分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料絕對(duì)重點(diǎn)

1、分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料（第一版）一 名詞解釋1 Southern blot / Northern blot DNA 斑跡法 / RNA 轉(zhuǎn)移吸印技術(shù)。是為了檢測(cè)待檢基 因或其表達(dá)產(chǎn)物的性質(zhì)和數(shù)量 （基因拷貝數(shù)） 常用的核酸分子雜交技術(shù)。 二者均屬于印跡轉(zhuǎn) 移雜交術(shù)，所不同的是前者用于檢測(cè) DNA 樣品；后者用于檢測(cè) RNA 樣品。2 cis-acting element / trans-acting factor 順式作用元件 / 反式作用因子。均為真核生物 基因中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列。 順式作用元件是與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、 能被基因調(diào)控蛋白特異 性識(shí)別和結(jié)合的特定 DNA序列，包括啟動(dòng)子和上游啟動(dòng)子

2、元件、增強(qiáng)子、反應(yīng)元件和poly（A）加尾信號(hào)。反式作用因子是能與順式作用元件特異性結(jié)合、對(duì)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄起始過程有調(diào)控作用的蛋白質(zhì)因子，如RNA聚合酶、轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄激活因子、抑制因子。3 VNTR / STR 可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列 / 短串聯(lián)重復(fù)。 均為非編碼區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列。前者也叫高度可變的小衛(wèi)星DNA重復(fù)單位約 924bp,重復(fù)次數(shù)變化大,變化高度多態(tài)性；后者也叫微衛(wèi)星 DNA重復(fù)單位約26 bp，重復(fù)次數(shù)約1060次，總長(zhǎng)度通常小 于 150bp 。（參考第 7 題）4 viral oncogene / cellular oncogene 病毒癌基因 / 細(xì)胞癌基因。 病毒癌基因指

3、存在于逆 轉(zhuǎn)錄病毒中、體外能使細(xì)胞轉(zhuǎn)化、體內(nèi)能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的基因；細(xì)胞癌基因也叫原癌基因， 指存在于細(xì)胞內(nèi)，與病毒癌基因同源的基因序列。 正常情況下不激活， 與細(xì)胞增殖相關(guān)，是 維持機(jī)體正常生命活動(dòng)所必須的， 在進(jìn)化上高等保守。 當(dāng)原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異， 基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時(shí)，使細(xì)胞過度增殖，從而形成腫瘤。5 ORF / UTR 開放閱讀框/非翻譯區(qū)。均指在 mRNA中的核苷酸序列。前者是特定蛋 白質(zhì)多肽鏈的序列信息， 從起始密碼子開始到終止密碼子結(jié)束， 決定蛋白質(zhì)分子的一級(jí)功能； 后者是位于前者的 5端上游和 3端下游的、沒有編碼功能的序列，主要參與翻譯起始調(diào) 控，為前者的多肽

4、鏈序列信息轉(zhuǎn)變?yōu)槎嚯逆溗匦琛? enhancer / silencer 增強(qiáng)子 / 沉默子。均為順式作用元件。前者是一段含多個(gè)作用元件的短DNA序列，可特異性與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄活性，可以位于基因任何位置，通常在轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游 -100 到-300 個(gè)堿基對(duì)處；后者是前者內(nèi)含的負(fù)調(diào)控序列，結(jié)合特異 蛋白因子時(shí)，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起阻遏作用。7 micro-satellite / minisatellite 微衛(wèi)星 DNA /小衛(wèi)星 DNA。衛(wèi)星 DNA是出現(xiàn)在非編碼區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列， 特點(diǎn)是有固定重復(fù)單位且重復(fù)單位首尾相連形成重復(fù)序列片段，串聯(lián)重復(fù)單位長(zhǎng)短不等，重復(fù)次數(shù)大小不一。微衛(wèi)星DN

5、A即卩STR小衛(wèi)星DNA分為高度可變的小衛(wèi)星DNA（即卩VNTR和端粒DNA（參考第3題）8 SNP / RFLP 單核苷酸多態(tài)性 / 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性。 前者是指在基因組水平上 由單個(gè)核苷酸的變異所引起的 DNA 序列多態(tài)性，它是人類遺傳變異中最常見的一種，占所有已知多態(tài)性的 90%以上；后者是由于高度重復(fù)序列中的無間隔反向重復(fù)序列容易形成也 容易突變產(chǎn)生或缺失一個(gè)酶切位點(diǎn)， 所造成的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性， 如果用同一種限制性 內(nèi)切酶消化不同個(gè)體的同一段 DNA ，由于堿基組成的變化而改變限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)， 會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)度不同的 DNA 片段。9 cloning vector / exp

6、ressing vector 克隆載體/ 表達(dá)載體。載體是與外源性 DNA片段 在體外連接構(gòu)成重組分子，然后導(dǎo)入宿主細(xì)胞，使外源性DNAT增或表達(dá)的分子?？寺≥d體 是用于克隆和擴(kuò)增特定 DNA片段的載體；表達(dá)載體是用于表達(dá)外源基因的載體。10 optional exon / optional intron 外顯子選擇/內(nèi)含子選擇。均屬于 mRNA勺選擇剪接 方式。選擇剪接指參加拼接的外顯子可以不按其在基因組的線性分布次序拼接，內(nèi)含子也可以不被切除而保留的剪接方式。 外顯子選擇指在不同剪接方式中， 某個(gè)或某幾個(gè)外顯子可以 在成熟mRNA中保留，也可以通過剪接過程被去掉；內(nèi)含子選擇指在不同剪接方式

7、中，內(nèi)含 子可以被完全去掉，也可以有一個(gè)內(nèi)含子被保留在成熟mRNA中o11 promoter / terminator 啟動(dòng)子 / 終止子。均為真核生物基因兩側(cè)不能被轉(zhuǎn)錄且對(duì)基 因表達(dá)、調(diào)控有重要作用的序列。啟動(dòng)子是能與RNA聚合酶結(jié)合并起始轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列，包括TATA盒、CAAT盒、GC盒一組序列，一般位于基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游-100-200堿基對(duì)范圍；終止子是提供轉(zhuǎn)錄停止信號(hào)的DNA序列，當(dāng)mRNA專錄到此部位后，產(chǎn)生 poly（U）,被結(jié)合在RNA聚合酶上的延長(zhǎng)因子識(shí)別并與其結(jié)合，促使RNA聚合酶與DNA模板解離，終止轉(zhuǎn)錄。12 leader sequenee / SD sequenee

8、 前導(dǎo)序列/ SD序列。前導(dǎo)序列指位于基因 5，端、第 一個(gè)外顯子上游的序列， 也叫5,端序列，在加工過程中通常被最先剪切去除； SD序列指位 于原核生物 mRNA5端，與核糖體 16S rRNA結(jié)合的序列，一般位于 mRNA勺起始密碼AUG的 上游510個(gè)堿基處，并且同16S rRNA3，端的序列互補(bǔ)，其順序及位置影響翻譯起始效率。13 gene/ genome 基因/基因組?；蚴秦?fù)責(zé)編碼 RNA或一條多肽鏈的 DNA片段，即攜帶有遺傳信息的 DNA序列，是控制性狀的基本遺傳單位；基因組是一個(gè)細(xì)胞或病毒的全部遺傳信息，真核生物基因組是一套完整單倍體DNA和線粒體DNA全部序列，某些病毒基因

9、組由RNA組成。14 operon / operator 操縱子 / 操縱元件。操縱子是指按功能相關(guān)性成簇排列的結(jié)構(gòu)基 因，連同上游調(diào)控區(qū)和下游轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)， 共同組成的一個(gè)基因表達(dá)協(xié)同單位； 操縱元件是 一段能被不同基因表達(dá)調(diào)控蛋白識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是決定基因表達(dá)效率的關(guān)鍵元件。15 gene rearrangement / gene replacement 基因重排/ 基因置換?；蛑嘏攀?DNA水平 調(diào)控的重要方式之一， 指某些基因片段改變?cè)瓉泶嬖陧樞颍?通過調(diào)整有關(guān)基因片段的銜接順 序，再重排位一個(gè)完整的轉(zhuǎn)錄單位； 基因置換是重要的基因治療方式， 指將特定的目的基因 導(dǎo)入特定的細(xì)

10、胞，通過定位重組，以導(dǎo)入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷。16 domain / motif 結(jié)構(gòu)域（功能域） / 基序（模序）17 receptor / adaptor 受體 / 銜接蛋白。受體是信息分子的接收分子，是存在于細(xì)胞表 面的或細(xì)胞內(nèi)的蛋白分子， 其作用是識(shí)別配體并將配體信號(hào)進(jìn)行轉(zhuǎn)換， 使之成為細(xì)胞內(nèi)分子 可以識(shí)別的信號(hào)并傳遞至其他分子引起細(xì)胞應(yīng)答； 銜接蛋白是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 分子的接頭，可將位于其上游與下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子連接起來。18 initiator caspase / effector caspase 起始者胱天蛋白酶 / 效應(yīng)者胱天蛋白酶。胱天蛋 白酶是哺乳動(dòng)

11、物細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶。 起始者胱天蛋白酶有較長(zhǎng)原域， 位于胱天蛋白酶級(jí)聯(lián)活 化途徑上游， 通過蛋白質(zhì)相互作用自我激活； 效應(yīng)者胱天蛋白酶有較短原域， 位于胱天蛋白 酶級(jí)聯(lián)活化下游， 前體能被起始者胱天蛋白酶切割而活化， 活化后能切割底物從而導(dǎo)致凋亡。19 transfection / transformation 轉(zhuǎn)染/ 轉(zhuǎn)化。均為重組 DNA常用方法。前者指真核細(xì)胞 主動(dòng)攝取或被動(dòng)導(dǎo)入外源性DNA片段而獲得新表型的過程；后者指將質(zhì)?；蚱渌庠碊NA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主菌并使其獲得新表型的過程。20 gene family / gene superfamily 基因家族 / 基因超家族。 基因家

12、族指核苷酸序列或編 碼產(chǎn)物結(jié)構(gòu)具有一定程度同源性的基因， 其編碼產(chǎn)物常常有相似功能； 超基因家族是由多基因家族及單基因組成的更大的基因家族，它們結(jié)構(gòu)有程度不等的同源性， 但功能不一定相同。二 問答1 基因的基本概念。答：基因的基本概念包括基因，基因組，結(jié)構(gòu)基因，模板鏈，編碼鏈，外顯子，內(nèi)含子，順 式作用元件，反式作用元件，啟動(dòng)子，增強(qiáng)子，終止子等。（參考名詞解釋 ）結(jié)構(gòu)基因 基因中編碼 RNA 或蛋白質(zhì)的 DNA 序列。模板鏈/編碼鏈一結(jié)構(gòu)基因雙鏈中一條作為合成RNA的模板鏈，另一條為編碼鏈。外顯子 /內(nèi)含子 編碼序列 / 非編碼序列。2 基因的組織結(jié)構(gòu)。 答：原核生物基因結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，通常是一條

13、雙鏈環(huán)狀 DNA 分子，有操縱子結(jié)構(gòu)。真核生物基因結(jié)構(gòu)復(fù)雜，包括染色體DNA和線粒體DNA。染色體DNA位于細(xì)胞核內(nèi)，雙鏈盤繞在以組蛋白分子為核心的結(jié)構(gòu)表面構(gòu)成核小體，核小體組成染色單體；線粒體DNA是閉環(huán)雙鏈分子，位于核外。病毒基因可以由 DNA 或 RNA 組成。 RNA 病毒基因有單雙鏈和正負(fù)鏈之分， DNA 病毒基 因有環(huán)狀 DNA 和線性 DNA 之分。3 原核生物、真核生物、人類基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。答：原核生物的基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 環(huán)狀雙股鏈， 有操縱子結(jié)構(gòu)， 序列連貫， 無內(nèi)含子， 大多為結(jié)構(gòu)基因，無重疊序列，大多為單拷貝。真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：基因組大，核內(nèi)染色體，體細(xì)胞基因組為雙

14、倍體，大量重復(fù)序列，結(jié)構(gòu)基因不連續(xù)，斷裂基因，含外顯子與內(nèi)含子，絕大多數(shù)為非編碼序 列。人類基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 人類基因組除包括真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)外， 數(shù)量更大， 非編碼 序列更多。與細(xì)菌基因組相比，基因組大 1000 倍，基因數(shù)目多 20倍，非編碼序列為 10000 倍。4 重復(fù)序列種類、特征，人類基因多態(tài)性。 答：重復(fù)序列大部分是非編碼序列， 功能主要與基因組穩(wěn)定性、 組織形式及基因表達(dá)調(diào)控有 關(guān)。根據(jù)重復(fù)序列出現(xiàn)頻率不同，可分為咼重復(fù)序列DN A （105）、中重復(fù)序列 DN A （10105）、單拷貝或低重復(fù)序列 DNA（10）。 高重復(fù)序列可以集中在某一區(qū)域串聯(lián)排列。典型 咼重復(fù)序

15、列 DNA 有衛(wèi)星 DNA 和反向重復(fù)序列。 衛(wèi)星 DNA 出現(xiàn)在非編碼區(qū)呈串連重復(fù)排列， 按照串連重復(fù)單位和重復(fù)次數(shù)，分為大衛(wèi)星DNA、小衛(wèi)星DNA、微衛(wèi)星DNA。反向重復(fù)序列指兩個(gè)順序相同的拷貝在 DNA 鏈上反向排列，中間可以有間隔序列，也可以串聯(lián)（回文 結(jié)構(gòu)）。 中重復(fù)序列散在分布于基因組中，常與單拷貝基因間隔排列。人類基因多態(tài)性是指人類個(gè)體之間基因組 DNA 的差異，這些差異產(chǎn)生的主要原因是基 因組序列的變異。 變異是生物遺傳基本特征之一， 也是生物進(jìn)化和適應(yīng)環(huán)境的必然結(jié)果。 基 因多態(tài)性造成了生物特別是人類在生理及病理?xiàng)l件下對(duì)疾病、 環(huán)境及應(yīng)激的易感性、 對(duì)環(huán)境、 毒素、藥物的耐受

16、性和反應(yīng)性的千差萬別。5 病毒基因組、原核生物基因組、真核生物基因組核酸復(fù)制特點(diǎn)。答：DNA復(fù)制基本特點(diǎn)：復(fù)制都有固定起始點(diǎn)，復(fù)制過程中形成復(fù)制泡和復(fù)制叉， 復(fù)制基本單位是復(fù)制子， 復(fù)制是半保留復(fù)制， 保證遺傳信息忠實(shí)傳遞， 復(fù)制是半不連續(xù) 復(fù)制，克服了 DNA空間結(jié)構(gòu)對(duì)DNA新鏈合成的制約。原核生物有特定復(fù)制起點(diǎn)和終點(diǎn)結(jié)構(gòu)， 只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)； 在起始點(diǎn)上可以連續(xù)開始新的 復(fù)制；復(fù)制過程都是 DN A雙鏈復(fù)制，也有復(fù)制、滾環(huán)復(fù)制、D環(huán)復(fù)制等方式。真核生物復(fù)制需要解開和重裝核小體結(jié)構(gòu)； 復(fù)制過程中的引物及岡崎片斷長(zhǎng)度小于原核生 物；有多個(gè)復(fù)制位點(diǎn)；需要特殊機(jī)制復(fù)制端粒，涉及逆轉(zhuǎn)錄；一次復(fù)制完成

17、以前不會(huì)啟動(dòng)新一輪復(fù)制；線粒體 DNA 以 D 環(huán)模式進(jìn)行復(fù)制。不同病毒的基因組核酸以不同模式進(jìn)行復(fù)制。單鏈環(huán)狀DNA可通過成環(huán)滾環(huán)模式復(fù)制，雙鏈環(huán)狀DNA可通過不同方式復(fù)制， 有些病毒雙鏈環(huán)狀 DNA通過RNA中間體進(jìn)行復(fù)制， 病 毒線性DNA利用特殊末端起始引物復(fù)制，RNA病毒通過RNAM制過程復(fù)制。6 DNA 損傷及其修復(fù)的主要方式。答： DNA 損傷形式有：交聯(lián)、 DNA 鏈斷裂、堿基突變、 DNA 重組等。 交聯(lián)包括鏈內(nèi)共價(jià)交聯(lián) （堿基之間 ）和鏈間共價(jià)交聯(lián)（鏈與鏈之間） 。 DNA 鏈斷裂指 DNA 鏈內(nèi)磷酸二酯鍵斷裂。 堿基突變包括單點(diǎn)突變和多點(diǎn)突變。點(diǎn)突變分為轉(zhuǎn)換（同型堿基替代

18、）和顛換（異型堿 基替代），此外還有缺失（核苷酸丟失） 、插入（核苷酸增加） 、倒位（核苷酸序列方向 倒轉(zhuǎn)）。 DNA 重組指 DNA 分子內(nèi)發(fā)生較大片段的交換。DNA 損傷修復(fù)機(jī)制有： 直接修復(fù)。如： DNA 斷裂口在鏈兩端未損傷情況下可由連接酶直接修復(fù)，二聚體可被 光復(fù)活酶直接修復(fù)，烷基化堿基可直接修復(fù)。 切除修復(fù)?？煞譃閱蝹€(gè)核苷酸切除修復(fù)和核苷酸片段切除修復(fù)。 重組修復(fù)。即先進(jìn)行復(fù)制再進(jìn)行切除修復(fù)。 SOS 修復(fù)。是 DNA 損傷嚴(yán)重時(shí)的應(yīng)急性修復(fù)方式。 細(xì)胞周期檢查點(diǎn)控制是真核生物誘導(dǎo)修復(fù)的主要機(jī)制。7 原核生物基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄環(huán)節(jié)的 調(diào)控模式 、調(diào)控方式。 答：基因表達(dá)調(diào)控的環(huán)節(jié)，主要在

19、轉(zhuǎn)錄水平。多種因素以特定的方式影響轉(zhuǎn)錄。 啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)錄的效率與方向及模板鏈。 d因子的種類與濃度調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。 負(fù)調(diào)控：阻遏蛋白結(jié)合于 DNA 后抑制轉(zhuǎn)錄，分為誘導(dǎo)和阻遏 2 種情況。 正調(diào)控：調(diào)控蛋白結(jié)合于特定 DNA 序列后促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。 CAP 蛋白調(diào)節(jié)糖代謝相關(guān) 基因的表達(dá)； ntrC 蛋白調(diào)節(jié)氮代謝相關(guān)基因的表達(dá)。 倒位蛋白通過 DNA 重組倒位調(diào)節(jié)基因表達(dá)。 RNA 聚合酶抑制物可與 RNA 結(jié)合并抑制轉(zhuǎn)錄。 衰減子減弱轉(zhuǎn)錄。8 真核生物基因表達(dá)各環(huán)節(jié)的基本要素。真核生物基因表達(dá)調(diào)控的環(huán)節(jié)及其主要特征 。答：真核生物基因表達(dá)共有 7 個(gè)環(huán)節(jié)： 轉(zhuǎn)錄起始。 RNA 聚合酶在轉(zhuǎn)錄

20、因子幫助下識(shí)別和結(jié)合啟動(dòng)子，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物。 RNA 延伸。 RNA 聚合酶開始依堿基配對(duì)關(guān)系按模板鏈堿基序列加入核糖核苷酸。 轉(zhuǎn)錄終止。RNA聚合酶I川均有對(duì)應(yīng)的終止信號(hào)，RNA聚合酶H沒有明確中止信號(hào)。 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工。 mRNA前體加工：5'端加帽t 3'端加尾宀剪接宀化學(xué)修飾宀編輯；tRNA前體加工：剪接去除內(nèi)含子t剪切 5'端先導(dǎo)序列t添加或修復(fù) 3'端CCA t化學(xué)修 飾。rRNA前體加工：前體剪接t化學(xué)修飾。 RNA 跨核膜運(yùn)輸。 mRNA 與多種蛋白質(zhì)合成核蛋白顆粒， rRNA 前體在核仁合成并被加 工成熟后，與核糖體蛋白形成核糖體，從胞核運(yùn)

21、到胞質(zhì)。 翻譯。翻譯起始階段：起始復(fù)合物前體形成t起始復(fù)合物前體與mRNA結(jié)合形成起始復(fù)合物t 40亞基一Met tRNA 復(fù)合物沿 mRNA掃描t 40亞基一Met tRNA復(fù)合物識(shí) 別密碼子。延長(zhǎng)階段：氨基酸活化與搬運(yùn)t延長(zhǎng)因子t肽鏈延伸（進(jìn)位、轉(zhuǎn)態(tài)、移位）。終止階段：釋放因子 RF 識(shí)別終止子。 翻譯后加工。肽鏈折疊、肽鏈中氨基酸共價(jià)修飾、肽鏈水解修飾、亞單位聚合。 真核生物基因表達(dá)的調(diào)控是多級(jí)調(diào)控，可發(fā)生在： DNA 水平、轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平、翻譯水平、翻譯后水平。 DNA 水平：基因丟失、基因擴(kuò)增與放大、基因重排、低甲基化、轉(zhuǎn)座與致癌基因的表 達(dá)。 轉(zhuǎn)錄水平：轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成是

22、轉(zhuǎn)錄可調(diào)控環(huán)節(jié)、反式作用因子是真核細(xì)胞重要基 因表達(dá)調(diào)控蛋白、轉(zhuǎn)錄起始是由多種激活的反式作用因子復(fù)合調(diào)控。 轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控： 5'端加帽和 3'端加尾有調(diào)控意義、 mRNA 的選擇剪接可調(diào)控基因表達(dá)、 mRNA 運(yùn)輸控制調(diào)節(jié)進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的 mRNA 量。 翻譯水平：某些 mRNA 翻譯起始可受特定因素調(diào)控、 mRNA 穩(wěn)定性調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成水 平、小分子 mRNA 可調(diào)控翻譯效率。 翻譯后水平：新生肽鏈水解影響蛋白質(zhì)含量、肽鏈中氨基酸共價(jià)修飾是快速調(diào)節(jié)方式、 通過信號(hào)肽分揀、運(yùn)輸、定位影響蛋白質(zhì)功能發(fā)揮。9 蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式及其生物學(xué)意義。 答：蛋白質(zhì)翻譯后需要不同形式的共價(jià)修

23、飾，才能有生物學(xué)活性。 新生肽鏈 N 端的甲硫氨酸在翻譯后被切除。 蛋白前體經(jīng)酶切修飾，激活成為功能蛋白質(zhì)。 磷酸化-去磷酸化修飾，決定磷蛋白的活性狀態(tài)。 糖基化修飾，包括 N糖基化和0糖基化，是許多真核蛋白質(zhì)產(chǎn)生生物學(xué)活性必要條件。 脂?；揎?，使特定蛋白質(zhì)定位于膜的周邊。 乙?；?去乙?；揎?，可調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的活性。 二硫鍵的形成，使蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。 金屬離子的結(jié)合，通常是酶活性中心的必需部分，參與酶的催化作用。 蛋白質(zhì)異常修飾，與疾病密切相關(guān)。如：組蛋白乙?；惓Ｅc腫瘤密切相關(guān)。10蛋白質(zhì)分子在細(xì)胞內(nèi)降解的決定性因素、降解途徑。答：蛋白質(zhì)分子在細(xì)胞內(nèi)的降解取決于其末端和內(nèi)部序列。N

24、末端有選擇性降解信號(hào)，即N末端氨基酸，分為去穩(wěn)定殘基和穩(wěn)定殘基，決定著蛋白質(zhì)的半衰期， 有些降解信號(hào)可能是一段保守序列。降解途徑有：溶酶體途徑、特殊細(xì)胞器內(nèi)水解系統(tǒng)、 細(xì)胞膜表面水解體系、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解途徑（ERAD ）、泛素蛋白酶體途徑（UPP）。ERAD和UPP稱為泛素蛋白酶復(fù) 合體途徑。在 UPP途徑中，蛋白質(zhì)降解前要泛素化，然后被26S蛋白酶體降解；在 ERAD途徑中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正確識(shí)別錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)，將其逆向轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞漿，再被泛素一蛋白體酶體系降解。11細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基本概念、 主要途徑、主要特點(diǎn)，G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑基本要素。 答：細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)胞針對(duì)外源信息發(fā)生的細(xì)胞應(yīng)答

25、反應(yīng)全過程，即細(xì)胞識(shí)別各種外來理化信號(hào)，將其轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞內(nèi)各種分子活性的變化，從而改變細(xì)胞內(nèi)某些代謝過程、影響細(xì)胞生長(zhǎng)速度甚至誘導(dǎo)死亡的過程。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)主要途徑：G蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑：腺苷酸環(huán)化酶途徑，IP3、Ca 2+-鈣調(diào)蛋白激酶途徑，DG-蛋白激酶C途徑。酪氨酸蛋白激酶介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 核受體及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。鳥苷酸環(huán)化酶信號(hào)途徑。G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑基本模式：配體與受體結(jié)合t受體活化G蛋白t G蛋白激活或抑制效應(yīng)分子t效應(yīng)分子改變第二信使含量與分布t第二信使作用于相應(yīng)靶分子改 變其構(gòu)象，改變細(xì)胞代謝及基因表達(dá)。12細(xì)胞周期基本概念，Cyclin、CDK、CKI的主要種類及

26、其在細(xì)胞周期調(diào)控中的作用。答：細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂完成所經(jīng)歷的一個(gè)有序過程。 包括間期和分裂期，間期包括G1期、S期、G2期；分裂期包括前期、中期、后期、末期。Cyclin種類ABCDE功能S期和G2/M轉(zhuǎn)換G2/MG1期G1/S轉(zhuǎn)換CDK功能CDK1G2/M轉(zhuǎn)換、有絲分裂CDK2G1期、S期、G1/S轉(zhuǎn)換CDK3G1/S轉(zhuǎn)換CDK4Go/ G1轉(zhuǎn)換、G1/S轉(zhuǎn)換CDK5神經(jīng)纖維磷酸化CDK6Go/ G1轉(zhuǎn)換、G1/S轉(zhuǎn)換CDK7CDK2 6活化所需要CDK8轉(zhuǎn)錄CDK9轉(zhuǎn)錄CKIINK4家族功能CIP/KIP 家族功能INK4a(p16)維持細(xì)胞正常生長(zhǎng)必 需、

27、腫瘤抑制、誘導(dǎo) 復(fù)制衰老、抑制端粒 酶活性、抑制細(xì)胞生 長(zhǎng)。P21DNA損傷反應(yīng)時(shí)G1 期停滯、G2/M轉(zhuǎn)換INK4b(p15)誘導(dǎo)復(fù)制衰老、抑制 端粒酶活性、抑制細(xì) 胞生長(zhǎng)。P27G1期停滯、抑癌INK4c(p18)P57生長(zhǎng)發(fā)育中起細(xì)胞增 長(zhǎng)相反作用INK4d(p19)13細(xì)胞凋亡的基本概念、主要功能形態(tài)特征、幾種主要的凋亡誘導(dǎo)信號(hào)通路及其特點(diǎn)。答：細(xì)胞凋亡是機(jī)體細(xì)胞在正常生理或病理狀態(tài)下發(fā)生的一種自發(fā)的程序化死亡過程，其發(fā)生受到機(jī)體嚴(yán)密調(diào)控。形態(tài)特征為細(xì)胞皺縮、胞漿失水濃縮，胞膜完整、泡狀，凋亡后期內(nèi)裹核物質(zhì)和細(xì)胞器形成凋亡小體，核膜完整、核皺縮，染色質(zhì)固縮聚集核膜下、最后裂解為碎片，細(xì)

28、胞器大多完 整、線粒體腫脹、通透性增加、釋放細(xì)胞色素。生物化學(xué)特征為DNA在核小體連接處斷裂形成連續(xù)階梯狀小片段；凋亡相關(guān)蛋白質(zhì)和酶活化；凋亡早期磷脂酰絲氨酸外翻；ATP正常合成并分解供能。細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)信號(hào)通路有外源性死亡受體途徑和內(nèi)源性線粒體途徑。前者由死亡受體與相應(yīng)配體結(jié)合組裝 DISK，誘發(fā)caspase 8前體活化，導(dǎo)致下游效應(yīng)者光天蛋白酶活化，切割底物使細(xì)胞凋亡；后者是由于生長(zhǎng)因子不足，細(xì)胞脫離原來環(huán)境或DNA損傷等誘發(fā)，由Bel2家族中促凋亡因子使細(xì)胞色素C從線粒體釋放入胞漿， 與Apafl、ATP/dATP形成凋亡體，凋亡體活化caspase 9前體，caspase 9下游途徑與

29、死亡受體途徑相同。14原癌基因的概念、分類、激活機(jī)制，抑癌基因的基本概念、常見抑癌基因的基本功能。 答：原癌基因，指存在于細(xì)胞內(nèi)，正常情況下不激活，與細(xì)胞增殖相關(guān)，是維持機(jī)體正常生 命活動(dòng)所必須的，在進(jìn)化上高等保守的序列。當(dāng)原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異，基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時(shí)，使細(xì)胞過度增殖，從而形成腫瘤。原癌基因按生化功能分為三類：蛋白激酶類生長(zhǎng)因子， G蛋白、及與其活性相關(guān)的蛋白質(zhì)，核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子?；罨瘷C(jī)制有5種：點(diǎn)突變，基因擴(kuò)增，基因重排，染色體易位，病毒基因 啟動(dòng)子及增強(qiáng)子的插入。抑癌基因是一類抑制細(xì)胞增生，從而抑制腫瘤形成的隱性基因。抑癌基因功能：RB和p53基因調(diào)節(jié)細(xì)胞周期關(guān)卡，

30、抑癌基因通過調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而 抑制細(xì)胞生長(zhǎng)， DNA修復(fù)基因維持基因組穩(wěn)定。15重組DNA技術(shù)中常用工具酶的 主要特點(diǎn)和用途，RE的命名、分類及其活性影響因素。 答：基因克隆中最主要的工具酶有： 限制性核酸內(nèi)切酶，用于切割DNA，識(shí)別雙鏈DNA分子內(nèi)部特異位點(diǎn)裂解磷酸二酯鍵。 DNA聚合酶，用于合成 DNA。逆轉(zhuǎn)錄酶，以 RNA為模板合成cDNA。 T4 DNA連接酶，催化DNA片斷連接。堿性磷酸酶，去除核酸末端磷酸。限制酶第一個(gè)字母 （大寫，斜體 ）代表該酶的微生物 （寄主菌 ）屬名；第 2、3 個(gè)字母 （小寫，斜 體） 代表微生物種名。接下來的字母代表寄主菌的株或型。如果從一種菌株中發(fā)現(xiàn)了幾

31、種限 制酶，則根據(jù)發(fā)現(xiàn)和分離的順序用羅馬字母表示。16 基因工程載體基本概念、基本條件，基因工程常用載體的特點(diǎn)及主要用途。 答：載體：攜帶靶 DNA 片段（外源 DNA 片段）進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的工具?？寺≥d體：主要用來獲得大量純化的目的 DNA 片段（目的基因） ，以便進(jìn)一步研究其 結(jié)構(gòu)和功能。表達(dá)載體：主要用來產(chǎn)生插入基因和mRNA，進(jìn)而合成相關(guān)蛋白質(zhì)。載體基本條件： 能自主復(fù)制； 具備篩選標(biāo)記； 適當(dāng)大小的分子量和適當(dāng)限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)；在細(xì)胞中拷貝數(shù)高； 應(yīng)配備有與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)子、前導(dǎo)順序、加尾信號(hào)、增強(qiáng)子等調(diào)控DNA元件常用的載體：質(zhì)粒、噬菌體、病毒載體等 質(zhì)粒載體

32、。用途：保存和擴(kuò)增片段小于2kb的DNA、構(gòu)建cDNA文庫(kù)、目的DNA測(cè)序、制備探針。 特點(diǎn)：分子量較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在；具有多個(gè)遺傳標(biāo)志，能對(duì)宿主細(xì)胞 選擇；具有多個(gè)限制性內(nèi)切酶單一切點(diǎn)，便于外源基因插入。缺點(diǎn)：所能接受的 DNA 片段容量??；轉(zhuǎn)化效率低。 噬菌體載體，包括插入型載體和置換型載體。用途：重要的基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)克隆載體。 優(yōu)點(diǎn)：能攜帶的外源 DNA 片段更長(zhǎng)，感染能力也大于質(zhì)粒載體。缺點(diǎn)：進(jìn)行真 核基因組文庫(kù)構(gòu)建時(shí)，其容量仍然受到一定的限制。 粘粒載體。用途：根據(jù)載體攜帶的抗藥性標(biāo)記篩選陽性克隆細(xì)胞株。特點(diǎn)：含質(zhì)?？顾幮詷?biāo)記和自主復(fù)制成分， 可在細(xì)菌內(nèi)大量擴(kuò)增；帶粘

33、性末端區(qū)，可體外包裝；有多個(gè)限制性 內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)；本身不大；重組體的本底很低，有利于篩選。 BAC。特點(diǎn)：與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒載體相似，但有不同的 ori和編碼ori蛋白的F因子、可容納大 于300kb的外源DNA、重組子可通過電脈沖穿孔高效導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞、 進(jìn)入細(xì)胞的拷貝數(shù)低。 YAC。用途：人類基因組計(jì)劃中作物理圖的工具。優(yōu)點(diǎn)：酵母是真核細(xì)胞能克隆真核基因序列尤其是重復(fù)序列、能克隆很大的 DNA 片段（ 2Mb ）。 缺點(diǎn)：轉(zhuǎn)化效率低，形成的克 隆數(shù)少，每個(gè)細(xì)胞僅含一個(gè)拷貝。17 真核生物基因轉(zhuǎn)染的常用方法及其原理。答：磷酸鈣共沉淀法。 將外源DNA或重組質(zhì)粒DNA與CaCl2溶液混合后形成 DNA

34、-磷酸 鈣微小顆粒加入到宿主細(xì)胞培養(yǎng)基，顆粒沉淀到細(xì)胞表面被宿主攝取，將DNA 導(dǎo)入細(xì)胞。 電穿孔法。將外源DNA與宿主細(xì)胞混合于電穿孔杯中，在高頻電流作用下，細(xì)胞膜出現(xiàn)很多小孔，使外源DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞。 DEAE葡聚糖法。將外源 DNA或重組質(zhì)粒DNA與 DEAE葡聚糖混合，DEAE葡聚糖帶大量正 電荷化學(xué)基團(tuán)，可與DNA帶負(fù)電荷磷酸基團(tuán)結(jié)合，黏附于細(xì)胞表面，借助細(xì)胞內(nèi)吞過程促進(jìn) 外援DNA進(jìn)入細(xì)胞。 脂質(zhì)體。陽離子脂質(zhì)體試劑與 DNA昆合后形成穩(wěn)定脂質(zhì)雙層復(fù)合物，加入培養(yǎng)細(xì)胞，脂質(zhì)體可直接與細(xì)胞融合，DNA被釋放到胞漿。 顯微注射法。將外源基因通過毛細(xì)玻璃管在顯微鏡下直接注射到受精卵的細(xì)

35、胞核。18 PCR技術(shù)的基本原理、反應(yīng)體系構(gòu)成 及其優(yōu)化，PCR優(yōu)化的條件，主要應(yīng)用。答：PCR是在試管中進(jìn)行的 DNA復(fù)制反應(yīng)，是以擬擴(kuò)增的 DNA分子為模板，以一對(duì)分別 與模板5'端和3'端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶作用下，按半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，反復(fù)重復(fù)這一過程，可使目的DNA片段得到擴(kuò)增。參與PCR反應(yīng)體系的因素：模板核酸；引物；緩沖液 Tag DNA聚合酶； Mg 2 +;dNTP ;反應(yīng)溫度與循環(huán)次數(shù)； PCR儀等。應(yīng)用：目的基因克隆，基因體外突變，DNA微量分析mRNA含量分析?？蓱?yīng)用于遺傳病的基因診斷；腫瘤的診斷、轉(zhuǎn)

36、移確定；組織器官移植的配型選擇等等。優(yōu)化條件：Mg2+ 降低濃度阻止非特異和不想要的PCR產(chǎn)物。增加濃度贏得更多的產(chǎn)量。EDTA螯合Mg2+，因而可以改變 Mg2+的濃度。 DNA模板濃度為了減少 Taq DNA聚合酶的產(chǎn)生錯(cuò)誤的可能性，使用更高濃度的 DNA。但是使用太多可能增加污染物的量，降低反應(yīng)效率。 聚合酶與Pfx相比較，TaqDNA聚合酶具有更高的錯(cuò)配率（沒有可以進(jìn)行校正的 3到5'外切酶活性）。如果需要高保真度，可以使用Pfx。Taq酶傾向在3'末端增加非模板的 A.為了提高效率，可以額外增加酶的量（由于Taq酶可能在重復(fù)的循環(huán)中損耗），然而這可能增加非特異的PCR產(chǎn)物. dNTP 可以使用高達(dá) 1.5mM dNTP。dNTP螯合Mg；：'。過高dNTP可能增加錯(cuò)配率。降 低dNTP的濃度（10-50 M）可以減少錯(cuò)配率。大 PCR片段比小的片段要求更多的 dNTP。 引物一可以使用高達(dá) 3M的引物。高引物模板比可能導(dǎo)致非特異擴(kuò)增和引物二聚體的形 成。小批量分裝儲(chǔ)存引物，以避免多次反復(fù)凍融。 熱循環(huán)一如果模板 GC含量高，