無菌和無菌操作技術(shù)

1、項目六 無菌和無菌操作技術(shù)無菌：沒有活的微生物存在的狀態(tài)。無菌操作技術(shù)：用于防止微生物進入無菌范圍造成污染的操作技術(shù)。一、無菌的環(huán)境二、無菌的器具、培養(yǎng)基三、無菌操作技術(shù)四、基本規(guī)則一、無菌的環(huán)境1、無菌室2、超凈工作臺3、生物安全柜4、火焰周圍1、無菌室標(biāo)準(zhǔn)無菌室的要求：房間設(shè)置（外面有緩沖室）、空氣過濾、墻面、墻角、微生物操作相關(guān)設(shè)備、紫外燈等。無菌室布局如條件有限，可在微生物實驗室內(nèi)專辟一個小房間作為無菌室?？梢杂冒宀暮筒ＡЫㄔ?，面積4-5 平方米即可。板材和玻璃隔出的無菌室2、超凈工作臺超凈工作臺是一種提供局部無塵無菌工作環(huán)境的垂直單向流型空氣凈化設(shè)備。 超凈工作臺3、生物安全柜生物安

2、全柜外形與超凈臺類似，也提供局部無塵無菌工作環(huán)境。但它設(shè)置了風(fēng)槽，氣流不會吹向使用者，可以有效保護使用者。生物安全柜4、火焰周圍通常使用酒精燈、煤氣燈，其火焰周圍是無菌區(qū)域（直徑10cm左右）。這并不是利用高溫殺死細菌，而是利用向上的單向氣流形成一個無菌區(qū)域?；鹧嬷車菬o菌區(qū)域二、無菌的器具、培養(yǎng)基1、玻璃、金屬等器具 干熱滅菌法2、玻璃、金屬、含水物品 高壓蒸汽滅菌法3、金屬、玻璃器具 火焰滅菌法4、液體或水溶性物質(zhì) 過濾除菌法1、玻璃、金屬等器具-干熱滅菌法設(shè)備：電烘箱用途：用于玻璃器皿、金屬器具等耐熱物品的烤干和滅菌。條件：160-165，滅菌 1-2小時。2、玻璃、金屬、含水物品等-高

3、壓蒸汽滅菌法設(shè)備：高壓蒸汽滅菌鍋用途：培養(yǎng)基、生理鹽水、廢棄物、采樣器、紗布、衣物的滅菌。條件：121 水蒸氣 15分鐘培養(yǎng)基一般使用高壓蒸汽滅菌法3、一些金屬、玻璃器具-火焰滅菌法即在火焰外焰上灼燒進行滅菌。用途：接種環(huán)、接種針；涂布器；試管管口、錐形瓶瓶口等的滅菌。4、液體或水溶性物質(zhì)-過濾除菌法器具：細菌過濾器用途：不耐高溫的液體、水溶性物質(zhì)的除菌。細菌過濾器三、無菌操作技術(shù)我們通過一定的技術(shù)來保證目的微生物、培養(yǎng)基不被環(huán)境微生物污染，這些技術(shù)就是無菌操作技術(shù)。包括手部清潔消毒，用接種針、接種環(huán)、吸量管、涂布棒等工具進行各種操作等等。1、手部清潔消毒洗手：手部有可見灰塵時、飯前、便后，用

4、水和肥皂洗手；Handrub（揉手）：手部較清潔時，75%乙醇或者醇基消毒劑揉手。動作：手掌-手背-指縫-手指-拇指-指尖-手腕2、培養(yǎng)皿操作培養(yǎng)皿開合：單手打開和蓋上皿蓋，包括持皿法和皿加法兩種。此操作用于制作培養(yǎng)基平板、接種等。持皿法皿加法3、接種環(huán)操作包括灼燒接種環(huán)、接種、劃線等。灼燒接種環(huán)先斜放外焰灼燒接種環(huán)，然后垂直放置后繼續(xù)灼燒，再斜燒金屬桿?，F(xiàn)在紅外接種環(huán)滅菌器使用也比較廣泛。紅外接種環(huán)滅菌器用接種環(huán)進行接種用接種環(huán)進行劃線4、涂布棒操作灼燒滅菌：可以沾酒精然后灼燒，灼燒范圍要包括其桿部。涂布：將菌液滴在培養(yǎng)基表面中央。右手拿涂布棒將菌液沿一條直線來回推動，然后沿一垂直線來回推動，平板邊緣處可改變方向再涂幾次。涂布5、試管操作單試管操作（注意左右手的使用）雙試管操作四、基本規(guī)則不得留長指甲，頭發(fā)需扎好；無