蛋白酶活力測定方法

1、酸性蛋白酶產(chǎn)品概述 蛋白質(zhì)由氨基酸組成，是自然界中發(fā)現(xiàn)的最復雜的有機化合物之一。由鹽酸和蛋白酶分解成易被高等動物的腸道和微生物有機體的細胞膜吸收的氨基酸。 包括人類在內(nèi)的每種動物，必須要有足夠的蛋白質(zhì)來維持自身生長， 來生成每個細胞所必需的氨基酸， 一些特種蛋白質(zhì)還是某些特殊細胞、腺體分泌物、酶和激素的功能性組成元素。蛋白酶是指一些有催化功能的酶，能夠水解（斷裂）蛋白質(zhì)，因此也被稱為蛋白水解酶。 蛋白水解酶在許多的生理和病理過程中發(fā)揮著重要作用，在食品和乳品加工業(yè)也有著廣泛應用。工作機理蛋白水解酶制劑本產(chǎn)品能在酸性條件下水解蛋白質(zhì)食品中的縮氨酸鍵，釋放氨基酸或者多肽。在酒精、葡萄酒、果汁、啤酒

2、、黃油和醬油生產(chǎn)中， 添加酸性蛋白酶可澄清發(fā)酵液中的霧氣。 酵母在發(fā)酵階段的生長可以通過懸浮蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化的氨基酸來加以促進， 從而加速發(fā)酵并提高產(chǎn)量。 本產(chǎn)品是一種酸性蛋白酶制劑，在酸性條件下具有較高活性， 由酸性蛋白酶高產(chǎn)菌株曲霉菌深層發(fā)酵而成。 它廣泛應用于飼料、紡織、廢水處理和果汁提純方面。酸性蛋白酶（Acid protease ）是指蛋白酶具有較低的最適pH,而不是指酸性基團存在于酶的活性部位，酸性蛋白酶的最適PH從2左右（胃蛋白酶）到 4 左右。從酶的活力 -PH 曲線分析，在酶的活性部位中含有一個或更多的羥基。 這一類蛋白酶中研究最徹底的是胃蛋白酶。 （酸性蛋白酶537 容易失活）簡

3、介：酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉優(yōu)良菌種經(jīng)發(fā)酵精制提煉而成，它能在低PH條件下，有效水解蛋白質(zhì)，廣泛應用于酒精、白酒、啤酒、釀造、食品加工、飼料添加、皮革加工等行業(yè)。1、產(chǎn)品規(guī)格：，規(guī)格有5萬u/g10萬u/g液體型為黑褐色液體，規(guī)格有 50000u/ml10000u/ml.2、酶活力定義：一個酶活力單位是1g 酶粉或 1ml 酶液在40，PH3.0 條件下， 1 分鐘水解酪素產(chǎn)生1ug 酪氨酸為 一個酶活力單位（ u/g 或 u/ml ）特性1、溫度范圍為：最適溫度范圍為40 C-50 C 2、PH為：最適PH范圍為2.53.5使用方法1、白酒工業(yè)：本品用以淀粉為原料的生產(chǎn)酒精及白酒行業(yè)，提高

4、出酒率0.25%個酒分，提高發(fā)酵速度。2、食品工業(yè)：食品上用以淀粉改良，提高食品風味、改良品質(zhì)，因能提高氨基酸含量3、啤酒生產(chǎn)：能有效阻斷雙乙酰生成，縮短啤酒成熟期。4 飼料添加劑：提高飼料利用率。5、毛皮軟化：提高上色率，手感豐滿，增加毛皮光澤。推薦使用： 先推薦實驗的初始添加量從醪液的百萬分之一開始。將酸性蛋白酶按1： 20溶于 35-40溫水中，浸泡活化 1 小時，期間每15 分鐘攪拌一次。注意事項1、此產(chǎn)品可完全溶于水，使用安全可靠。操作時請勿直接與酶制劑接觸，若有接觸需及時用清水沖洗。2 、原包裝打開后盡快使用，剩余部分需扎口保存。3 、本品在貯運中要避免雨淋和曝曬，禁止與有毒有害物

5、質(zhì)混運、混存?？莶輻U菌蛋白酶是堿性蛋白酶。 a 淀粉酶中性蛋白酶. 胃蛋白酶才是酸性蛋白酶.酸性蛋白酶活力測定方法蛋白酶活力測定: 參照中華人民共和國專業(yè)標準 SB/ T10317-1999蛋白酶活力測定方法 2007纖維素酶DNSB活力測定方法DNS, 活力 , 纖維素酶 , 測定1 定義1g固體酶粉在40 c和pH值4.2條件下，每分鐘水解纖維素生成1微克葡萄糖的量為 1 個酶活力單位，以 u/g 表示。2 原理纖維素酶分解纖維素，產(chǎn)生纖維二糖、葡萄糖等還原糖，纖維二糖、葡萄糖等還原糖能將3， 5 二硝基水楊酸中的硝基還原成橙黃色的氨基化合物，利用比色法測定其還原物生成量，表示酶的活力。3

6、 . 試劑和溶液3.1 1 %葡萄糖標準溶液（同B 葡聚糖酶酶活測定）3.2 竣甲基纖維素鈉（CMC）容液取1g竣甲基纖維素鈉（粘度300600厘泊），加入pH4.2的磷酸氫 二鈉檸檬酸緩沖液（甲液414ml和乙液586ml并用pH計校正至pH為4.2）混合均勻，水浴加熱至溶，冷卻后用2M鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH 到4.2,定溶至100ml,再用二層紗布過濾，此溶液在 43 天。取濾液100ml，20ml,蒸儲水40ml,混勻，貯冰箱備用。3.3 DNS試劑（同（3葡聚糖酶酶活測定）4儀器和設備1.1 恒溫水浴鍋 （40± 0.2）1.2 分光光度計含10mni匕色皿，可在550nm處

7、測量吸光度。5 測定步驟5.1 標準曲線繪制分別吸取1%葡萄糖標準溶液0、 1.0 、2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0 、 6.0ml于 50ml 容量瓶中， 用蒸餾水制成每ml 分別含有葡萄糖0、 200、 400、600、800、1000、1200mg的稀標準液。各取不同濃度的稀標準液 0.5ml 于試管中，加入CMC§?取1.5ml、DNS式劑3.0ml,于沸水浴中沸騰 7min,取出后立即加入蒸儲水10ml混勻。冷卻后，用10mni匕色皿， 在波長550nm處用分光光度計分別測定其吸光度。以吸光度為縱坐 標，相對應的葡萄糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線或計算回歸方程。5

8、.2 待測酶液的制備（同（3 葡聚糖酶酶活測定）5.3 比色測定精確吸取經(jīng)待測稀釋酶液0.5ml ， 40C預熱5min,加入經(jīng)40c預熱的CMC夜1.5ml （每個樣品同時作3 支平行試管），于40c水浴精確反應10min,立即加入DNS式劑3.0ml 終止反應，以后按標準曲線制作步驟測定樣品吸光度。同時進行空白對照測定，取稀釋酶液0.5ml ,先加入DNS式劑3.0ml , 再加入CM（M 1.5ml ,其余步驟同于樣品測定。6 . 計算酸性蛋白酶及其在畜牧業(yè)中的應用酸性蛋白酶能在酸性環(huán)境中水解蛋白質(zhì)， 廣泛用于制革工業(yè)、 醫(yī)藥業(yè)、釀造業(yè)和飼料工業(yè)。酸性蛋白酶作為一種新型的飼料添加劑，可以

9、明顯促進幼齡動物的生長發(fā)育， 降低斷奶帶來的應激效應， 飼用效果非常顯著， 是一類應用前景非常廣闊的酶制劑。 本文對酸性蛋白酶的酶學特性及其在畜牧業(yè)中的應用研究進展進行了綜述。酸性蛋白酶及其在畜牧業(yè)中的應用 酸性蛋白酶包括胃蛋白酶、 凝乳酶和一些微生物蛋白酶， 適宜在酸性條件下水解蛋白質(zhì)。 酸性蛋白酶用作動物飼料添加劑， 可提高動物&特別是幼齡動物） 對飼料中蛋白成分的消化吸收率，促進其生長。此外，它還用于制革工業(yè)中皮革的脫毛和軟化， 食品工業(yè)中蛋白質(zhì)的水解生產(chǎn)高檔食品， 醫(yī)藥工業(yè)中消化劑和消炎劑的制造等。 近年來，隨著集約化畜禽生產(chǎn)的發(fā)展，加劇了環(huán)境污染。其中，氮是污染環(huán)境的主要物質(zhì)，因而提高飼料中蛋白類營養(yǎng)物質(zhì)的利用效率，降低其排放就顯得尤為重要。此外，由于我國蛋白質(zhì)飼料資源嚴重缺乏， 需