果蠅的三點(diǎn)測(cè)交

1、遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程實(shí)驗(yàn)六實(shí)驗(yàn)六 果蠅的三點(diǎn)測(cè)交果蠅的三點(diǎn)測(cè)交湖州師范學(xué)院湖州師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院生物系生命科學(xué)學(xué)院生物系雌雌雄雄遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程1 1、掌握三點(diǎn)測(cè)交的原理及方法；、掌握三點(diǎn)測(cè)交的原理及方法；2 2、學(xué)習(xí)三點(diǎn)測(cè)交的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理及分析方法；、學(xué)習(xí)三點(diǎn)測(cè)交的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理及分析方法；3 3、了解繪制遺傳學(xué)圖的原理和方法、了解繪制遺傳學(xué)圖的原理和方法 遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程黑腹果蠅黑腹果蠅( (DrosophilaDrosophila melanogaster melanogaster) )品系：品系：野生野生型果蠅（型果蠅（+）：）： 紅眼、長(zhǎng)

2、翅、直剛毛紅眼、長(zhǎng)翅、直剛毛三隱性三隱性果蠅（果蠅（wmsnwmsn3 3）：白眼、小翅、焦剛毛）：白眼、小翅、焦剛毛 三隱性個(gè)體三隱性個(gè)體：白眼（白眼（w w）、小翅（）、小翅（m m）、焦剛毛（）、焦剛毛（snsn3 3），），這三個(gè)基因都位于這三個(gè)基因都位于X X染色體染色體上。上。遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程 體視顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、體視顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、麻醉瓶、毛筆、濾紙、培養(yǎng)皿等。麻醉瓶、毛筆、濾紙、培養(yǎng)皿等。 乙醚、玉米粉、瓊脂、紅塘、酵母粉、乙醚、玉米粉、瓊脂、紅塘、酵母粉、丙酸等。丙酸等。遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程n 位于同一條染色體上的基因是連鎖

3、的，而同源染色體上位于同一條染色體上的基因是連鎖的，而同源染色體上的基因之間會(huì)發(fā)生一定頻率的交換，使子代中出現(xiàn)一定數(shù)的基因之間會(huì)發(fā)生一定頻率的交換，使子代中出現(xiàn)一定數(shù)量的重組型。量的重組型。n重組型出現(xiàn)的多少反映出基因間發(fā)生交換的頻率的高低。重組型出現(xiàn)的多少反映出基因間發(fā)生交換的頻率的高低。n而根據(jù)基因在染色體上直線排列的原理，基因交換頻率的而根據(jù)基因在染色體上直線排列的原理，基因交換頻率的高低與基因間的距離有一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。高低與基因間的距離有一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。n基因圖距就是通過(guò)基因間重組值的測(cè)定而得到的。基因圖距就是通過(guò)基因間重組值的測(cè)定而得到的。n如果基因座位相距很近，重組率與交換率的值相

4、等，直接如果基因座位相距很近，重組率與交換率的值相等，直接將重組值作為基因圖距；如果基因間相距較遠(yuǎn)，兩個(gè)基因?qū)⒅亟M值作為基因圖距；如果基因間相距較遠(yuǎn)，兩個(gè)基因間往往發(fā)生兩次以上的交換，必須進(jìn)行校正，來(lái)求出基因間往往發(fā)生兩次以上的交換，必須進(jìn)行校正，來(lái)求出基因圖距。圖距。四、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)原理遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程三點(diǎn)測(cè)交：三點(diǎn)測(cè)交：用野生型純合體與三隱性個(gè)體雜交，用野生型純合體與三隱性個(gè)體雜交，獲得三因子雜種（獲得三因子雜種（F1F1），再使），再使F1F1與三隱性基因與三隱性基因純合體測(cè)交，通過(guò)對(duì)測(cè)交后（純合體測(cè)交，通過(guò)對(duì)測(cè)交后（FtFt）代表現(xiàn)型及）代表現(xiàn)型及其數(shù)目的分析，分別

5、計(jì)算三個(gè)連鎖基因之間的其數(shù)目的分析，分別計(jì)算三個(gè)連鎖基因之間的交換值，從而確定這三個(gè)基因在同一染色體上交換值，從而確定這三個(gè)基因在同一染色體上的的順序和距離順序和距離。 通過(guò)一次三點(diǎn)測(cè)驗(yàn)可以同時(shí)確定三個(gè)連鎖通過(guò)一次三點(diǎn)測(cè)驗(yàn)可以同時(shí)確定三個(gè)連鎖基因的位置，即相當(dāng)于進(jìn)行三次兩點(diǎn)測(cè)驗(yàn)，而基因的位置，即相當(dāng)于進(jìn)行三次兩點(diǎn)測(cè)驗(yàn)，而且能在試驗(yàn)中檢測(cè)到所發(fā)生的雙交換。且能在試驗(yàn)中檢測(cè)到所發(fā)生的雙交換。四、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)原理遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程四、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)原理 如果兩個(gè)基因間的單交換并不影響鄰近兩如果兩個(gè)基因間的單交換并不影響鄰近兩個(gè)基因的單交換，那么預(yù)期的雙交換頻率應(yīng)個(gè)基因的單交換，那

6、么預(yù)期的雙交換頻率應(yīng)當(dāng)?shù)扔趦蓚€(gè)單交換頻率的乘積，但當(dāng)?shù)扔趦蓚€(gè)單交換頻率的乘積，但實(shí)際實(shí)際上觀上觀察到的雙交換值往往察到的雙交換值往往低于預(yù)期低于預(yù)期值，因?yàn)槊恳恢?，因?yàn)槊恳淮伟l(fā)生單交換，它鄰近也發(fā)生一次交換的機(jī)次發(fā)生單交換，它鄰近也發(fā)生一次交換的機(jī)會(huì)就減少，這叫會(huì)就減少，這叫干涉干涉。一般用。一般用并發(fā)率并發(fā)率表示干表示干涉的大小。涉的大小。 并發(fā)率并發(fā)率 觀察到的觀察到的雙交換頻率雙交換頻率 兩個(gè)單交換兩個(gè)單交換頻率的頻率的乘積乘積遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程+ + + + +m snm sn3 3 w w m sn m sn3 3 w w m snm sn3 3 w wm snm sn

7、3 3 w wm snm sn3 3 w w + + + + +（）（）m snm sn3 3 w w+ + + + + m sn m sn3 3 w w+ + + + + m sn m sn3 3 w w+ + + + + m sn m sn3 3 w w m m + + + + sn sn3 3 w w+ + + + + m sn m sn3 3 w w m sn m sn3 3 + + + + w w+ + + + + + sn sn3 3 + + m sn m sn3 3 w w m m + + w w+ + + + +P P：F1F1：（測(cè)交）（測(cè)交）四、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)原理雄蠅產(chǎn)生

8、兩種配子雄蠅產(chǎn)生兩種配子 雌蠅雌蠅X X染色體上三對(duì)基因之間染色體上三對(duì)基因之間發(fā)生交換重組，產(chǎn)生發(fā)生交換重組，產(chǎn)生8 8種雌配子種雌配子遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程 因?yàn)橐驗(yàn)镕1F1代雄蠅為三隱性個(gè)體，所以代雄蠅為三隱性個(gè)體，所以F1F1代雌代雌雄蠅自交時(shí)，即測(cè)交，雄蠅自交時(shí)，即測(cè)交，F(xiàn)2F2（FtFt）代可以得到）代可以得到8 8種表型。種表型。 F2 F2 （FtFt）中親組合最多，而發(fā)生雙交換）中親組合最多，而發(fā)生雙交換的表現(xiàn)型個(gè)體數(shù)應(yīng)最少。的表現(xiàn)型個(gè)體數(shù)應(yīng)最少。四、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)原理遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程五、實(shí)驗(yàn)步驟五、實(shí)驗(yàn)步驟 1 1、選處女蠅、選處女蠅：每組正、反

9、交各：每組正、反交各1 1瓶，在瓶，在8-12h8-12h內(nèi)收集內(nèi)收集處女蠅處女蠅5-65-6只，可提前只，可提前2-32-3天收集。天收集。2 2、雜交、雜交：將處女蠅、雄蠅各：將處女蠅、雄蠅各5-65-6只，麻醉、轉(zhuǎn)移到新只，麻醉、轉(zhuǎn)移到新的雜交瓶中，確保雜交瓶中各只果蠅完全蘇醒，的雜交瓶中，確保雜交瓶中各只果蠅完全蘇醒，沒(méi)有死蠅。貼好標(biāo)簽，注明雜交組合、日期、姓沒(méi)有死蠅。貼好標(biāo)簽，注明雜交組合、日期、姓名，于名，于2525培養(yǎng)；培養(yǎng)；3 3、釋放親本、釋放親本：7d7d后，處死雜交親本（一定要干凈）后，處死雜交親本（一定要干凈） 。4 4、觀察、觀察F1F1：再過(guò)再過(guò)4-54-5天，天，

10、F1F1成蠅出現(xiàn)，連續(xù)觀察成蠅出現(xiàn)，連續(xù)觀察2 23 3天，或在處死親本天，或在處死親本7 7天后，集中觀察記錄天后，集中觀察記錄F1F1表型。表型。 要求每組至少統(tǒng)計(jì)要求每組至少統(tǒng)計(jì)250250只果蠅。只果蠅。遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程4 4、 F1F1互交互交：選取：選取5-105-10對(duì)對(duì)F1F1果蠅，轉(zhuǎn)入一新培養(yǎng)瓶果蠅，轉(zhuǎn)入一新培養(yǎng)瓶（不需處女蠅，正交和反交（不需處女蠅，正交和反交F1F1不能混），貼好標(biāo)簽，不能混），貼好標(biāo)簽，于于2525培養(yǎng)。培養(yǎng)。5 5、釋放親本：、釋放親本： 7d7d后，殺死后，殺死F1F1代親本果蠅。代親本果蠅。6 6、觀察、觀察F2F2： 再過(guò)再過(guò)4-

11、5d4-5d，F(xiàn)2F2成蠅出現(xiàn)，開(kāi)始觀察眼成蠅出現(xiàn)，開(kāi)始觀察眼色，翅形及剛毛形態(tài)，同時(shí)記錄色，翅形及剛毛形態(tài)，同時(shí)記錄F2F2各種性狀果蠅的各種性狀果蠅的數(shù)目數(shù)目 ，連續(xù)統(tǒng)計(jì)，連續(xù)統(tǒng)計(jì)7-8d7-8d。 注意：注意：（1 1）要求每組至少統(tǒng)計(jì)要求每組至少統(tǒng)計(jì)250250只果蠅。只果蠅。 （2 2）如果做正交只需統(tǒng)計(jì)雄性個(gè)體。）如果做正交只需統(tǒng)計(jì)雄性個(gè)體。 （3 3）統(tǒng)計(jì)過(guò)的果蠅放入酒精瓶中，殺死）統(tǒng)計(jì)過(guò)的果蠅放入酒精瓶中，殺死 。 五、實(shí)驗(yàn)步驟五、實(shí)驗(yàn)步驟 遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告 n1 1、將觀察到的、將觀察到的F2F2代（包括正交和反交）各表代（包括正交和反

12、交）各表型個(gè)體數(shù)填入書(shū)本型個(gè)體數(shù)填入書(shū)本P17P17表表5-15-1中，確定基因間中，確定基因間重組發(fā)生的情況；重組發(fā)生的情況；n2 2、計(jì)算基因間的重組值及雙交換值；、計(jì)算基因間的重組值及雙交換值；n3 3、根據(jù)計(jì)算結(jié)果畫(huà)出遺傳學(xué)圖。注意用雙交、根據(jù)計(jì)算結(jié)果畫(huà)出遺傳學(xué)圖。注意用雙交換值對(duì)位于兩端的基因間距離進(jìn)行校正；換值對(duì)位于兩端的基因間距離進(jìn)行校正；n4 4、計(jì)算并發(fā)系數(shù)和干涉值。、計(jì)算并發(fā)系數(shù)和干涉值。 七、思考題七、思考題n正交組合正交組合F2F2統(tǒng)計(jì)為什么只需統(tǒng)計(jì)雄性個(gè)體？其統(tǒng)計(jì)為什么只需統(tǒng)計(jì)雄性個(gè)體？其雌性個(gè)體雌性個(gè)體F2F2代個(gè)體的表型如何？代個(gè)體的表型如何？遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精

13、 品 課 程內(nèi)容內(nèi)容單因子單因子雜交雜交雙因子雙因子雜交雜交伴性伴性遺傳遺傳三點(diǎn)三點(diǎn)測(cè)交測(cè)交雜交蠅雜交蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅正交（正交（2人）人）野生型（長(zhǎng)翅）突變型（殘翅）灰體殘翅黑檀體長(zhǎng)翅野生型(紅眼)突變型(白小焦白小焦)突變型白小焦野生型反交（反交（2人）人）突變型（殘翅）野生型（長(zhǎng)翅）黑檀體長(zhǎng)翅灰體殘翅突變型(白小焦白小焦)野生型（紅眼）野生型白小焦4個(gè)果蠅雜交實(shí)驗(yàn)選擇的處女蠅（個(gè)果蠅雜交實(shí)驗(yàn)選擇的處女蠅（4人人/組組110921/22班）班）收集處女蠅的種類收集處女蠅的種類：每個(gè)雜交至少：每個(gè)雜交至少5 5只雌蠅。只雌蠅。

14、 1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 2.2.殘翅殘翅1010只，放入只，放入1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 3.3.黑檀體黑檀體5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶。個(gè)培養(yǎng)瓶。 5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶。個(gè)培養(yǎng)瓶。收集雄蠅的種類收集雄蠅的種類：每個(gè)雜交至少：每個(gè)雜交至少5 5只雄蠅。只雄蠅。 1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 2.2.殘翅殘翅1010只，放入只，放入1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 3.3.黑檀體黑檀體5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；

15、個(gè)培養(yǎng)瓶； 4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶。個(gè)培養(yǎng)瓶。 5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶。個(gè)培養(yǎng)瓶。遺 傳 學(xué)省 級(jí) 精 品 課 程內(nèi)容內(nèi)容單因子單因子雜交雜交雙因子雙因子雜交雜交伴性伴性遺傳遺傳三點(diǎn)三點(diǎn)測(cè)交測(cè)交雜交蠅雜交蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅正交正交（2人）人）野生型（長(zhǎng)翅）突變型（殘翅）灰體殘翅黑檀體長(zhǎng)翅野生型（紅眼）突變型（白眼）白小焦野生型反交反交（2人）人）突變型（殘翅）野生型（長(zhǎng)翅）黑檀體長(zhǎng)翅灰體殘翅突變型（白眼）野生型（紅眼）野生型白小焦4個(gè)果蠅雜交實(shí)驗(yàn)選擇的處女蠅（個(gè)果蠅雜交實(shí)驗(yàn)選

16、擇的處女蠅（4人人/組）組）收集處女蠅的種類收集處女蠅的種類：每個(gè)雜交至少：每個(gè)雜交至少5 5只雌蠅。只雌蠅。 1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 2.2.殘翅殘翅1010只，放入只，放入1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 3.3.黑檀體黑檀體5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶。個(gè)培養(yǎng)瓶。 5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶。個(gè)培養(yǎng)瓶。收集雄蠅的種類收集雄蠅的種類：每個(gè)雜交至少：每個(gè)雜交至少5 5只雄蠅。只雄蠅。 1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 2.2.殘翅殘翅1010只，放入只，放入1 1個(gè)培養(yǎng)瓶；個(gè)培養(yǎng)瓶； 3.3.黑檀體黑檀體5 5只，放只，放1 1個(gè)