優(yōu)選人參的提取工藝研究

1、優(yōu)選人參的提取工藝研究福建省立醫(yī)院藥學部350001【摘 要】目的 研究優(yōu)選人參多糖最佳提取工藝。方法 以多糖提取率、糖醛 酸提取率和相對分子質(zhì)量作為指標，對比三種提取方法的下的提取效率，最終選 出最佳的提取工藝。結果最好的人參多糖提取工藝是加入15倍的水量，在 100°c水浴下提取3次，一次提取時間為3h。結論 這一工藝的操作比較簡便， 具有一定的穩(wěn)定性，能夠被運用在產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)過程中。【關鍵詞】優(yōu)選人參；提取工藝；相對分子量；人參多糖；糖醛酸；正交試驗人參是五加科植物人參干燥的根以及根莖，其具備良好的補元氣, 復脈固脫、補脾益肺等功效11人參富含皂昔類、蛋白質(zhì)、糖類、黃酮類、維 牛

2、素、揮發(fā)性成本和多種微量元素。當前的藥理研究顯示，人參多糖具有提高人 體免疫力、抵抗腫瘤、延緩衰老和抵抗輻射等多種顯著功效，且其中的酸性多糖 存在很好的增強免疫及抵抗腫瘤的效果【2】。當前植物多樣的提取方法主要為有 水提取法、酸提取法、酶提取等，其中最經(jīng)常使用的是水提法、酸提法和堿提法 31木次研究中就以上方法來對人參多糖進行提取，以多糖、糖醛酸提取率、 多糖相對分子質(zhì)量為指標，將提取結果和提取率作擊對比，通過正交試驗來選取 最佳提取工藝，找出最可靠的人參多糖提取方法。1.使用儀器及材料木次研究中所使用的儀器和材料情況見下表1：2.提取方法及結果2.1三種提取方法介紹2.1.1水提法 精密稱得

3、10g人參藥材，平行分為3份，放置在圓底燒瓶的底部，在其中加入20倍的水后，浸泡2小時，放置在90°c的水浴內(nèi)提取3 小吋，提取1次，濾過，濾液經(jīng)500r/min, lomin離心，獲取上清液，在其中加 入95%的乙醇，實現(xiàn)乙醇體積分數(shù)調(diào)劑到75%,醇沉過夜、抽濾，沉淀分別運用 無水乙醇、丙酮、乙醴洗滌，干燥并稱定質(zhì)量。2.1.2酸提法人參取藥及分類方式同水提法，加入20倍量的o.3mol/l鹽酸，浸泡2小吋，在90°c水浴內(nèi)提取3小吋，1次提取后，濾過，濾液在5000r/min, lomin條件下離心，得到上清液，在l.omol/lnaoh溶液將試劑的ph值調(diào)整至 67,

4、離心，在上清液中加入95%乙醇并且達到75%體積分數(shù)后，醇沉過夜、抽 濾、隨后稱定質(zhì)量。2.1.3堿提法 精密稱取試驗材料10g,平分為3份，置于圓底燒瓶底 部，加20倍量0.3mol/lnaoh溶液，浸泡2h,隨后在于水浴90°c提取3h,經(jīng)過 提取和過濾后濾液于lomin, 5000r/min離心獲取上清液，采用1.0mol/l hcl溶 液將ph值到67,離心后得到上清液，加95%乙醇至體積分數(shù)為75%,醇沉過 夜、抽濾后，分別使用無水乙醇、丙酮、乙醴進行洗滌，干燥后稱定質(zhì)量。2.2測定多糖2.2.1對照溶液 取干燥10mg的d無水葡萄糖當做對照，用100ml量 瓶盛裝定容，配

5、置成100μg/ml儲備液備用。2.2.2制備供試品溶液 精密稱得10mg干燥粗多糖，放于100ml量瓶 中定容，配制岀100μg/ml供試品溶液備用。2.2.3標準曲線取對照溶液，分別將其劑量分配為0.1、······ 0.8> l.oml,并分別放置于具塞試管中，加入蒸憾水補足l.oml后，在其中加入6%的l.oml苯酚溶液， 以及5.0ml的濃硫酸，搖勻后放置在沸水中水浴15min,放置于冰水浴內(nèi)lomin 后在室溫下放置1

6、5min,并且在490nm處對吸光度a值進行測定，將a值當做 縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標，實行線性冋歸，獲得對應冋歸方程，基于d無水 葡萄糖10.023100.25μg/ml區(qū)間具有良好的線性關系224精密度 取0.8ml對照品溶液，用具塞試管盛裝，依據(jù)2.2.3中的 方法對a值進行測定,重復測定的次數(shù)共為6次,最終測得的a值rsd是0.093%o2.2.5穩(wěn)定性試驗 取l.oml供試品溶液用具塞試管盛裝，依據(jù)2.2.3中 的方法來對a值進行測定，且測定一次的間隔時間是半小時，最終測定出的a 值rsd是0.807%,這一結果顯示了供試品溶液在3h內(nèi)是比較穩(wěn)定的。2.3糖醛酸測定法2

7、.3.1對照溶液取10mg干燥恒定質(zhì)量d半乳糖醛酸作對照，稱取后放置在looml的量瓶中定容，配置為100μg/ml的儲備液，作為備用液。232制備供試品溶液 取干燥粗多糖，置于looml量瓶定容， 隨后配置100μg/ml儲備液備用。2.3.3標準曲線分別量取0.1······ 0.8> l.oml 對照溶液置 于具塞試管中，加入蒸徭水至l.oml,在冰水浴內(nèi)加入四硼酸鈉濃硫酸溶液6.0ml, 搖勻后放置半小時，在525nm位置

8、測定a值，將a值作為縱坐標，質(zhì)量濃度作 為橫坐標進行線性冋歸，得出冋歸方程，d半乳糖醛酸于9.846-98.43μg/ml 區(qū)間線性關系表現(xiàn)為良好。2.3.4試驗精密度 取0.5ml劑量的對照溶液，用具塞試管盛裝，并加 水至1 .oml,依據(jù)2.3.3項內(nèi)的方法對a值進行測定，重復測定6次，最終得到 結果a值rsd是0.121%。2.3.5穩(wěn)定性試驗 精密稱取l.oml的供試品溶液后,放置于具塞試管 內(nèi)，結合2.3.3方法測定a值，結果a值rsd為0.885%,體現(xiàn)岀供試品溶液于 2h內(nèi)是保持穩(wěn)定的。2.4相對分子質(zhì)量2.4.1色譜條件若色譜柱是polysep-gfc &

9、ndash;p4000；流動相為0.71%na2so4和0.02% nan3溶液，體積流量是0.5ml/min；柱溫35°c,檢測儀 器是rid-10a,溫度是35°c；進樣量是20μl。2.4.2線性關系分析 將不同相對分子質(zhì)量右旋糖酹做對照，采用流動 相實現(xiàn)對10mg/ml溶液的配置，進樣20μl,對相應保留時間并實行記錄， 橫坐標是保留吋間t,縱坐標是相對分子質(zhì)量的對數(shù)，實行線性冋歸后獲得線性 方程。2.4.3測定樣品中多糖的相對分子質(zhì)量 精密稱取2.1項中所制備出的 三種適量干燥粗多糖，配置得到10mg/ml多糖溶液，結合2.4.1來測定

10、，進而計算出相應的多糖相對分子質(zhì)量。2.5結果水提、酸提、堿提法提取多糖量從表1可知，相對分子質(zhì)量色譜的分布 圖可見圖1,水提多糖提取率高于酸提與堿提要高，酸提糖醛酸提取率和另外兩 種方法比較明顯較高。水提粗多糖保留時間是ll-25min,相對分子質(zhì)量 180-1.8×106,它具有比較廣的范圍，酸提粗多糖保留1725min,相對分 子質(zhì)量是180-1.0×105,可能是由于酸環(huán)境破壞了試劑內(nèi)的大分子多糖， 堿提粗多糖大致和水提保留時間一致，水提多糖和酸提比較的相對分析質(zhì)量范圍 要更廣，口信息也更全面。在基礎性研究后可知，將提取率高口信息全面的方法 作為

11、最佳提取法。結合多糖、糖醛酸、多糖相對分子量等情況，其中選擇水作為 提取溶劑。3 討論在本次試驗中，在對提取溶劑進行選擇中，考察了 0.10.5mol/l的鹽酸 溶液和0.1-0.5mol/l的氫氧化鈉溶液提取結果，最終得知酸和堿濃度比較高的情 況下對提取的濃度比較深，該種方法下的多糖提取率低，可能是在濃酸或是濃堿 狀態(tài)下被破壞掉了【46】。進而使得大分子分解為小分子的單糖、多糖，無法被 75%這一濃度的乙醇沉淀，當濃度是0.10.3mol/l的時候，提取液的顏色會更深， 相應的多糖提取率也會逐漸升高【78九因而本次試驗分別使用o.3mol/lhcl和 naoh溶液當做酸提和堿提溶液。綜上可知

12、，人參多糖最佳提取方法是使用15倍水量，100°c水浴實施提 取3次，一次提取時間為3h。這一工藝的操作比較簡便，具有一定的穩(wěn)定性， 能夠被運用在產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)過程中。參考文獻：宋利華，蕭偉，鹿麗麗，王振中，姜華，張怡，朱克近正交試驗優(yōu)選人參多 糖的提取工藝j中草藥,2012, 02： 283-287.孫聰，曾鵬濤，李天一，吳強正交實驗法優(yōu)選人參總皂昔提取工藝的研究卩 長春中醫(yī)藥大學學報，2012, 03： 533-534.3金達明，吳俊，趙巖，張連學，翟為中心組合設計響應面分析法優(yōu)選人參中 總皂昔的超聲提取工藝j吋珍國醫(yī)國藥,2012, 09： 2148-2150.王輝文，孟憲生，包永

13、睿，王帥.人參提取工藝的優(yōu)化及其有效成分與藥效學 相關性分析j中成藥，2012, 11： 2240-22425 xie h, cao y, liu j. et al. optimization of extraction process of water-soluble polysaccharides from seeds meal of ginsen gj. scie nee & amp; tech no logy of food industry, 2014, i (9)： 249-253.薛雅光，潘書洋，谷雨，王晶，于薔薔，王振輝，李超生正交試驗優(yōu)選參杞 補氣顆粒中人參提取工藝j世界科學技術中醫(yī)藥現(xiàn)代化，201