銀杏葉中黃酮的提取分離及測(cè)定1

1、銀杏葉中黃酮的提取分離及測(cè)定應(yīng)化1202羅江偉 付 振徐 璐李依霖姚舒凡一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?）掌握傳統(tǒng)的溶劑提取法并對(duì)銀杏中的黃酮進(jìn)行提取。2）掌握紫外分光光度計(jì)的應(yīng)用，以及origin軟件繪圖的基本操作 。3）學(xué)會(huì)自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)團(tuán)隊(duì)合作精神。二、實(shí)驗(yàn)原理 提取銀杏中黃酮類化合物的主要方法有：水蒸氣法、有機(jī)溶劑萃取和超臨界萃取法。常用的有機(jī)溶劑有：甲醇、乙醇、丙酮、石油醚等。干燥和粉碎過的銀杏通過索氏提取后，蒸去溶劑可得到棕黑色的銀杏浸膏粗提物。粗提物經(jīng)過萃取、沉淀法或柱分離精制后，得到精提取物，為黃褐色的粉末，其中黃酮類化合物含量在 20%-26%。 三、化學(xué)藥品及儀器1、化學(xué)藥品 乙醇（20

2、%、60%、70%） 二氯甲烷 無水硫酸鈉 氫氧化鈉溶液（0.5mol/L） 鹽酸溶液（0.5mol/L） 銀杏葉粉末 三、化學(xué)藥品及儀器2、儀器 索氏提取器 濾紙 100ml量筒 10ml量筒 圓底燒瓶（500ml）三口燒瓶 溫度計(jì) 球形冷凝管 鐵架臺(tái) 分液漏斗（500ml） 錐形瓶（100ml、250ml） 50ml容量瓶 150ml小燒杯6個(gè) 移液管0.5ml，1ml，2ml 水浴鍋 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 紫外分光光度計(jì)四、實(shí)驗(yàn)步驟1、粗提物： 稱取干燥和粉碎的銀杏葉粉末50克，裝入索氏提取器的濾紙?zhí)状校?00ml圓底燒瓶?jī)?nèi)加入250ml60%乙醇，用65-80水浴加熱。連續(xù)提取3h左右，等葉

3、子顏色變淺可停止加熱。待在虹吸管內(nèi)冷凝液剛落下時(shí)，立即停止加熱，改成旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸去溶劑即得棕黑色的銀杏浸膏粗提物。稱重，計(jì)算產(chǎn)量。四、實(shí)驗(yàn)步驟2、分離： 液-液萃取法： 在500mL燒杯中，將銀杏浸膏粗產(chǎn)物加250mL去離子水，攪拌均勻，再將此溶液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用60mL二氯甲烷萃取三次，取下層液，合并萃取液。用無水NaSO4干燥。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸去二氯甲烷，蒸餾剩余物為黃酮提取物。經(jīng)干燥后稱重，計(jì)算產(chǎn)率。四、實(shí)驗(yàn)步驟3、測(cè)定： (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品50.0mg，置于50mL燒杯中，加少量70%乙醇使之完全溶解，轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，再用70%乙醇定容至刻度，搖

4、勻，得1.0mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于50mL容量瓶中，按照下述方法配置顯色溶液；各加70%乙醇使成25mL，然后分別加入5%NaNO2溶液1.5mL，搖勻，放置6min后，再加10%Al（NO3）3溶液1.5mL,搖勻，放置6min后，加NaOH溶液20mL,最后用蒸餾水稀釋至刻度（50mL），搖勻，放置15min后，以不加蘆丁的試劑為空白，用紫外光分光光度計(jì)測(cè)定510.0nm處的吸光度。以濃度c為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。四、實(shí)驗(yàn)步驟 (2)總黃酮含量的測(cè)定： 準(zhǔn)確量取2.0mL黃酮液與50mL容量瓶中，按照繪制曲線的顯色方