生物分離工程期末復(fù)習(xí)題

1、填空題1. .根據(jù)吸附劑與吸附質(zhì)之間存在的吸附力性質(zhì)的不同，可將吸附分為 物理吸附 、 化學(xué)吸附 和 交換 吸附；2. 比表面積 和 孔徑 是評價吸附劑性能的主要參數(shù)。3. 層析操作必須具有 固定 相和 流動 相。4. 溶質(zhì)的分配系數(shù)大，則在固定相上存在的幾率 大 ，隨流動相的移動速度 小 。5. 層析柱的理論板數(shù)越 多 ，則溶質(zhì)的分離度越 大 。6. 兩種溶質(zhì)的分配系數(shù)相差越 小 ，需要的越多的理論板數(shù)才能獲得較大的分離度。7. 影響吸附的主要因素有 吸附質(zhì)的性質(zhì) ， 溫度 ， 溶液pH值 ， 鹽的濃度 和 吸附物的濃度與吸附劑的用量 ；8. 離子交換樹脂由 網(wǎng)絡(luò)骨架 （載體） ， 聯(lián)結(jié)骨架

2、上的功能基團 （活性基） 和 可交換離子 組成。9. 電泳用凝膠制備時，過硫酸銨的作用是 引發(fā)劑（ 提供催化丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所必需的自由基） ；甲叉雙丙烯酰胺的作用是 交聯(lián)劑（丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺催化劑的作用下聚合而成的含酰胺基側(cè)鏈的脂肪族長鏈） ；TEMED的作用是 增速劑 （催化過硫酸胺形成自由基而加速丙烯酰胺和雙丙烯酰胺的聚合 ）；10. 影響鹽析的因素有 溶質(zhì)種類 ， 溶質(zhì)濃度 ， pH 和 溫度 ；11. 在結(jié)晶操作中，工業(yè)上常用的起晶方法有 自然起晶法 ， 刺激起晶法 和 晶種起晶法 ；12. 簡單地說離子交換過程實際上只有 外部擴散 、內(nèi)部擴散 和化學(xué)交換反

3、應(yīng) 三步；13. 在生物制品進行吸附或離子交換分離時，通常遵循Langmuir吸附方程，其形式為14. 反相高效液相色譜的固定相是 疏水性強 的，而流動相是 極性強 的； 15. 等電聚焦電泳法分離不同蛋白質(zhì)的原理是依據(jù)其 等電點 的不同；16. 離子交換分離操作中，常用的洗脫方法有 靜態(tài)洗脫 和 動態(tài)洗脫 ；17. 晶體質(zhì)量主要指 晶體大小 ， 形狀 和 純度 三個方面；18. 親和吸附原理包括 配基固定化 ， 吸附樣品 和 樣品解析 三步；19. 根據(jù)分離機理的不同，色譜法可分為 吸附、離交、親和、凝膠過濾色譜 20. 蛋白質(zhì)分離常用的色譜法有 免疫親和色譜法， 疏水作用色譜法 ， 金屬螯

4、合色譜法 和 共價作用色譜法 ；21. SDS-PAGE電泳制膠時，加入十二烷基磺酸鈉（SDS）的目的是消除各種待分離蛋白的 分子形狀 和 電荷 差異，而將 分子量 作為分離的依據(jù)；加入二硫叔糖醇的目的是 強還原劑，破壞半胱氨酸間的二硫鍵 ；22. 影響親和吸附的因素有 配基濃度 、 空間位阻 、 配基與載體的結(jié)合位點 、 微環(huán)境 和 載體孔徑 ；23. 陽離子交換樹脂按照活性基團分類，可分為 強酸性陽離子交換樹脂 、 弱酸性 和 中強酸性 ；其典型的活性基團分別有 、 、；24. 陰離子交換樹脂按照活性基團分類，可分為強堿性、 弱堿性 和 中強堿性 ；其典型的活性基團分別有、兼有以上兩種基團

5、；25. 影響離子交換選擇性的因素有 離子水合半徑 、 離子價 、 離子強度 、 溶液pH，溫度 、溶液濃度 、 攪拌速率 、和 交聯(lián)度、膨脹度、顆粒大小 ；26. 離子交換操作一般分為 靜態(tài) 和 動態(tài) 兩種；27. 依據(jù)電泳原理，現(xiàn)有電泳分離系統(tǒng)可分為 移動界面電泳、 區(qū)帶電泳 和穩(wěn)態(tài)電泳 ；28. 雙相電泳中，第一相是 等電聚焦 ；第二相是 SDS-PAGE ；29. 結(jié)晶包括三個過程 過飽和溶液的形成 、 晶核的形成 和 晶體生長 ；30. 過飽和溶液的形成方法有 熱飽和溶液冷卻 、 部分溶劑蒸發(fā) 、 真空蒸發(fā)冷卻法、 化學(xué)反應(yīng)結(jié)晶法 和 鹽析法 ；31. 晶核自動形成時，體系總的吉布斯

6、自由能的改變G由 表面過剩吉布斯自由能GS和 體積過剩吉布斯自由能GV 組成；32. 基本的離子交換過程由 外部擴散 、 內(nèi)部擴散 和 化學(xué)交換 組成；33. 吸附包括 將待分離的料液通入吸附劑中 ， 吸附質(zhì)被吸附到吸附劑表面 ，料液流出 和 解吸 四個過程組成；34. 大孔網(wǎng)狀吸附劑有 非極性 ， 中等極性 和 極性 三種主要類型；35. 親和吸附劑表面連接的“手臂鏈”的作用是 降低空間位阻的影響 ；36. 分子篩色譜（凝膠色譜）的主要應(yīng)用是 脫鹽 、 生物大分子的分離 ；37. 電泳系統(tǒng)的基本組成有 電泳槽 、 電源 、 灌膠模具 、 外循環(huán)恒溫系統(tǒng) 、 凝膠干燥器 、 電泳轉(zhuǎn)移裝置 、

7、電泳洗脫儀 和 凝膠掃描和攝錄裝置；38. 電泳后，樣品的主要染色方法有 考馬斯亮藍 和 銀染法 ；39. 電泳過程中，加入溴酚蘭的目的是 指示蛋白的遷移位置 ；40. 固體可分為 晶體 和 無定形固體 兩種狀態(tài)；41. 結(jié)晶的前提是 溶液達到過飽和狀態(tài) ；結(jié)晶的推動力是 過飽和度 ；42. 根據(jù)晶體生長擴散學(xué)說，晶體的生長包括 溶質(zhì)通過擴散作用穿過靠近晶體表面的一個滯流層，從溶液中轉(zhuǎn)移到晶體的表面 、 到達晶體表面的溶質(zhì)長入晶面，使晶體增大，同時放出結(jié)晶熱 和 結(jié)晶熱傳遞回到溶液中 三個過程；43. 影響晶體生長的主要因素有 雜質(zhì) 、 攪拌 和 溫度 ；44. IEC操作多采用 線性梯度 洗

8、脫和 逐次 洗脫。45. HIC（疏水性相互作用層析）主要采用 降低 流動相離子強度的線性梯度洗脫法和逐次洗脫法；IEC（離子交換層析）主要采用 增加 流動相離子強度的線性梯度洗脫法和逐次洗脫法。46. 由于溫度升高使分子和原子的熱運動加劇，結(jié)合部位的靜電作用、氫鍵及金屬配位鍵的作用會 減弱 ，疏水性相互作用會 增強 。47. 電泳是 荷電（電解質(zhì)） 溶質(zhì)在 電場 作用下，發(fā)生定向泳動的現(xiàn)象。48. 電泳分離是利用 電解質(zhì) 在電場中 泳動速度 的差別進行分離的。49. 親和層析的洗脫方法有 特異性洗脫 法和 非特異性洗脫 法。50. 荷電溶質(zhì)在電場中受到 電場 力和 黏性阻 力的作用。51.

9、不連續(xù)凝膠電泳的凝膠層由 濃縮 層和 分離 層組成。52. 不連續(xù)凝膠電泳的上層起 濃縮 作用，下層起 分離 作用。 53. 當(dāng)微小晶體的半徑時，則微小晶體會 自動溶解 ；當(dāng)微小晶體的半徑時，則微小晶體會 自動生長 。53. 結(jié)晶是從液相或氣相中生成 形狀一定 、 分子（或原子、離子）有規(guī)則排列 的晶體的現(xiàn)象。54. 結(jié)晶是內(nèi)部結(jié)構(gòu)的質(zhì)點元作 三維有序規(guī)則 排列的形狀一定的固體粒子，而沉淀是 無規(guī)則 排列的無定形的粒子。 55. 離子交換操作一般分為 和 兩種； 56離子交換分離操作中，常用的洗脫方法有（pH梯度） 和（離子強度（鹽）梯度）。57. 簡單地說，離子交換過程實際上只有（外部擴散）

10、，（內(nèi)部擴散）和（化學(xué)交換反應(yīng)） 三步；58. 離子交換操作一般分為（動態(tài)）和（靜態(tài)）兩種；59. 根據(jù)晶體生長擴散學(xué)說，晶體的生長包括（溶質(zhì)借擴散作用從溶液中轉(zhuǎn)移到晶體的表面）、（溶質(zhì)長入晶面放出結(jié)晶熱）和（結(jié)晶熱傳遞回到溶液中）三個過程；60. 影響晶體生長速度的主要因素有（雜質(zhì)）、（攪拌）、（過飽和度）和（溫度）。選擇題1. 凝膠過濾層析中，流動相的線速度與HETP 關(guān)系。 A.無 B.線性減少 C. 線性增加 D. 對數(shù)2. GFC中溶質(zhì)的分配系數(shù)在分級范圍內(nèi)隨相對分子質(zhì)量的對數(shù)值增大而 。 A.線性增大 B.線性減少 C.急劇增大 D.急劇減少3. 凝膠的分級范圍越小，則分離度 。

11、A.越大 B.越小 C.小于1 D.小于04. 線性梯度洗脫過程中，流動相的離子強度線性增大，因此，溶質(zhì)的 連續(xù)降低，移動速度逐漸增大。 A.溶解度 B.擴散系數(shù) C.分配系數(shù) D.分離度5. 逐次洗脫過程中，流動相的離子強度階躍增大，溶質(zhì)的分配系數(shù) 降低。 A.逐漸 B.階段式 C.線性 D.急劇6. 當(dāng)吸附操作達到穿透點時，應(yīng) B 操作。 A.繼續(xù)吸附 B.停止吸附 C.停止再生 D.停止洗脫7. 離子交換的分配系數(shù)與離子濃度呈 D 關(guān)系。 A.線性增加 B.線性減少 C.指數(shù)增加 D.指數(shù)減少8. 凝膠過濾層析中，流動相的線速度與HETP成 C 關(guān)系。 A.無 B.線性減少 C.線性增加

12、 D.對數(shù)9.GFC中溶質(zhì)的分配系數(shù)在分級范圍內(nèi)隨相對分子質(zhì)量的對數(shù)值增大而 B 。 A.線性增大 B.線性減少 C.急劇增大 D.急劇減少10. 凝膠的分級范圍越小，則分離度 A 。 A.越大 B.越小 C.小于1 D.小于011. 如果親和作用主要源于靜電引力，提高離子強度會 D 親和作用。 A.增加 B.減弱 C.不影響 D.減弱或完全破壞12. 如果親和作用以氫鍵為主，提高離子強度會 D 親和作用。 A.增加 B.減弱 C.不影響 D.降低或消除13. 當(dāng)親和作用以疏水性相互作用時，提高離子強度會 A 親和作用。 A.增加 B.減弱 C.無影響 D.完全破壞14. 在親和分離操作中，許

13、多親和吸附的目標(biāo)蛋白質(zhì)用高濃度的鹽溶液洗脫，說明 D 在親和作用中占主要地位。 A.疏水性相互作用 B.配位鍵 C.非共價鍵 D.靜電力15. C 的存在可以抑制氫鍵的形成。 A.氧原子 B.氮原子 C.尿素和鹽酸胍 D.NaCl16. 電泳分離的機理是 B 分離過程。 A.液液相平衡 B.速率 C.分配平衡 D.篩分17. 凝膠電泳時利用 D 使分子大小不同的電解質(zhì)分離的。 A.靜電作用 B.親水作用 C.疏水作用 D.分子篩作用18. 電解質(zhì)溶質(zhì)的遷移率是 C 下的泳動速度。 A.單位時間 B.單位溶質(zhì)質(zhì)量 C.單位電場強度 D.單位靜電引力19. 結(jié)晶是利用溶質(zhì)之間 C 差別進行分離純化

14、的一種擴散分離操作。 A.濃度 B.靜電引力 C.溶解度 D.擴散系數(shù)20. 若親和結(jié)合作用源于親和分子與金屬離子形成的配位鍵，則加入 可使親和結(jié)合作用消滅。 A.NaCl B.硅酸銨 C.EDTA（乙二胺四乙酸） D.SDS21. 微小晶體的溶解度 B 普遍大顆粒晶體的溶解度。 A.低于 B.高于 C.接近 D.等于22.線性梯度洗脫過程中，流動相的離子強度線性增大，因此，溶質(zhì)的 C 連續(xù)降低，移動速度逐漸增大。 A.溶解度 B.擴散系數(shù) C.分配系數(shù) D.分離度23.逐次洗脫過程中，流動相的離子強度階躍增大，溶質(zhì)的分配系數(shù) B 降低。 A.逐漸 B.階段式 C.線性 D.急劇24. 具有親

15、和作用的分子（物質(zhì)）對之間具有“鑰匙”和“鎖孔”的關(guān)系是產(chǎn)生親和結(jié)合作用的 C 。 A.充分條件 B.充要條件 C.必要條件 D.假設(shè)條件25. 若親和結(jié)合作用源于親和分子與金屬離子形成的配位鍵，則加入 C 可使親和結(jié)合作用消滅。 A.NaCl B.硅酸銨 C.EDTA（乙二胺四乙酸） D.SDS26、結(jié)晶過程具有很好的（ ）。 A自范性 B均勻性 C選擇性 D各向異性27、晶體具有自發(fā)地生長為多面體的可能性，此性質(zhì)稱為晶體的（ ）。 A自范性 B均勻性 C選擇性 D各向異性28、離子交換樹脂對不同離子親和能力的差別，表現(xiàn)在（ ）的大小。 A離子價數(shù) B溶液濃度 C離子水化半徑 D選擇性系數(shù)2

16、9、離子交換反應(yīng)的速度主要取決于（ ）。 A離子大小 B溶液濃度 C交聯(lián)度 D擴散速度30、一般用分離度R =（ ）作為相鄰兩色譜峰完全分離的標(biāo)志。 A0.9 B1.2 C1.5 D1.831、下列離子交換劑中，離子交換（ ）并不適合用于生物大分子的分離。 A樹脂 B纖維素 C葡聚糖凝膠 D瓊脂糖凝膠32、（ ）的效率是所有分離純化技術(shù)中最高的。 A溶劑萃取 B雙水相萃取 C膜分離 D色譜分離33、工業(yè)規(guī)模的色譜分離大多采用（ ）分離法。 A柱色譜 B紙上色譜 C薄層色譜 D平板色譜34、選擇HPLC方法時首先要考慮的是樣品的（ ）。 A分子結(jié)構(gòu) B分子大小 C等電點 D溶解度 35. 利用硅

17、膠做固定相進行吸附柱層析，下列哪種溶劑的洗脫能力最弱（ ）A.水 B.乙醇 C.氯仿 D.乙酸乙酯36. 下列哪種離子與DEAE-纖維素（Cl型）的親和力最大（ ）A F- B. Cl- C. Br- D. I-37. 下列分離技術(shù)中，不能用于去離子水制備的方法有（ ）A. 離子交換柱層析 B. 膜蒸餾 C. 滲透蒸發(fā) D.電滲析38. 根據(jù)物質(zhì)極性大小不同分離的方法是（ ）A. 吸附層析 B. 離子交換層析 C. 凝膠層析 D.親和層析39. 吸附作用是指物質(zhì)從    濃縮到固體表面的過程。A、 液體     

18、B氣體    C流體 D.固體40. 下列哪種離子交換樹脂適宜制備軟水（ ）A. RSO3Na B. RSO3H C. RCOOH D. RCOONa41. 在凝膠過濾（分離范圍是5000400000）中，下列哪種蛋白質(zhì)最先被洗脫下來（ ）。A、細胞色素C（13370） B、肌球蛋白（400000）C、過氧化氫酶（247500） D、血清清蛋白（68500）42. 下列關(guān)于正相色譜與反相色譜說法正確的是（ ）。A. 正相色譜是指固定相的極性低于流動相的極性 B 正相色譜層析過程中非極性分子或極性小的分子比極性大的分子移動的速度慢 C. 反相色譜是指固定相的極性低于

19、流動相的極性 D. 反相色譜層析過程中，極性大的分子比極性小的分子移動的速度慢43. 下列分離技術(shù)中，不能作為蛋白質(zhì)溶液中的無機鹽離子去除的方法是（ ）A. 離子交換柱層析 B. 透析 C. 超濾 D. 凝膠過濾44HPLC是哪種色譜的簡稱（ C ）。A離子交換色譜 B.氣相色譜 C.高效液相色譜 D.凝膠色譜45針對配基的生物學(xué)特異性的蛋白質(zhì)分離方法是（ C ）。A.凝膠過濾 B.離子交換層析C.親和層析 D.紙層析46下列哪項酶的特性對利用酶作為親和層析固定相的分析工具是必需的？（ B ）A.該酶的活力高B.對底物有高度特異親合性C.酶能被抑制劑抑制D.最適溫度高E.酶具有多個亞基47用于

20、蛋白質(zhì)分離過程中的脫鹽和更換緩沖液的色譜是（ C ）A離子交換色譜 B.親和色譜 C.凝膠過濾色譜 D.反相色譜48蛋白質(zhì)分子量的測定可采用（ C ）方法。A離子交換層析 B.親和層析 C.凝膠層析 D.聚酰胺層析49氨基酸的結(jié)晶純化是根據(jù)氨基酸的（ A ）性質(zhì)。A.溶解度和等電點 B.分子量 C.酸堿性 D.生產(chǎn)方式50離子交換劑不適用于提?。?D ）物質(zhì)。A抗生素 B.氨基酸 C.有機酸 D.蛋白質(zhì)51人血清清蛋白的等電點為4.64，在PH為7的溶液中將血清蛋白質(zhì)溶液通電，清蛋白質(zhì)分子向（A）A ：正極移動；B：負極移動；C：不移動；D：不確定。52凝膠色譜分離的依據(jù)是（ B ）。A、固定

21、相對各物質(zhì)的吸附力不同 B、各物質(zhì)分子大小不同C、各物質(zhì)在流動相和固定相中的分配系數(shù)不同 D、各物質(zhì)與專一分子的親和力不同53依離子價或水化半徑不同，離子交換樹脂對不同離子親和能力不同。樹脂對下列離子親和力排列順序正確的有（ A ）。A、Fe3+Ca2+Na+ B、Na+Ca2+Fe3+C、Na+Rb+Cs+ D、Rb+Cs+Na+54結(jié)晶過程中，溶質(zhì)過飽和度大?。?A ）。A、不僅會影響晶核的形成速度，而且會影響晶體的長大速度 B、只會影響晶核的形成速度，但不會影響晶體的長大速度C、不會影響晶核的形成速度，但會影響晶體的長大速度 D、不會影響晶核的形成速度，而且不會影響晶體的長大速度55離子

22、交換法是應(yīng)用離子交換劑作為吸附劑，通過（ A ）將溶液中帶相反電荷的物質(zhì)吸附在離子交換劑上。A、靜電作用 B、疏水作用 C、氫鍵作用 D、范德華力56陰離子交換劑（ C ）。A、可交換的為陰、陽離子 B、可交換的為蛋白質(zhì) C、可交換的為陰離子 D、可交換的為陽離子57凝膠色譜分離的依據(jù)是（ B ）。A、固定相對各物質(zhì)的吸附力不同 B、各物質(zhì)分子大小不同C、各物質(zhì)在流動相和固定相中的分配系數(shù)不同 D、各物質(zhì)與專一分子的親和力不同58洗脫體積是（ C ）。A、凝膠顆粒之間空隙的總體積 B、溶質(zhì)進入凝膠內(nèi)部的體積C、與該溶質(zhì)保留時間相對應(yīng)的流動相體積 D、溶質(zhì)從柱中流出時所用的流動相體積59 工業(yè)上

23、強酸型和強堿型離子交換樹脂在使用時為了減少酸堿用量且避免設(shè)備腐蝕，一般先將其轉(zhuǎn)變?yōu)椋?B ）。A、鈉型和磺酸型 B、鈉型和氯型C、銨型和磺酸型 D、銨型和氯型60吸附色譜分離的依據(jù)是（ A ）。A、固定相對各物質(zhì)的吸附力不同 B、各物質(zhì)分子大小不同C、各物質(zhì)在流動相和固定相的分配系數(shù)不同 D、各物質(zhì)與專一分子的親和力不同61下面哪一種是根據(jù)酶分子專一性結(jié)合的純化方法（ A ）。A. 親和層析 B. 凝膠層析 C. 離子交換層析 D. 鹽析62結(jié)晶過程中，溶質(zhì)過飽和度大小（ A ）A、不僅會影響晶核的形成速度，而且會影響晶體的長大速度B、只會影響晶核的形成速度，但不會影響晶體的長大速度C、不會影

24、響晶核的形成速度，但會影響晶體的長大速度D、不會影響晶核的形成速度，而且不會影響晶體的長大速度63下列哪項不是蛋白質(zhì)的濃度測定的方法（ D ）。A、凱氏定氮法 B.雙縮脲法 C.福林-酚法 D.核磁共振64吸附劑和吸附質(zhì)之間作用力是通過（ A ）產(chǎn)生的吸附稱為物理吸附。A. 范德華力 B庫倫力 C.靜電引力 D.相互結(jié)合65羧酸型離子交換樹脂必須在（ C ）的溶液中才有交換能力A. pH5 B pH7 C. pH7 D. pH566離子交換樹脂適用（ B ）進行溶脹A.水 B乙醇 C.氫氧化鈉 D.鹽酸67分子篩層析指的是（ C ）A. 吸附層析 B分配層析 C. 凝膠過濾 D. 親和層析68

25、對于吸附的強弱描述錯誤的是（ A ）A. 吸附現(xiàn)象與兩相界面張力的降低成反比 B某物質(zhì)自溶液中被吸附程度與其在溶液中的溶解度成正比 C. 極性吸附劑容易吸附極性物質(zhì) D. 非極性吸附劑容易吸附非極性物質(zhì)69離子交換用的層析柱直徑和柱長比一般為（ B ）之間A. 1：10-1：20 B. 1：10-1：50 C. 1：10-1：30 D. 1：20-1：5070通過改變pH值從而使與離子交換劑結(jié)合的各個組分被洗脫下來，可使用（ A ）A. 陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫 B陽離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫 C. 陰離子交換劑一般是pH值從低到高 D. 以上都不對71疏水親和吸附層析通常

26、在（ D ）的條件下進行A.酸性 B堿性 C.中 D. 高濃度鹽溶液72氣相色譜的載氣不能用（ C ）A. 氫氣 B氦氣 C.氧氣 D. 氮氣73關(guān)于電泳分離中遷移率描述正確的是（ A ）A.帶電分子所帶凈電荷成正比 B分子的大小成正比 C. 緩沖液的黏度成正比 D.以上都不對74在什么情況下得到粗大而有規(guī)則的晶體（ A ）A. 晶體生長速度大大超過晶核生成速度 B晶體生長速度大大低于過晶核生成速度 C. 晶體生長速度等于晶核生成速度 D.以上都不對75 人血清清蛋白的等電點為4.64，在PH為7的溶液中將血清蛋白質(zhì)溶液通電，清蛋白質(zhì)分子向（A）A ：正極移動；B：負極移動；C：不移動；D：不

27、確定。76關(guān)于疏水柱層析的操作錯誤( D )A疏水層析柱裝柱完畢后，通常要用含有高鹽濃度的緩沖液進行平衡 B疏水層析是利用蛋白質(zhì)與疏水性吸附劑之間的弱疏水性相互作用的差別進行分離純化的層析技術(shù) C洗脫后的層析柱再生處理，可用8mol/L尿素溶液或含8mol/L尿素的緩沖溶液洗滌，然后用平衡緩沖液平衡D疏水柱層析分辨率很高、流速慢、加樣量小77結(jié)晶法對溶劑選擇的原則是（ C ）A、對有效成分溶解度大，對雜質(zhì)溶解度小 B、對有效成分溶解度小，對雜質(zhì)溶解度大 C、對有效成分熱時溶解度大冷時溶解度小，對雜質(zhì)冷熱都溶或都不溶 D、對有效成分冷熱時都溶，對雜質(zhì)則不溶 E、對雜質(zhì)熱時溶解度大，冷時溶解度小7

28、8網(wǎng)格高聚物吸附劑吸附的弱酸性物質(zhì)， 一般用下列哪種溶液洗脫。 （ D ） A.水 B.高鹽 C.低pH D. 高pH79下列哪個不屬于初步純化：( C )A .沉淀法 B. 吸附法 C. 離子交換層析 D. 萃取法80高效液相色譜儀的種類很多，但是無論何種高效液相色譜儀，基本上由（ D ）組成。A 高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、過濾系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)或色譜工作站等五大部分B進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)或色譜工作站四大部分C高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)四大部分D高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)或色譜工作站等五大部分81影響電泳分離的主要因素（ B ）

29、A 光照 B 待分離生物大分子的性質(zhì) C 濕度 D 電泳時間82在凝膠過濾（分離范圍是5000400000）中，下列哪種蛋白質(zhì)最先被洗脫下來（ B ）A細胞色素C（13370）B肌球蛋白（400000）C過氧化氫酶（247500）D血清清蛋白（68500）E肌紅蛋白（16900）83“類似物容易吸附類似物”的原則,一般極性吸附劑適宜于從何種溶劑中吸附極性物質(zhì)（ B ） A極性溶劑 B非極性溶劑 C水 D溶劑84能夠除去發(fā)酵液中鈣、鎂、鐵離子的方法是 （ C ） A 過濾 B 萃取 C 離子交換 D 蒸餾85HPLC是哪種色譜的簡稱（ C ）。A離子交換色譜 B.氣相色譜 C.高效液相色譜 D.

30、凝膠色譜86洗脫體積是（ C ）。A、凝膠顆粒之間空隙的總體積 B、溶質(zhì)進入凝膠內(nèi)部的體積C、與該溶質(zhì)保留時間相對應(yīng)的流動相體積 D、溶質(zhì)從柱中流出時所用的流動相體積87分子篩層析純化酶是根據(jù)（ C ）進行純化。A.根據(jù)酶分子電荷性質(zhì)的純化方法 B.調(diào)節(jié)酶溶解度的方法C.根據(jù)酶分子大小、形狀不同的純化方法 D.根據(jù)酶分子專一性結(jié)合的純化方法88下列哪一項不是陽離子交換樹脂 （ D ）A 氫型 B 鈉型 C 銨型 D 羥型89按分離原理不同，電泳可分為（ A ）A 區(qū)帶電泳、自由界面電泳、等速電泳、等電聚焦電泳 B 紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳C 區(qū)帶電泳、自由界面

31、電泳、紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳D 等速電泳、等電聚焦電泳、瓊脂凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳90在酸性條件下用下列哪種樹脂吸附氨基酸有較大的交換容量 （ C ） A羥型陰 B氯型陰 C氫型陽 D鈉型陽91親和層析的洗脫過程中，在流動相中加入配基的洗脫方法稱作 （ C ）A、 陰性洗脫 B、 劇烈洗脫 C、競爭洗脫 D、非競爭洗脫92活性炭在下列哪種溶劑中吸附能力最強？（ A ） A、水 B、甲醇 C、乙醇 D、三氯甲烷93將配基與可溶性的載體偶聯(lián)后形成載體-配基復(fù)合物，該復(fù)合物可選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合，在一定條件下沉淀出來，此方法稱為 （ A ）A、親和沉淀 B、聚合物沉淀 C、金屬離子沉淀 D、

32、鹽析沉淀94在選用凝膠層析柱時，為了提高分辨率，宜選用的層析柱是 （ A ）A、粗且長的 B、粗且短的 C、細且長的 D、細且短的簡答題1. 為什么凝膠過濾層析通常采用恒定洗脫法？2. GFC與其他層析法比較其特點是什么？3. 為什么IEC（離子交換層析）很小采用恒定洗脫法？4. 線性梯度洗脫法和逐次洗脫法優(yōu)缺點時什么？5. 產(chǎn)生親和作用的充分必要條件是什么？6. 比較特異性洗脫和非特異性洗脫的優(yōu)缺點。7. 蛋白質(zhì)等生物大分子與小分子化合物的離子交換特性的差別？8. 蘭格繆爾的單分子層吸附理論的要點是什么？9. 為什么離子交換需在低離子強度下進行？1、吸附的概念及類型吸附是利用吸附劑對液體或氣

33、體中某一組分具有選擇性吸附的能力，使其富集在吸附劑表面的過程。吸附的類型:物理吸附：吸附劑和吸附物通過分子力（范德華力）產(chǎn)生的吸附;化學(xué)吸附：吸附劑和吸附物之間的電子轉(zhuǎn)移,發(fā)生化學(xué)反應(yīng),形成庫侖力而吸附;交換吸附：吸附劑與吸附物之間發(fā)生離子交換而吸附。2、吸附過程的流程吸附過程:待分離料液與吸附劑混合吸附質(zhì)被吸附到吸附劑表面料液流出吸附質(zhì)解吸回收3、大孔吸附樹脂的吸附規(guī)律大孔網(wǎng)狀吸附樹脂的種類:非極性吸附樹脂;中等極性吸附樹脂;極性吸附劑遵循規(guī)律：非極性吸附劑可從極性溶劑中吸附非極性溶質(zhì);極性吸附劑可從非極性溶劑中吸附極性物質(zhì);中等極性吸附劑兼有以上兩種能力.4、吸附等溫線？當(dāng)固體吸附劑從溶液

34、中吸附溶質(zhì)到達平衡時,其吸附量與溶液組成和溫度有關(guān),當(dāng)溫度一定時，吸附量與濃度之間的函數(shù)關(guān)系稱為吸附等溫線。5、親和吸附的概念？親和技術(shù)在生化分離中的應(yīng)用綜述？親和吸附分離是利用溶質(zhì)和吸附劑之間特殊的化學(xué)作用，從而實現(xiàn)分離。吸附劑由載體(載體通常是惰性的,須先活化然后與配基偶聯(lián))和配位體組成.6、固定床、流化床、膨脹床吸附的特點及區(qū)別？7、離子交換的定義？離子交換是利用離子交換樹脂作為吸附劑，將溶液中的待分離組分，依據(jù)其電荷差異，依靠庫侖力（靜電引力）吸附在樹脂上，然后利用合適的洗脫劑將吸附質(zhì)從樹脂上洗脫下來，達到分離的目的。8、離子交換樹脂的結(jié)構(gòu)組成？具有三維空間立體結(jié)構(gòu)的網(wǎng)絡(luò)骨架;聯(lián)接在骨

35、架上的活性基團活性基團所帶的相反電荷的活性離子（可交換離子）9、離子交換樹脂的預(yù)處理方法、再生及洗脫？離子交換操作方法:樹脂預(yù)處理離子交換吸附洗脫樹脂預(yù)處理方法:物理處理：水洗、過篩，去雜，以獲得粒度均勻的樹脂顆粒；化學(xué)處理：用8-10倍樹脂體積的鹽酸或氫氧化鈉溶液交替攪拌浸泡.陽離子樹脂:酸堿酸;陰離子樹脂:堿酸堿.最后以去離子水或緩沖液平衡洗脫方式:改變?nèi)芤簆H值;改變?nèi)芤弘x子強度樹脂再生是指使離子交換樹脂重新具有交換能力的過程。酸性陽離子樹脂:酸-堿-酸-緩沖溶液淋洗;堿性陰離子樹脂:堿-酸-堿-緩沖溶液淋洗。方式有順流再生和逆流再生。蛋白質(zhì)離子交換分離的基本步驟:平衡,上樣吸附,洗脫,

36、再生第八章 色譜分離1、色譜法的概念色譜分離也稱色譜層析、色譜、色層,是指樣品中各組成依據(jù)其在固定相與流動相之間作用行為的差別進行多次分離的過程。2據(jù)溶質(zhì)分子與固定相相互作用的機理不同而分類的色譜技術(shù)主要有幾種？根據(jù)溶質(zhì)分子與固定相相互作用的機理不同可分為吸附層析法、分配層析法和凝膠過濾法三大類。其中吸附層析法又包含離子交換色層分離法、疏水作用色層分離法、金屬螯合色層分離法和共價作用色層分離法四種。3、各色譜技術(shù)的作用機理？柱色譜；常用柱色譜介質(zhì)分無機物色譜介質(zhì)(氧化鋁、硅膠、活性炭、膨潤土、磷酸鈣(凝膠型和晶型)、氧化鈦和氫氧化鋅凝膠等)和聚合物色譜介質(zhì)(如瓊脂糖、葡聚糖、纖維素和聚丙烯酰胺

37、等)洗脫方法:恒定洗脫法;逐次洗脫法;梯度洗脫法(最常用)紙層析法:是一種常用的快速分離、鑒定方法，可用于定性分析以及確定分離方案，但一般不用于定量分析。介質(zhì):濾紙;固定相:水。操作方法：將試樣溶于適當(dāng)溶劑中，點樣于濾紙的一端；選用適當(dāng)?shù)恼归_劑，借助毛細管現(xiàn)象從點樣的一端向另一端流動，展開結(jié)束后，取下濾紙，晾干，染色顯跡薄層色譜法: 將固定相涂布在惰性固體上，形成薄層進行色譜分離的方法操作要點:鋪板,點樣,點樣量 展開,顯色吸附色譜:指混合物隨流動相通過固定相（吸附劑）時，由于固定相對不同物質(zhì)的吸附力不同而使混合物分離的方法。新的吸附色譜技術(shù)，如疏水作用色譜、金屬螯合作用色譜和共價作用色譜等，

38、所用吸附劑一般為有機基質(zhì)并通過化學(xué)修飾后制成，它們都有比較明確的作用機理，即疏水作用、螯合作用和共價作用。親和色譜(AFC):是將與目的產(chǎn)物具有特異親和力的生物分子固定化后作為固定相從混合物中分離目的產(chǎn)物的過程。親和作用是特殊的吸附作用。過程:載體活化、配基連接、吸附、洗脫分配色譜又稱為液液色譜，其原理是利用混合物中各物質(zhì)在兩液相中的分配系數(shù)不同而分離。要素：固定相、載體、流動相凝膠色譜(見下第5題)9 氣相色譜可分為氣固色譜和氣液色譜.是指用氣體作為流動相的色譜法。系統(tǒng)組成:氣路系統(tǒng);進樣系統(tǒng);分離系統(tǒng);溫控系統(tǒng);檢測記錄系統(tǒng)高效液相色譜(HPLC)與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，

39、小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法.4、柱色譜系統(tǒng)的組成？一般由蠕動泵、色譜柱、檢測器、記錄儀以及部分收集器等幾個部分構(gòu)成。 5、凝膠色譜的定義？凝膠色譜:以一定孔徑的凝膠為固定相，是一種根據(jù)各物質(zhì)分子大小不同而進行分離的色譜技術(shù)，因而又稱為分子篩色譜、空間排阻色譜。凝膠色譜分為兩大類：凝膠過濾色譜和凝膠滲透色譜。 6、阻滯因子(Rf)?阻滯因子是在色譜系統(tǒng)中溶質(zhì)的移動速度和標(biāo)準(zhǔn)物（與固定相沒有親和力的流動相 Kd=0）的遷移率之比 Rf = 電泳是指荷電的膠體粒子在電場中的移動.電泳現(xiàn)象中的表面電勢和雙電層的因素起著決定性的作用。1、帶電粒子在電場中的

40、遷移方式主要依據(jù)哪些因素？帶電粒子在電場中的遷移方式主要依據(jù)分子尺寸大小和形狀、分子所帶電荷或分子的生物學(xué)與化學(xué)特性。2、依據(jù)電泳原理，三種形式的電泳分離系統(tǒng)是什么？常用的是什么？依據(jù)電泳原理，有三種形式的電泳分離系統(tǒng)：移動界面電泳、區(qū)帶電泳、穩(wěn)態(tài)電泳；其中區(qū)帶電泳是目前常用的電泳系統(tǒng)。區(qū)帶電泳中的常用技術(shù)：載體電泳：粉末電泳、紙電泳、凝膠電泳、聚焦電泳；無載體電泳：自由電泳、毛細管電泳凝膠電泳的支持介質(zhì)：聚丙烯酰胺凝膠；瓊脂糖凝膠影響丙烯酰胺聚合的主要因素:引發(fā)劑和增速劑的濃度;系統(tǒng)pH值;溫度;分子氧ABC-聚丙烯酰胺凝膠電泳中的分子篩效應(yīng):凝膠中的大分子分離取決于它的電荷、尺寸和形狀。凝

41、膠的這種用于分離不同尺寸分子的特性是由于它的尺寸篩分能力，這種現(xiàn)象被稱為分子篩效應(yīng)。圖中A，B，C均為陽離子，在直流電場作用下電泳情況示意圖分子量大小依次為MA=MB>MC，所帶電荷量相同QA=QB=QC1、結(jié)晶：溶液中的溶質(zhì)在一定條件下，因分子有規(guī)則的排列而結(jié)合成晶體，晶體的化學(xué)成分均一，具有各種對稱的晶體，其特征為離子和分子在空間晶格的結(jié)點上呈規(guī)則的排列；結(jié)晶的實質(zhì)是指溶質(zhì)自動從過飽和溶液中析出，形成新相的過程2、結(jié)晶的步驟：過飽和溶液的形成；晶核的形成；晶體生長其中，溶液達到過飽和狀態(tài)是結(jié)晶的前提；過飽和度是結(jié)晶的推動力。二. 討論題1. 請結(jié)合圖示簡述凝膠排阻色譜（分子篩）的分離

42、原理；答：凝膠排阻色譜的分離介質(zhì)（填料）具有均勻的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)，其分離原理是具有不同分子量的溶質(zhì)分子，在流經(jīng)柱床是，由于大分子難以進入凝膠內(nèi)部，而從凝膠顆粒之間流出，保留時間短；而小分子溶質(zhì)可以進入凝膠內(nèi)部，由于凝膠多孔結(jié)構(gòu)的阻滯作用，流經(jīng)體積變大，保留時間延長。這樣，分子量不同的溶質(zhì)分子得以分離.2. 繪制結(jié)晶過程中飽和曲線和過飽和曲線圖，并簡述其意義；答：結(jié)晶過程中的飽和溫度曲線和不飽和溫度曲線的簡圖如右圖所示：S-S曲線為飽和溫度曲線，在其下方為穩(wěn)定區(qū)，在該區(qū)域溶液為不飽和溶液，不會自發(fā)結(jié)晶；T-T曲線為過飽和溫度曲線，在其上方為不穩(wěn)定區(qū)，能夠自發(fā)形成結(jié)晶；S-S曲線和T-T曲線之間為亞穩(wěn)定

43、區(qū)，在該區(qū)域，溶液為過飽和溶液，但若無晶種存在，也不能自發(fā)形成晶體3. 何謂親和吸附，有何特點？答：親和吸附是吸附單元操作的一種，它是利用親和吸附劑與目標(biāo)物之間的特殊的化學(xué)作用實現(xiàn)的高效分離手段。親和吸附劑的組成包括：惰性載體、手臂鏈、特異性親和配基。親和吸附的特點是高效、簡便、適用范圍廣、分離速度快、條件溫和，但載體制備難度大，通用性差，成本較高。4. 簡述結(jié)晶過程中晶體形成的條件；答：結(jié)晶過程包括過飽和溶液的形成、晶核的形成及晶體的生長三個過程，其中溶液達到過飽和狀態(tài)是結(jié)晶的前提，過飽和度是結(jié)晶的推動力。5. 試比較常規(guī)聚丙稀酰胺凝膠電泳與SDS PAGE的分離原理；答：常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠

44、電泳和SDS-PAGE均為凝膠電泳的一種。聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)是依據(jù)其電荷（性質(zhì)、荷電量）、分子形狀和分子大?。ǚ肿恿浚┎町悓崿F(xiàn)分離的；SDS-PAGE由于加入了SDS和強還原劑（DTT等），破壞了蛋白質(zhì)分子的高級（二級、三級、四級）結(jié)構(gòu)，并與蛋白質(zhì)形成荷大量負電荷的聚合物，消除了不同蛋白質(zhì)分子電荷及分子形狀差異，而僅將分子量差異作為分離依據(jù)，常用于測定未知蛋白質(zhì)的亞基分子量。6. 何謂色譜的理論塔板數(shù)，如何計算？答：理論塔板數(shù)反應(yīng)不同時刻溶質(zhì)在色譜柱中的分布以及分離度與柱高之間的關(guān)系。 N-理論塔板數(shù) tR-保留時間 W1/2半峰寬 Wb-峰底寬7. 簡述疏水層析的原理，并說明基本操

45、作步驟；答：在載體表面連接上疏水的直鏈碳鏈或其他疏水基團，可以與蛋白質(zhì)的某些疏水基團相互作用，從而實現(xiàn)多組分的分離。在高鹽濃度下，蛋白質(zhì)表面的疏水區(qū)域暴露，固定相表面修飾了一些疏水基團，這樣蛋白質(zhì)的疏水部分即可與固定相發(fā)生較強的疏水相互作用，從而被結(jié)合在固定相表面，而一旦降低流動相的鹽濃度即可實現(xiàn)蛋白質(zhì)的洗脫。8. 結(jié)合SDS PAGE電泳的分離原理說明未知蛋白質(zhì)分子量的測定方法；答：以不同分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白進行SDS-PAGE電泳得到不同標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳遷移率，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后對未知蛋白在相同條件下進行SDS-PAGE電泳，測定遷移率，從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相應(yīng)的分子量。9. 請說明在進行SDS PA

46、GE電泳之前，樣品的處理方法，并解釋其原因；答：樣品處理方法：加入SDS和還原劑DTT. 原因：SDS-PAGE由于加入了SDS和強還原劑，破壞了蛋白質(zhì)分子的高級結(jié)構(gòu)，并與蛋白質(zhì)形成帶大量負電荷的聚合物，消除了不同蛋白質(zhì)分子電荷及分子形狀的差異，而僅將分子量差異作為分離的依據(jù)，常用于測定未知蛋白質(zhì)的亞基分子量。10. 簡述載體兩性電介質(zhì)梯度等電聚焦（IEF）的分離原理；答：在支持介質(zhì)中加入載體兩性電解質(zhì)，通以直流電后在兩極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)和線性的pH梯度，當(dāng)帶電的蛋白質(zhì)分子進入該體系時，便會產(chǎn)生移動，并聚集于相當(dāng)其等電點的位置。11. 離子交換分離單元的基本過程有哪幾部分？答：樣品準(zhǔn)備離子交換劑和層析劑的制備上樣目的蛋白的洗脫洗脫液的鑒定和回收離子交換劑的再生和儲存12. 試比較物理吸附與化學(xué)吸附過程；答：物理吸附吸附劑與吸附質(zhì)之間的作用力是分子間作用力，物理吸附無選擇性，吸附量可因物系不同而相差很多，可在低溫下進行，不需要較高活化能，可以是單分子