檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證

1、檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證檢測檢測系統(tǒng)的方法學(xué)系統(tǒng)的方法學(xué)性能性能驗(yàn)證驗(yàn)證 張朝霞張朝霞 教授教授檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)方法學(xué)評價(jià)方法學(xué)評價(jià)的主要指標(biāo)的主要指標(biāo)，定量試驗(yàn)的性能驗(yàn)證方法。，定量試驗(yàn)的性能驗(yàn)證方法。定性試驗(yàn)定性試驗(yàn)評價(jià)的內(nèi)容和方法評價(jià)的內(nèi)容和方法檢測系統(tǒng)評價(jià)的基本步驟檢測系統(tǒng)評價(jià)的基本步驟檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證1.1.測量誤差：測量誤差：測量結(jié)果測量結(jié)果減去被測量的減去被測量的真值真值的差，簡稱誤差。的差，簡稱誤差。2.2.隨機(jī)誤差：隨機(jī)誤差：測量結(jié)果與在重復(fù)條件下，對同一被測量進(jìn)測量結(jié)果與在重復(fù)條件下，對同一被測量進(jìn)行無限多次測量所得結(jié)果的平均值之差。行無限多次測

2、量所得結(jié)果的平均值之差。3.3.系統(tǒng)誤差：在重復(fù)性條件下，對同一被測量進(jìn)行無限多系統(tǒng)誤差：在重復(fù)性條件下，對同一被測量進(jìn)行無限多次測量所得結(jié)果的平均值與被測量的真值之差稱為系統(tǒng)次測量所得結(jié)果的平均值與被測量的真值之差稱為系統(tǒng)誤差。亦稱為誤差。亦稱為正確度正確度復(fù)習(xí)基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)基礎(chǔ)知識檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證4 4、正確度：檢測結(jié)果離真值的偏移程度、正確度：檢測結(jié)果離真值的偏移程度5 5、精密度：、精密度：表示測量結(jié)果中隨機(jī)誤差大小的程表示測量結(jié)果中隨機(jī)誤差大小的程度。度。6 6、準(zhǔn)確度：、準(zhǔn)確度： 準(zhǔn)確度是測量結(jié)果中準(zhǔn)確度是測量結(jié)果中系統(tǒng)誤差（正確度）系統(tǒng)誤差（正確度）與與隨機(jī)誤差（精密度）隨機(jī)誤差（

3、精密度）的綜合的綜合。檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證定量試驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)試驗(yàn)定量試驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)試驗(yàn)二二. .更改檢測系統(tǒng)的確認(rèn)試驗(yàn)更改檢測系統(tǒng)的確認(rèn)試驗(yàn) 準(zhǔn)確度（準(zhǔn)確度（EP9EP9） 精密度（精密度（EP5EP5） 可報(bào)告范圍（可報(bào)告范圍（EP6-P2EP6-P2） 參考區(qū)間（參考區(qū)間（C28-A2C28-A2） 分析靈敏度（分析靈敏度（ EP17-AEP17-A） 線性范圍（線性范圍（EP6-AEP6-A） 分析特異性分析特異性( (包括干擾物質(zhì)）（包括干擾物質(zhì)）（ EP7-PEP7-P）檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證一一. .未更改檢測系統(tǒng)的驗(yàn)證未更改檢測系統(tǒng)的驗(yàn)證1 1、精密度（批內(nèi)、批間）、精密度（批

4、內(nèi)、批間）2 2、準(zhǔn)確度（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)方法、方法、準(zhǔn)確度（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)方法、方法學(xué)比對）學(xué)比對）3 3、可報(bào)告范圍（驗(yàn)證最大稀釋倍數(shù)）、可報(bào)告范圍（驗(yàn)證最大稀釋倍數(shù)）4 4、參考區(qū)間（檢測、參考區(qū)間（檢測2020個(gè)正常樣本驗(yàn)證）個(gè)正常樣本驗(yàn)證）定量試驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)試驗(yàn)定量試驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)試驗(yàn)檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證精密度評價(jià)精密度評價(jià) 一一 二二 三三第一節(jié) 定量檢測系統(tǒng)的性能評價(jià) 正確度評價(jià)正確度評價(jià)線性范圍和可報(bào)告范圍的評價(jià)線性范圍和可報(bào)告范圍的評價(jià)檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證第8頁測定系統(tǒng)測定系統(tǒng)方法學(xué)方法學(xué)操作程序操作程序校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品儀器儀器試劑配方試劑配方和來源和來源一、測定系統(tǒng)的關(guān)鍵要素一

5、、測定系統(tǒng)的關(guān)鍵要素檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證二、二、評價(jià)的基本步驟評價(jià)的基本步驟 1. 確定方法的質(zhì)量目標(biāo)，總允許誤差確定方法的質(zhì)量目標(biāo)，總允許誤差 2. 選定評價(jià)指標(biāo)選定評價(jià)指標(biāo)有量值溯源的配套檢測系統(tǒng)，有量值溯源的配套檢測系統(tǒng)，正確度、精正確度、精密度、可報(bào)告范圍、參考區(qū)間驗(yàn)證。密度、可報(bào)告范圍、參考區(qū)間驗(yàn)證。 不配套的檢測系統(tǒng)：不配套的檢測系統(tǒng)：線性范圍、回收和干線性范圍、回收和干擾試驗(yàn)擾試驗(yàn) 3. 收集評價(jià)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集評價(jià)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 4. 判斷方法的臨床可接收性判斷方法的臨床可接收性熟悉熟悉檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證三、評價(jià)文件（三、評價(jià)文件（1 1）EP5-AEP5-A：臨床化學(xué)設(shè)備操作精密度評價(jià)：

6、臨床化學(xué)設(shè)備操作精密度評價(jià) 核準(zhǔn)指南核準(zhǔn)指南EP6-AEP6-A：定量分析方法的線性評價(jià)：定量分析方法的線性評價(jià)：EP7-PEP7-P：臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾：臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾 ，用于干擾物對檢測結(jié)果，用于干擾物對檢測結(jié)果影響的定性。影響的定性。 EP9-AEP9-A：用病人標(biāo)本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評估：用病人標(biāo)本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評估 ，主主要用于檢測兩種臨床方法或設(shè)備間的偏倚。要用于檢測兩種臨床方法或設(shè)備間的偏倚。檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證評價(jià)文件（評價(jià)文件（2）EP10-AEP10-A：定量實(shí)驗(yàn)室方法的初步評價(jià)：定量實(shí)驗(yàn)室方法的初步評價(jià)EP14-AEP14-A：基質(zhì)效應(yīng)的評價(jià)：基質(zhì)效應(yīng)的評價(jià) EP15

7、-AEP15-A：精密度和準(zhǔn)確度性能的應(yīng)用：精密度和準(zhǔn)確度性能的應(yīng)用EP21-PEP21-P（NEWNEW）：臨床實(shí)驗(yàn)方法總分析誤差的評估）：臨床實(shí)驗(yàn)方法總分析誤差的評估檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證1.1.批內(nèi)方案批內(nèi)方案2.2.批間方案批間方案3.EP3.EP方案（方案（EP5-EP5-，EP15EP15A A）四、評價(jià)方法四、評價(jià)方法（一）精密度評價(jià)試驗(yàn)（一）精密度評價(jià)試驗(yàn)檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證5 5方案方案1.1.試驗(yàn)樣品試驗(yàn)樣品 一般選擇一般選擇2 2個(gè)，一個(gè)在參考區(qū)間附近，另一個(gè)為異常值個(gè)，一個(gè)在參考區(qū)間附近，另一個(gè)為異常值2. 2. 批內(nèi)精密度評價(jià)：即一個(gè)樣品重復(fù)測定批內(nèi)精密度評價(jià)：即一個(gè)樣品重復(fù)測

8、定2020次，計(jì)算出均值，標(biāo)準(zhǔn)次，計(jì)算出均值，標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。差和變異系數(shù)。 3.3.總精密度評價(jià)：總精密度評價(jià)：用用2 2個(gè)樣品每天測定個(gè)樣品每天測定2 2批，批間測定間隔不得少于批，批間測定間隔不得少于2 2h h，每批平行測定，每批平行測定2 2份，至少共測定份，至少共測定2020天，天，8080個(gè)數(shù)據(jù)。每對結(jié)果間的個(gè)數(shù)據(jù)。每對結(jié)果間的差（共差（共4040個(gè)）代表批內(nèi)差；個(gè)）代表批內(nèi)差；2 2批均值之間的差（共批均值之間的差（共2020個(gè)）代表批間差；個(gè)）代表批間差；每天每天4 4個(gè)結(jié)果的均值（共個(gè)結(jié)果的均值（共2020個(gè)）代表日間差。每批測定至少做一個(gè)質(zhì)個(gè)）代表日間差。每批測定至少做

9、一個(gè)質(zhì)控?？?。 檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證1.1.用有量值溯源的參考物質(zhì)進(jìn)行測定用有量值溯源的參考物質(zhì)進(jìn)行測定2.2.使用決定性方法或參考方法使用決定性方法或參考方法3.3.與具有量值溯源檢測系統(tǒng)進(jìn)行比對與具有量值溯源檢測系統(tǒng)進(jìn)行比對（1 1）EPEP方案（方案（EP9-EP9-，EP15EP15A A） （2 2）簡易比對方案）簡易比對方案（二）正確度評價(jià)試驗(yàn)（二）正確度評價(jià)試驗(yàn)檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證(1) EP15(1) EP15A A方案方案應(yīng)來源于健康人或患者，無明應(yīng)來源于健康人或患者，無明顯干擾因素。顯干擾因素。全部標(biāo)本在整個(gè)線性范圍內(nèi)均全部標(biāo)本在整個(gè)線性范圍內(nèi)均勻分布，標(biāo)本至少勻分布，標(biāo)本至少20

10、例。例。 標(biāo)本要求標(biāo)本要求檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證注意：注意：1 1，可一天，但不超過，可一天，但不超過4 4小時(shí)內(nèi)。小時(shí)內(nèi)。2.2.可可3-43-4天（但盡可能短）。天（但盡可能短）。3.3.每個(gè)標(biāo)本只需測定每個(gè)標(biāo)本只需測定1 1。4.二種方法都有室內(nèi)質(zhì)控二種方法都有室內(nèi)質(zhì)控檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證計(jì)算偏移計(jì)算偏移1.1.偏移偏移 2.2.相對偏移相對偏移 3.3.平均偏移平均偏移 4.4.相對平均偏移相對平均偏移 5.5.與質(zhì)量要求比較與質(zhì)量要求比較檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證 1. 1.選擇高、中、低濃度五份樣本同時(shí)用各選擇高、中、低濃度五份樣本同時(shí)用各臺儀器按常規(guī)樣本測定的方法，測定其臺儀器按常規(guī)樣本測定的方法，

11、測定其各項(xiàng)參數(shù)，每份樣本測定各項(xiàng)參數(shù)，每份樣本測定2 2次，求其均次，求其均值。值。(2) 簡易比對方法簡易比對方法檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證 3.3.計(jì)算與核對標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算與核對標(biāo)準(zhǔn) 1 1 計(jì)算：按計(jì)算：按PTPT計(jì)算方法計(jì)算偏倚。計(jì)算方法計(jì)算偏倚。 PTPT計(jì)算公式：（確定儀器測定值計(jì)算公式：（確定儀器測定值- -比對儀器測比對儀器測定值）定值）/ /確定儀器測定值確定儀器測定值100100 2 2 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)： 偏移偏倚保持所有標(biāo)本結(jié)果差異在偏移偏倚保持所有標(biāo)本結(jié)果差異在CLIA88CLIA88允允許誤差的許誤差的1/41/4內(nèi)內(nèi)檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證檢驗(yàn)科比對記錄檢驗(yàn)科比對記錄檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證1.1.確

12、定測量的線性范圍確定測量的線性范圍和臨床上可能出現(xiàn)和臨床上可能出現(xiàn)的范圍的范圍。2.2.取線性范圍內(nèi)的高值標(biāo)本，用稀釋液稀取線性范圍內(nèi)的高值標(biāo)本，用稀釋液稀釋，最低預(yù)期值在線性低限。釋，最低預(yù)期值在線性低限。3.3.計(jì)算回收率：在可接受范。計(jì)算回收率：在可接受范。（三）臨床可報(bào)告范圍（三）臨床可報(bào)告范圍檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證4.4.可報(bào)告范圍計(jì)算：可報(bào)告范圍計(jì)算：（1 1）上限為線性范圍上線）上限為線性范圍上線稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)（2 2）下限為線性范圍低限）下限為線性范圍低限檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證第第二二節(jié)節(jié) 定性定性檢測系統(tǒng)的性能檢測系統(tǒng)的性能驗(yàn)證驗(yàn)證 一、驗(yàn)證的內(nèi)容一、驗(yàn)證的內(nèi)容（掌握）

13、（掌握）: : （1 1）敏感性敏感性 （2 2）特異性特異性 （3 3）正確度）正確度 （4 4）符合性）符合性 （5 5）精密度）精密度(Precision)(Precision) （6 6）CUTOFFCUTOFF值驗(yàn)證值驗(yàn)證檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證二、定性臨床應(yīng)用與分類二、定性臨床應(yīng)用與分類1 1、定性測定的臨床應(yīng)用、定性測定的臨床應(yīng)用免疫學(xué)測定：感染性疾病、腫瘤標(biāo)志物免疫學(xué)測定：感染性疾病、腫瘤標(biāo)志物核酸和基因檢測核酸和基因檢測微生物檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)寄生蟲檢驗(yàn)驗(yàn)寄生蟲檢驗(yàn)驗(yàn)檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證2 2、定性實(shí)驗(yàn)的臨床分類、定性實(shí)驗(yàn)的臨床分類篩查實(shí)驗(yàn)：如便潛血、篩查實(shí)驗(yàn)：如便潛血、

14、TPTP診斷實(shí)驗(yàn)：如微生物學(xué)培養(yǎng)與細(xì)菌鑒定診斷實(shí)驗(yàn)：如微生物學(xué)培養(yǎng)與細(xì)菌鑒定確認(rèn)實(shí)驗(yàn)：對以上已做出的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)：對以上已做出的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證和確認(rèn)確認(rèn)檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證三、驗(yàn)證目的和時(shí)機(jī)（熟悉）三、驗(yàn)證目的和時(shí)機(jī)（熟悉）: :1.1.目的：目的：（1 1）評價(jià)各定性檢測參數(shù)是否滿足臨床檢測和認(rèn)可）評價(jià)各定性檢測參數(shù)是否滿足臨床檢測和認(rèn)可組織的要求組織的要求. . （2 2）驗(yàn)證廠家提供的試劑參數(shù)能在本實(shí)驗(yàn)室得到重）驗(yàn)證廠家提供的試劑參數(shù)能在本實(shí)驗(yàn)室得到重現(xiàn)現(xiàn). .檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證幾個(gè)重要概念及計(jì)算公式的回顧幾個(gè)重要概念及計(jì)算公式的回顧: :1.1.敏感性敏感性: :將實(shí)際患病者

15、將實(shí)際患病者正確診斷為陽性的百分率。正確診斷為陽性的百分率。 計(jì)算公式為：真陽性計(jì)算公式為：真陽性/ /（真陽性（真陽性+ +假陰性）假陰性）X X 100% .100% .2.2.特異性特異性 : :指將實(shí)際指將實(shí)際無病者檢測為陰性的百分率無病者檢測為陰性的百分率。 計(jì)算公式為：真陰性計(jì)算公式為：真陰性/( /( 真陰性真陰性+ +假陽性）假陽性） X 100% . X 100% . 檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證 陽性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）：陽性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）：即測定為陽性的標(biāo)即測定為陽性的標(biāo)本實(shí)際上為陽性的可能性。本實(shí)際上為陽性的可能性。=真陽性真陽性/ /（真陽性（真陽性+ +假陽性）假陽性

16、） 100%100% 陰性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）：陰性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）： 則為一份給出陰則為一份給出陰性結(jié)果的樣本實(shí)際上為陰性的可靠性。性結(jié)果的樣本實(shí)際上為陰性的可靠性。= = 真陰性真陰性/ /（真陰性（真陰性+ +假陰性）假陰性） 100%100%檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證（一）準(zhǔn)確度驗(yàn)證（一）準(zhǔn)確度驗(yàn)證: :1 .1 .樣本的臨床診斷已知（敏感性、特異性）樣本的臨床診斷已知（敏感性、特異性） 室間質(zhì)評材料室間質(zhì)評材料 ( (衛(wèi)生部衛(wèi)生部) ) 廠商提供的已賦值的參考材料廠商提供的已賦值的參考材料 用參考方法或決定方法定值的材料（或用參考方法或決定方法定值的材料（或金標(biāo)準(zhǔn)診斷的標(biāo)本）。金標(biāo)準(zhǔn)診

17、斷的標(biāo)本）。 檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證選取選取4040份（份（2020份）樣本份）樣本, ,最好陰陽性各半最好陰陽性各半隨機(jī)盲法重新分號隨機(jī)盲法重新分號檢測樣本檢測樣本將所有檢測結(jié)果匯總填表將所有檢測結(jié)果匯總填表計(jì)算評價(jià)性能指標(biāo)計(jì)算評價(jià)性能指標(biāo)檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證臨床診斷臨床診斷總計(jì)總計(jì)陽性陽性陰性陰性驗(yàn)證方法驗(yàn)證方法陽性陽性A AB BA+BA+B陰性陰性C CD DC+DC+D總計(jì)總計(jì)A+CA+CB+DB+DN N檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證敏感度敏感度 = 100%= 100% A A/ /（A+CA+C） 特異性特異性 = 100%= 100% D D/ /（B+DB+D） 相關(guān)樣本的患病率相關(guān)樣本的患病率

18、= 100%= 100% （A+CA+C）/N/N陽性結(jié)果預(yù)測值（陽性結(jié)果預(yù)測值（PVPPVP） = 100%= 100% A A/ /（A+BA+B） 陰性結(jié)果預(yù)測值陰性結(jié)果預(yù)測值 （PVNPVN）= 100%= 100% D D/ /（C+DC+D） 方法效率（正確率）方法效率（正確率） = 100%= 100% （A+DA+D）/N/N檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證2 2 . .樣本的臨床診斷未知（符合性）樣本的臨床診斷未知（符合性）同一項(xiàng)目不同檢測方法或儀器的比對同一項(xiàng)目不同檢測方法或儀器的比對適用范圍適用范圍: :一個(gè)項(xiàng)目有兩種以上的方法或者兩臺一個(gè)項(xiàng)目有兩種以上的方法或者兩臺以上的儀器以上的儀器

19、( (包括同一型號的儀器包括同一型號的儀器) )同時(shí)檢測同時(shí)檢測, ,需要進(jìn)行一致性比對需要進(jìn)行一致性比對. .檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證選取選取4040份（份（2020份）樣本份）樣本, ,最好陰陽性各半最好陰陽性各半隨機(jī)每隨機(jī)每8 8（4 4）份分成一組）份分成一組兩種方法兩種方法( (或兩臺儀器或兩臺儀器) )每天平行檢測一組樣本每天平行檢測一組樣本將所有檢測結(jié)果匯總將所有檢測結(jié)果匯總評價(jià)符合率評價(jià)符合率檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證對比方法對比方法總計(jì)總計(jì)陽性陽性陰性陰性實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法陽性陽性a ab ba+ba+b陰性陰性c cd dc+dc+d總計(jì)總計(jì)a+ca+cb+db+dn n檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證陽性符

20、合率陽性符合率 = 100% = 100% a a/(a+c)/(a+c)陰性符合率陰性符合率 = 100% = 100% d d/(b+d)/(b+d)總符合率總符合率 = 100% (a+d)/n檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證更換批號的簡易比對：更換批號的簡易比對： 新鮮患者血清陰性新鮮患者血清陰性2 2例，陽性例，陽性3 3例，陽性包含有例，陽性包含有S/COS/CO高、中、低值，用新舊批號試劑檢測。高、中、低值，用新舊批號試劑檢測。低值避開低值避開“灰區(qū)灰區(qū)”夾心法：夾心法：S/COS/CO低值低值1.21.23 3競爭法：競爭法：S/COS/CO低值低值0.40.40.60.6判斷標(biāo)準(zhǔn)：符合率為判斷標(biāo)準(zhǔn)：符合率為100%100%為可接受。為可接受。檢驗(yàn)方法性能驗(yàn)證二二. .精密度驗(yàn)證精密度驗(yàn)證: :1.1.批內(nèi)精密度批內(nèi)精密度: :同一份樣本在同一批次內(nèi)平行重復(fù)檢同一份樣本在同一批次內(nèi)平行重復(fù)檢測測2020次次. .然后計(jì)算均值然后計(jì)算均值,SD,SD和和CV.CV.2.2.批間精密度批間精密度: :同一份樣本連續(xù)檢測同一份樣本連續(xù)檢測2020天天, ,每天平行每天平行檢測雙孔檢測雙孔. .然后計(jì)算均值然后計(jì)算均值,SD,SD和和CV.CV.注