毒復(fù)制、傳染性大小和評價藥物療效及預(yù)后的重要指標(biāo)。熒光定量pcr 技術(shù)以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu) 點，近年來在臨床檢測hbvdna中應(yīng)用廣泛j4可區(qū)分不同的hbv感染狀態(tài)及評 估抗病毒治療效果。本文采用fq-per

4、定量檢測561例elisa法陽性的乙肝患 者，旨在提高乙肝患者的診治水平。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。1資料和方法1.1標(biāo)本來源：1811例均來自2009年6月至2011年12月我院住院和 門診病人，用酶聯(lián)免疫吸附法(elisa)法檢測有561例表面抗原(hbsag)陽性， 其中男性3h例，女性250例，年齡1670歲，平均年齡38歲。診斷符合2000 年9月中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)會分會、肝病學(xué)會聯(lián)合修訂的“病毒性肝 炎防治方案”修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)2?？崭钩檠?，及時分離血清，一20°c保存，不 超過7d進(jìn)行fq-pcro1.2儀器與試劑：儀器是澳大利亞生產(chǎn)的，型號為rotor-gene-30

5、00的擴(kuò) 增儀；fq-pcr試劑均為上?？迫A生物公司生產(chǎn)的商品化試劑盒，嚴(yán)格按照說明 書進(jìn)行操作。1.3方法：用酶聯(lián)免疫吸附試驗(elisa)檢測hbv血清學(xué)標(biāo)志，用熒光 定量聚合酶鏈反應(yīng)(fq-pcr)檢測hbvdnao1.4熒光定量結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：hbvdna定量以l×103copies/ ml為 判斷陽性標(biāo)準(zhǔn)，l×103copies/ml 陰性，l×103copies/ml 為陽性。2結(jié)果310 例 hbsag(+)hbeag(+)hbcab(+)組(大三陽組)中，hbv-dna 陽性 298 例，陽性率為 96.1% (298/

6、310), 29 例 hbsag(+) hbeag(+)組中，hbv-dna 陽性 28例，陽性率為96.6%,平均病毒含量為：1.85×108copies/ml；181 例 hbsag(+)hbeab(+)hbcab(+)組(小三陽組)中，hbv-dna 陽性 80 例，陽性率 為 44.2%(80/181), 41 例 hbsag(+)hbcab(+)組中 hbv-dna 陽性 31 例，陽性率為 82.9% (31/41),平均病毒含量為:4.8×106copies/mlo 血清中 hbeag 與 hbvdna含量密切相關(guān)。3討論全世界約有3.5億

7、人感染慢性乙肝病毒，其中三分之一在中國，其hbv 感染量居世界首位。定量檢測患者血清或血漿hbv dna病毒已成為監(jiān)測抗病毒 治療的有效性及預(yù)測治療成功與否的重要手段。熒光實吋定量pcr技術(shù)在常規(guī)的 pcr基礎(chǔ)上加入熒光素標(biāo)記的探針，在5′端上標(biāo)上6竣基熒光素(fam), 3′端標(biāo)上6竣基四甲基堿性蕊香紅(tamre),利用taqdna聚合酶5′ 端水解酶活性，使在延伸是切斷5′_h fam,阻斷了 5′3′ 熒光素的能量轉(zhuǎn)移過程，能夠檢測到fam所發(fā)出的熒光，其熒光強(qiáng)度與其

8、吋的 產(chǎn)物成正比3。許多研究已證明實時定量pcr是一種準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好、靈 敏度高而且快速的臨床標(biāo)本hbv水平檢測方法，在所有商業(yè)化檢測方法中檢測范 圍最寬。本資料結(jié)果表明：hbv-dna在hbv血清學(xué)標(biāo)記物陽性的各種模式中陽 性率不一樣，hbv-dna拷貝值也不同。在hbsag(+)hbeag(+)hbcab(+)組(大三陽組) 和hbsag(+) hbeag(+)組hbvdna陽性率分別為96.1%和96.6%,平均病毒含量為： 1.85×108copies/ml,表明體內(nèi)hbv病毒復(fù)制活躍，傳染性極強(qiáng)。 hbsag(+)hbeab(+)hbcab(+)組(小三陽組)

9、和 hbsag(+)hbcab(+)組患者血清 hbv-dna陽性率分別為44.2%和82.9%,平均病毒含量為：4.8×106copies/mlo 說明很多乙肝患者具有強(qiáng)烈的傳染性、應(yīng)阻斷傳播途徑。elisa測定的是乙肝病 毒表達(dá)的蛋白質(zhì)(多肽)抗原或相應(yīng)的抗體。fqpcr測定乙肝病毒dna。檢測 hbv-dna是判斷乙肝病毒有無復(fù)制的“金指標(biāo)”。elisa方法測定乙肝五項指標(biāo)依 然是輔助診斷乙肝的常規(guī)方法，特別對急性乙肝的發(fā)現(xiàn)有重要作用。綜上所述,fq-pcr檢測定量hbvdna客觀地反映了 hbv感染、復(fù)制及病程變化， 特別是在病毒感染早期，elisa不能檢測到低滴度

10、的病毒抗原時，fqpcr即可檢 測到hbv-dna的復(fù)制，有利于乙肝的早期診斷。是病毒復(fù)制最直接和可信的指 標(biāo)，特別是定量檢測hbv-dna含量對乙型肝炎的診斷、病情監(jiān)測、評價抗病毒 療效以及指導(dǎo)用藥方面具有重要意義。參考文獻(xiàn)1隋愛華，楊壁,劉相萍熒光定量pcr檢測hbv-dna的臨床價值j醫(yī)學(xué)理論 與實踐，2009, 22 (2)： 206-207.中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲分會、肝病學(xué)會病毒性肝炎防治方案卩中華傳染 病雜志，2001, 19： 56-62.3 陶志華，陳曉東，王忠永，等乙型肝炎病毒dna熒光定量pcr的建立與應(yīng) 用j臨床檢驗雜志，2002, 20 (5)： 282-283.4 lindh m, hannoun c. dynamic ran ge a nd repr