[精品]糖化血紅蛋白檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用

1、糖化血紅蛋白檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用糖化血紅蛋白檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用文章編號(hào)：1009-5519 （2007） 15-2286-02 中圖分類號(hào)：r446 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：a糖化血紅蛋白（glycosylated hemoglubin, ghb）是糖尿病診斷 和治療的重耍指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于臨床。近年來(lái)，ghb檢測(cè)方法發(fā)展迅 速，早期檢測(cè)以電泳法、微柱層析法應(yīng)用較廣泛，目前免疫比濁法和 化學(xué)發(fā)光法（ivia法）檢測(cè)已開始在臨床應(yīng)用?，F(xiàn)就ghb的檢測(cè)及 臨床應(yīng)用綜述如下。1 ghb的生物化學(xué)特征成人細(xì)胞中的血紅蛋白（hb）主耍是hbal,占90%以上，hba2占2. 5%,hbf占0. 2%其余為hba3,凡連

2、接有已糖的hbal統(tǒng)稱為ghb。 其中hbal又可分為hbala, hbalb和hbalc。hbalc最多，占ghb總 量的80%。hbalc的0鏈n末端綣氨基酸氨基與葡萄糖醛基通過(guò)非 酶促反應(yīng)而連接；hbalal的n末端可連接1,6 二磷酸果糖；hbala2可與葡萄糖一6磷酸連接。這種hb與糖結(jié)合的形成過(guò)程稱為糖基化 作用，ghb是hba合成化學(xué)修飾的結(jié)果。ghb是在紅細(xì)胞生存期間,hbal與血屮已糖（主要為葡萄糖）緩慢、連續(xù)的非酶促反應(yīng)產(chǎn)物,為hbal合成后化學(xué)修飾的結(jié)果。ghb的形成取決丁血糖濃度和作用 時(shí)間，生成量與血中葡萄糖濃度成正比。2 ghb的檢測(cè)方法2. 1酶法：ghb大多采用

3、hlpc和免疫法測(cè)定。hplc法能測(cè)異常 hb,重復(fù)性良好，但需耍專用儀器且實(shí)驗(yàn)需耍時(shí)間較長(zhǎng)。免疫法采用 自動(dòng)化分析儀，但需要分別測(cè)定總hbt ghbo酶法能克服以上缺陷。 酶法的原理是利用果糖氨基氧化酶（fructosyl amino acid oxidase, faod）將ghb分解，產(chǎn)生果糖氨基酸和h202,經(jīng)過(guò)氧化物酶（pod） 催化ii202與da64反應(yīng)產(chǎn)生綠色，在751 mm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度求得 ghb濃度。本法特點(diǎn)為fa0d只使glib產(chǎn)生果糖基氨基酸，用fdp活化代替 觸酶可以清除干擾,glib中干擾物質(zhì)可用wst-3與glib結(jié)合而去除。 此法精度良好，可同時(shí)測(cè)ghb和hb,

4、不需專門儀器，簡(jiǎn)便快捷,結(jié)果 精確。2.2免疫抑制濁法：ghb檢測(cè)基于免疫抑制比濁法1,應(yīng)用一 種抗血紅蛋口 b鏈糖化氨基末端特異性抗體與標(biāo)木中的ghb作用形 成一種抗原一抗原復(fù)合物，再通過(guò)加入多聚半抗原與剩余的抗血紅蛋 口抗體結(jié)合形成種較穩(wěn)定的多聚半抗原一抗體復(fù)合物2,形成濁 度。反應(yīng)液濁度的變化與標(biāo)木中g(shù)hb的濃度成反比。另采用氤化高鐵 法測(cè)定標(biāo)本屮hb總量，并計(jì)算ghb占hb的百分比。采用免疫抑制比濁法測(cè)定glib,結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，穩(wěn)定 性強(qiáng)，不易受干擾物質(zhì)影響，且方法簡(jiǎn)單快捷，適合全口動(dòng)化儀分析， 易于臨床推廣應(yīng)用，可作為測(cè)定glib的首選方法。2.3化學(xué)發(fā)光法（icia）：

5、icia采用離子捕捉免疫分析法4, 應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)原理，并聯(lián)以熒光標(biāo)記物，通過(guò)連接帶負(fù)電的多陰 離子復(fù)合物，吸附到帶正電的的纖維表面，經(jīng)過(guò)一系列徹底清洗等步 驟后，測(cè)定熒光強(qiáng)度變化率，計(jì)算ghb濃度。icia法采用專用試劑 包和免疫發(fā)光分析儀，其檢測(cè)系統(tǒng)易于規(guī)范和重復(fù)，可減少操作技術(shù) 誤差，檢測(cè)的靈敏度和特異性高，批內(nèi)、批間變異系數(shù)小，回收率達(dá) 98.85%,準(zhǔn)確度高，交叉污染率小于0.01%,影響因素少。免疫比濁 法重復(fù)性較好，但易受脂血、黃疸等樣本因素影響，抗交叉污染較差， 而且要求hb在70-230 g/lz間。微柱層析法由于手工操作步驟繁 瑣，層析吋間和微柱的質(zhì)量不易控制，易產(chǎn)生操作

6、技術(shù)誤差，重復(fù)性 欠佳，因此有條件的實(shí)驗(yàn)室就使用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)ghb,提供更準(zhǔn)確 的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，輔佐臨床的診斷和治療。2. 4乳膠凝集法4：本法是利用抗原抗體反應(yīng)原理直接測(cè)定glib 的百分含量的方法。樣品中總hb和ghb與乳膠有相同的特異性鼠單 克隆抗體的復(fù)合物，此復(fù)合物由于單抗鼠igg抗體而形成凝集，凝集 量隨乳表面固相化的ghb量的不同而異。通過(guò)測(cè)定透射吸光度的變化 來(lái)表示凝集量，與glib百分濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較后，求出樣品中g(shù)lib 的百分含量。本方法把乳膠增強(qiáng)免疫比濁法和自動(dòng)化儀很好的結(jié)合在起，具 有免疫比濁法特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、檢測(cè)靈敏度高、線性范圍寬等優(yōu) 點(diǎn)，以及能進(jìn)行全自動(dòng)大批量

7、測(cè)定的優(yōu)點(diǎn)。測(cè)定ghb的參考范圍為 3.8%5. 8%,與文獻(xiàn)報(bào)告的4.7%6.3%和3. 8%6. 2%接近。該法測(cè) 定ghb受高濃度葡萄糖、高甘油三酯、高膽紅素等物質(zhì)的干擾，紅細(xì) 胞壓積的變化，在絕大部分各種臨床情況下對(duì)測(cè)定結(jié)果沒(méi)有顯著的影 響。該法鑒于具有快速、準(zhǔn)確、精密度高等優(yōu)點(diǎn)，可以使用自動(dòng)化分 析儀的單位推廣使用5。2.5離了交換高效液相色譜分析法：用弱酸性陽(yáng)離了交換樹酯, 在選定低濃度洗脫液的離子強(qiáng)度及ph條件下，由于hb中各組分蛋白 所帶電荷不同而分離。glib兒乎不帶正屯荷，首先被洗脫:ilba帶正 電荷，再用高濃度洗脫液洗lllhba,得到相應(yīng)的hb層析譜，其橫坐 標(biāo)是時(shí)間

8、，縱坐標(biāo)是百分比。glib值是以glib的部分面積在全lib面 積的百分率來(lái)表示，現(xiàn)在都用全自動(dòng)測(cè)定儀來(lái)測(cè)定6如h本tosoii 公司生產(chǎn)的全自動(dòng)ghb分析儀曾應(yīng)用于美國(guó)dcct研究，其離了交換 hplc法是ghb檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)前推出的最新型糖化血紅蛋口分析 儀hlc-723g7o從開機(jī)到報(bào)告第一個(gè)結(jié)果僅需36分鐘，標(biāo)木無(wú)需 前處理，操作維護(hù)都非常方便。2.6金標(biāo)法：目前，glib有iiplc法、免疫比濁法、微柱法、比 色法、親和層析法等多種測(cè)定方法，其中hplc法是公認(rèn)的參考方法， 但因條件的局限，該法不適合臨床常規(guī)開展。免疫比濁法則與hplc 有著良好的相關(guān)性但易于自動(dòng)化分析7,但其隨機(jī)

9、檢測(cè)易受污染。 木法則是應(yīng)用了較獨(dú)特的硼酸親和比色原理，作為公認(rèn)的較為簡(jiǎn)單的 一種方法，其特異性卻較高，weykampe等8報(bào)道該法不受除hbs和 ilbc z外的任何血紅蛋白變杲和降解產(chǎn)物的干擾；同時(shí)本法具有操作 簡(jiǎn)便、實(shí)驗(yàn)快速、試劑穩(wěn)定、無(wú)須特別貴重儀器且結(jié)果可靠等特點(diǎn)。3 ghb的臨床應(yīng)用糖尿病人體內(nèi)高濃度的血葡萄糖可以通過(guò)非酶介導(dǎo)與蛋口質(zhì)的 氨基酸結(jié)合產(chǎn)生糖化蛋白10 o如hb、白蛋白、免疫球蛋白、晶狀體蛋口、神經(jīng)蛋口、膠原脫氧核酸等，均可發(fā)生非酶促糖基化11。血葡萄糖通過(guò)非酶糖化過(guò)程迅速結(jié)合于蛋口質(zhì)堿基上，形成schiff 堿基，在數(shù)小吋內(nèi)schiff堿基即可與血糖濃度成比例地達(dá)到平

10、衡, 隨后，schiff堿基緩慢地經(jīng)化學(xué)重組，形成早期穩(wěn)定的糖化產(chǎn)物。 經(jīng)過(guò)數(shù)周，早期糖化蛋白與血糖達(dá)到平衡。ghb就是血紅蛋口氨基與 葡萄糖生成的早期糖化產(chǎn)物，它的形成程度取決于兩個(gè)因素，一為體 內(nèi)葡萄糖濃度，一為血糖持續(xù)時(shí)間，且與兩者直接成比例。蛋口非酶 糖化改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能與其代謝，產(chǎn)生自由基，造成組織和 血管的損害，是高血糖導(dǎo)致慢性并發(fā)癥，如動(dòng)脈粥樣硬化、血凝、血 栓形成的重要機(jī)制12oghb可以作為糖尿病的病情檢測(cè)和長(zhǎng)期控制良好與否的指標(biāo)，人 體內(nèi)rbc壽命一般為120天，在rbc死亡之前血液中g(shù)hb含量也保持 和對(duì)不變，因此glib水平反映的在檢測(cè)前120天內(nèi)的平均血糖水平

11、, 而與取血時(shí)間、病人是不空腹及是否使用胰島素等因素?zé)o關(guān)，因此是 判定糖尿病長(zhǎng)期控制的良好指標(biāo)。因?yàn)檠堑臏y(cè)定代表即刻的血糖水 平，提示病人當(dāng)時(shí)的身體狀況，并不能作為長(zhǎng)期的血糖病人的評(píng)價(jià)指 標(biāo)。次血糖，尿糖的測(cè)定才能反映瞬間或當(dāng)天的病情，不能說(shuō)明前 一段較長(zhǎng)吋間病情的全貌，而ghb是rbc 120天生命中緩慢持續(xù)進(jìn)行 的一個(gè)非酶催化過(guò)程，反映了 rbc半衰期中的平均血糖水平，glib的 增加不僅可以導(dǎo)致糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展，而且可以加快心、肺、 泌尿等組織器官的硬化及衰老的過(guò)程。目前許多報(bào)告主張把ghb用于妊娠期糖尿病(gdm) 的篩選，診斷及血糖控制的首選標(biāo)準(zhǔn)，其異常與自然流產(chǎn)、胎兒畸形

12、、 早產(chǎn)、巨大兒、妊娠高血壓視網(wǎng)膜病變有關(guān)13。因此對(duì)糖尿病患者， 進(jìn)引糖化血紅蛋白的測(cè)定，可用作糖尿病療效觀察和并發(fā)病預(yù)測(cè)的一 種有價(jià)值的指標(biāo)，并對(duì)早期診斷準(zhǔn)確率更高。ghb血糖對(duì)糖尿病腎?。╠iabeticnephropathy. dn）的發(fā)生也更 一個(gè)重要因素，若ghb控制較理想者，即使病程較長(zhǎng)，也可能不發(fā)生 白蛋白尿。但若ghb控制差，即使病程較短，也難免不發(fā)生dn。因 此，對(duì)于糖尿病病人，定要長(zhǎng)期嚴(yán)格積極控制血糖水平，保持 ghb在一個(gè)較理想的范圍，防止或延緩dn的出現(xiàn)14 o因此，glib作為糖尿病篩選診斷血糖控制、療效考核有效檢 測(cè)指標(biāo)，在臨床中得到了廣泛地使用，目前通常認(rèn)為gl

13、ib測(cè)定的臨床 意義有：（1）糖尿病的篩選普查中有早期指導(dǎo)的價(jià)值，可作為輔作2 型隱性糖尿病的早期診斷指標(biāo)；（2）糖尿病的治療血樣監(jiān)控中可作為 參考治療指標(biāo)；（3）預(yù)測(cè)血管并發(fā)癥15 o其理由有二個(gè)：多種方 法測(cè)定ghb使其準(zhǔn)確性和重復(fù)性得到很大的提高，1993年美國(guó)1 型糖尿病控制及并發(fā)癥試驗(yàn)（diabetes contol and complication trial, dcct）和英國(guó)大規(guī)模的2型糖尿病控制與并發(fā)癥關(guān)系研究（ukpds）中把ghb作為糖尿病控制的一個(gè)觀察指標(biāo)。1996年4月起 在li本ghb被納入老年保健法屮糖尿病篩選的檢查項(xiàng)目。2002年美 國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)（ada）已將其

14、作為監(jiān)測(cè)糖尿病控制的金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)其應(yīng) 用也做出了明確的規(guī)定：即所有糖尿病病人均應(yīng)常規(guī)測(cè)定ghb。其初 診時(shí)測(cè)定結(jié)果為基線時(shí)的代謝狀況。此后的測(cè)定值作為糖尿病長(zhǎng)期治 療控制中的一部分?？刂品€(wěn)定者（giibw7%，每年至少測(cè)定2次， 而對(duì)治療方案變動(dòng)或血糖控制未達(dá)標(biāo)者，則需季度監(jiān)控檢測(cè)。這樣在 提高糖尿病診斷水平、血糖控制、慢性并發(fā)癥的防治中具有十分重要 的應(yīng)用價(jià)值16。參考文獻(xiàn)：1 王玉明，嚴(yán)勇，代瓊仙，等乳酸增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定糖化 血紅蛋j現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2003, 18 （4）： 6.2 krishnamurti u, setlfes mw. glycohemoglobin： a prima

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