微生物基本操作規(guī)范.

1、培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基概念：是指以液體、半固體或固體形式，包含天然或合成成分，用于促進(jìn)微生物的繁殖或保持其活力的物質(zhì)組成。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標(biāo)準(zhǔn)，將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。 培養(yǎng)基的分類：按功能分類：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、特殊培養(yǎng)基。按物理性狀分類：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基：所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的，這種培養(yǎng)基被用來微生物的增菌和生長狀態(tài)觀察。 固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑制成成固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂。固體培養(yǎng)基瓊

2、脂用量1.5-2%，半固體培養(yǎng)基瓊脂用量在0.51%之間。固體培養(yǎng)基用作微生物的分離、鑒定、計(jì)數(shù)、保藏等。半固體培養(yǎng)基被用來觀察微生物的動力和保藏菌種。今天給大家展示一下各種培養(yǎng)基的制備。 培養(yǎng)基制備的基本過程：調(diào)配成分、溶解、校正pH、分裝、滅菌、質(zhì)量檢查和保存所需物品：試劑、錐形瓶、天平、量筒、微波爐、高壓蒸汽滅菌器、玻璃試管、玻璃平板、接種工具。（1） 調(diào)配成分：在錐形瓶或大容量燒瓶中依次加入蒸餾水200ml， 1蛋白胨，0.5NaCL，0.3牛肉膏（g/v），準(zhǔn)確稱取各種成分，使其充分混合。注意事項(xiàng)培養(yǎng)基調(diào)配溶解：先在錐形瓶底加入少量的蒸餾水，再加入培養(yǎng)基成分，以防其粘在錐形瓶底部燒結(jié)

3、。制備培養(yǎng)基時，除玻璃容器時，還可用鋁鍋，搪瓷桶，但不可用鐵，銅等容器，以免鐵和銅離子進(jìn)入培養(yǎng)基（培養(yǎng)基中鐵離子含量超過0.14mg/L時抑制細(xì)菌毒素的產(chǎn)生，含銅量超過0.3mg/L時抑制細(xì)菌的生長）。培養(yǎng)基中若需加入染料，膽鹽，指示劑等，應(yīng)在校正pH后加入。（2） 溶解：將配制好的混合物微波爐加熱8min，使其完全溶解，補(bǔ)足失水。（3） 校正PH：不同的細(xì)菌需要在含不同pH培養(yǎng)基上生長，一般將培養(yǎng)基的pH調(diào)至7.27.6。商品化的試劑配制后可省略該步驟，無需校正PH。根據(jù)所需的培養(yǎng)基用途不同分別加入不同含量的瓊脂，制成半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。（4） 分裝：（液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和部分固

4、體培養(yǎng)基的分裝可在滅菌錢也可在滅菌后） 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：一般分裝于容量為500ml錐形瓶滅菌后備用，以便隨時分裝傾注平板或配制營養(yǎng)培養(yǎng)基等；瓊脂斜面：通常在融化后分裝于試管，量約為試管高度的1/41/3，滅菌后傾斜放置。 半固體培養(yǎng)基：分裝量為試管容量的1/41/3，滅菌后直立放置。液體培養(yǎng)基：分裝量為管長的1/5，滅菌后直立放置。（5） 滅菌：分裝好的培養(yǎng)基常用高壓蒸氣滅菌，條件為103.43kPa，溫度1211520min；含糖培養(yǎng)基以68.95kPa，1015min為宜，以免破壞糖類物質(zhì)；不耐高熱的物質(zhì)配制成的培養(yǎng)基，常用流通蒸氣滅菌或?yàn)V過除菌。瓊脂平板制備：先將滅菌瓊脂融化后冷卻至50左右

5、，以無菌操作傾注于滅菌平皿內(nèi)（內(nèi)徑75mm的平皿約8-9ml），水平旋轉(zhuǎn)平皿，待瓊脂凝固后將平皿翻轉(zhuǎn)，置4保存?zhèn)溆?。營養(yǎng)平板制備：先將滅菌瓊脂融化后冷卻至50左右，以無菌操作加入10%無菌的脫纖維羊血（臨用前置37水浴預(yù)溫30min），輕輕搖勻（避免產(chǎn)生氣泡），傾注于滅菌平皿內(nèi)（內(nèi)徑75mm的平皿約8-9ml），水平旋轉(zhuǎn)平皿，待瓊脂凝固后將平皿翻轉(zhuǎn)，置4保存?zhèn)溆?。注意事?xiàng)平板的澆注：傾注培養(yǎng)基時，切勿將皿蓋全部開啟，以免空氣中塵埃及細(xì)菌等微生物的落入。傾注時若培養(yǎng)基溫度過高，則冷凝水過多，易致污染，不易分離到菌落；若溫度過低，部分瓊脂凝固，傾注平板表面高低不平?？稍跓o菌室或接種罩內(nèi)傾注培養(yǎng)基后

6、，將皿蓋稍開一縫隙，在紫外燈照射下待凝，這樣利于蒸氣散發(fā)，減少平板內(nèi)冷凝水。傾注血液瓊脂時，由于加血時瓊脂表面容易產(chǎn)生氣泡，傾注時適時轉(zhuǎn)動錐形瓶，使氣泡附于瓶壁，以減少血平板表面的氣泡。（6） 質(zhì)量檢查：需做無菌試驗(yàn)和效果試驗(yàn)。 無菌試驗(yàn)：將滅菌后的培養(yǎng)基置37孵育24h，無任何微生物生長為合格。 效果試驗(yàn)：將已知的標(biāo)準(zhǔn)參考菌株接種于待檢的培養(yǎng)基中，檢查細(xì)菌的生長繁殖狀況和生化反應(yīng)是否與預(yù)期的結(jié)果相符和。（7） 保存：經(jīng)過質(zhì)量檢查合格的培養(yǎng)基注明名稱，制作日期存放于冷暗處或4冰箱（固體培養(yǎng)基應(yīng)將平皿的底朝上，蓋朝下或用保鮮袋包裹，以減少水分蒸發(fā)，液體培養(yǎng)基應(yīng)直立放置，以免污染）。微生物的分離培

7、養(yǎng)和接種技術(shù)接種：將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種。將微生物混和培養(yǎng)物通過一定的接種技術(shù)接種到人工培養(yǎng)基中得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化。 今天給大家展示一下各種培養(yǎng)基的分離培養(yǎng)的接種技術(shù)和細(xì)菌的生長狀態(tài)。1.接種所需物品：接種工具（接種環(huán)、接種針等）、酒精燈、待接種菌種。接種環(huán)用于固體和液體培養(yǎng)基的接種，接種針用于固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基的接種。接種技術(shù)要求：用滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于滅菌培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種操作。接種工具的滅菌方法：通常接種環(huán)或接種針在火焰上外焰滅菌。滅菌后的接種工具在接種

8、微生物前需先冷卻，可接觸一下培養(yǎng)基，待接種環(huán)冷卻到室溫后，方可用它來挑取含菌材料或菌體，迅速地接種到新的培養(yǎng)基上。接種后將接種工具再次滅菌才可放置。2.接種環(huán)境：為避免接種過程中標(biāo)本中的微生物污染環(huán)境及空氣中的微生物污染培養(yǎng)物，微生物的接種應(yīng)在特定環(huán)境內(nèi)接種。常用的設(shè)備有接種罩、超凈工作臺或無菌室等。3.接種方法：根據(jù)待檢標(biāo)本性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所用培養(yǎng)基的性質(zhì)采用不同的接種方法。（1）平板劃線分離培養(yǎng)法：通過平板劃線分離培養(yǎng)使混合細(xì)菌培養(yǎng)物在培養(yǎng)基表面分散生長，各自形成菌落，根據(jù)菌落的形態(tài)及特征，挑選單個菌落，經(jīng)過移種而獲得純種細(xì)菌（純培養(yǎng)）。平板劃線分離培養(yǎng)法常用來分離、鑒定、檢驗(yàn)雜菌、計(jì)數(shù)、

9、保藏、生物測定等。根據(jù)劃線的方式不同有連續(xù)劃線分離法、分區(qū)劃線分離法、棋盤劃線分離法等。a.連續(xù)環(huán)線分離法：先將接種環(huán)火焰滅菌,待冷后取培養(yǎng)物少許。左手拿起平板，并用拇指和食指將平板蓋打開，右手迅速將取有培養(yǎng)物的接種環(huán)從打開的空間插入平板內(nèi)，使接種環(huán)與培養(yǎng)基表面呈45角，先在平板上1/5處輕輕涂布，然后即可左右來回以曲線形式作連續(xù)劃線接種，線與線間留有適當(dāng)距離，將整個平板表面劃滿曲線。注明標(biāo)識后，置35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一般在1824小時后觀察結(jié)果。b.分區(qū)劃線分離法：用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線,再在2、3區(qū)依次劃線。每劃完一個區(qū)域，均將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)域。每一區(qū)

10、域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線12次，使接種量逐漸減少，以獲得單個菌落。其他操作與上述曲線劃線分離法相同。c.棋盤格線劃線分離法：將培養(yǎng)物涂布于平板上1/5處，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后，自1/5劃線處作平行劃線56條，將接種環(huán)滅菌后，劃垂直線56條，使呈正方形格。其他操作同前。（2）斜面接種培養(yǎng)法：主要用于純菌移種，以進(jìn)一步鑒定或保存菌種。接種方法是以滅菌的接種環(huán)挑取細(xì)菌后伸入斜面培養(yǎng)基管，在斜面底部向上劃一條直線，然后從底部起向上作曲折連續(xù)劃線，直至斜面上方頂端。取出接種環(huán)，火焰滅菌管口，加塞；最后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好。做好標(biāo)識，置35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824小時。（3）液體接種法：主要用于微生物的

11、增菌和生長狀態(tài)觀察。接種方法是以滅菌的接種環(huán)挑取細(xì)菌后伸入培養(yǎng)基管中，在接近液面的管壁上方輕輕研磨，并沾取少許培養(yǎng)基液體調(diào)和，使細(xì)菌混合于培養(yǎng)基的液體中。取出接種環(huán)，火焰滅菌管口，加塞；最后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好。做好標(biāo)識，置35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824小時。（4）半固體培養(yǎng)基穿刺接種法：多用于保存菌種、觀察動力及厭氧培養(yǎng)等也可以用于觀察細(xì)菌的某些生化反應(yīng)。以滅菌接種針挑取細(xì)菌后，垂直刺入培養(yǎng)基的中心（半固體或一般瓊脂高層）直達(dá)近管底部（但不能完全刺到管底），接種針應(yīng)沿原路退出。細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌在不同的培養(yǎng)基上接種后，在一定的培養(yǎng)條件下（通常為35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824小時），可表現(xiàn)不同的生長現(xiàn)象

12、。（1）固體培養(yǎng)基：細(xì)菌在固體培養(yǎng)上生長后可表現(xiàn)出2種生長情況：菌落和菌苔。菌落：單個細(xì)菌分裂繁殖成一堆肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。菌苔：多個細(xì)菌分類繁殖后形成密集一片的細(xì)菌集團(tuán)。（2）液體培養(yǎng)基：細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長后可表現(xiàn)3種生長情況：表面生長、均勻渾濁、沉淀生長。（3）半固體培養(yǎng)基：細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長后可表現(xiàn)2種生長情況：沿穿刺線呈羽毛狀或云霧狀混濁生長和沿穿刺線呈線性生長。常用染色液配制實(shí)驗(yàn)室觀察微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)主要通過一定的染色方法后在顯微鏡下，常用的染色方法有革蘭染色、抗酸染色等。革蘭染色液配制（1） 結(jié)晶紫染液：稱取結(jié)晶紫48g，溶于100ml 95%乙醇中制成飽和液。取20ml飽

13、和液與80ml 10g/L草酸鉀溶液混合即成，用濾紙過濾備用。（2） 盧氏碘液：先將2g碘化鉀溶于10ml蒸餾水中，再加1g碘，待碘全部溶解后再加蒸餾水至300ml即成。（3） 95乙醇或丙醇乙醇溶液（95乙醇70ml丙醇30ml）（4） 稀釋石炭酸復(fù)紅液：稱取4g堿性復(fù)紅溶解于100ml 95乙醇，即成堿性復(fù)紅乙醇飽和液，吸取10ml飽和液和90ml 50mgL石炭酸水溶液，混勻，即成石炭酸復(fù)紅飽和液，再量取10ml石炭酸復(fù)紅飽和液加90ml蒸餾水混勻即成。抗酸染色液配制（1）石炭酸復(fù)紅液：堿性復(fù)紅8g溶于100ml 95%乙醇制備成堿性復(fù)紅飽和液，取10ml飽和液與90ml 5%石炭酸水溶

14、液混勻。（2）鹽酸酒精：5%鹽酸乙醇液（5ml濃鹽酸+95ml 95%乙醇），使用時10倍稀釋即可。（3）亞甲蘭液：0.3g亞甲藍(lán)+50ml 95%乙醇，待溶后，加蒸餾水100ml，混勻，使用時10倍稀釋。細(xì)菌涂片制作、染色觀察和細(xì)菌基本形態(tài)觀察所需物品：細(xì)菌培養(yǎng)物、革蘭染色液、細(xì)菌接種工具、載玻片、生理鹽水、光學(xué)顯微鏡。1.細(xì)菌涂片標(biāo)本的制作細(xì)菌進(jìn)行染色檢查前首先要制備細(xì)菌涂片，制作細(xì)菌涂片一般包括涂片、干燥、固定三步。（1）涂片：用滅菌的接種環(huán)挑取1-2環(huán)生理鹽水涂于潔凈的載玻片上，將接種環(huán)滅菌后挑取固體培養(yǎng)基上細(xì)菌培養(yǎng)物少許于生理鹽水中磨勻，呈輕度混濁。涂好菌膜大小一般以1cm2左右為宜

15、。注意事項(xiàng)：1) 細(xì)菌涂片制作每次挑取細(xì)菌培養(yǎng)物前后都要注意無菌操作。2) 若是細(xì)菌培養(yǎng)物在液體培養(yǎng)基（如肉湯、濃汁、痰液、咽拭子）中，可用滅菌接種環(huán)直接挑取1-2環(huán)液體培養(yǎng)物涂布于潔凈的載玻片上，不需要另外添加生理鹽水。3) 若多個標(biāo)本同時進(jìn)行同樣染色，可用蠟筆在玻片上畫出數(shù)格，做好標(biāo)記再分別涂片，以免混淆。4) 用火焰燒灼沾有菌液的接種環(huán)時，為防止菌液受熱濺散污染環(huán)境，接種環(huán)滅菌前，須先將接種環(huán)靠近火焰或放內(nèi)焰中烤干，然后再在外焰中燒紅滅菌，殺死殘留的細(xì)菌。（2）干燥：涂片最好在室溫下自然干燥，或?qū)?biāo)本面向上，置于酒精燈火焰半尺高處慢慢烘干，切不可在火焰上燒干。（3）固定：細(xì)菌的固定常用火

16、焰加熱法，即將上述已干的涂片在酒精燈火焰中通過3次。固定的目的在于殺死細(xì)菌，并使細(xì)菌菌體與玻片粘附牢固，染色時不致于被染液和水沖掉，同時固定可凝固細(xì)胞質(zhì)，改變細(xì)菌對染料的通透性。2.革蘭染色法（1）原理：1) 革蘭陽性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易透入，不易被脫色；而革蘭陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較疏松，肽聚糖層少，脂質(zhì)含量多，乙醇易透入，易被脫色。2) 革蘭陽性菌等電點(diǎn)叫陰性菌低（PI2-3、PI4-5），在相同條件下，革蘭陽性菌所帶負(fù)電荷較陰性菌多，與帶正電荷的染料（結(jié)晶紫）結(jié)合較牢固且不易脫色。3) 革蘭陽性菌細(xì)胞內(nèi)含有大量核糖核酸鎂鹽，可與結(jié)晶紫和碘牢固地結(jié)合成大分子復(fù)合物

17、，不被乙醇脫色；而革蘭陰性菌細(xì)胞內(nèi)含有極少量的核糖核酸鎂鹽，吸附染料量少，形成的復(fù)合物分子也較少，易被乙醇脫色。（2）方法：1) 初染：將結(jié)晶紫染液加于制好的涂片的菌膜上，染色1min，用細(xì)水流沖洗，甩去積水。2) 煤染：加盧戈碘液作用1min，用細(xì)水流沖洗，甩去積水。3) 脫色：滴加95%乙醇數(shù)滴，搖動玻片數(shù)秒鐘，使均勻脫色，然后斜持玻片，再滴加酒精，直至流下酒精無色為止（約0.5min），用細(xì)水流沖洗，甩去積水。4) 復(fù)染：加稀釋石炭酸復(fù)紅染0.5min，用細(xì)水流沖洗，甩去積水，用吸水紙吸干后，在涂片菌膜上滴加香柏油，置油鏡下檢查。注意事項(xiàng)：操作因素：涂片太厚或太薄，固定菌體過分受熱或脫色

18、時間長短，染液沖洗方法不同，都會影響染色結(jié)果。細(xì)菌因素：細(xì)菌的菌齡不同，染色結(jié)果也有所差異。染液因素：所有染液應(yīng)防止染液蒸發(fā)而改變濃度，特別是盧戈碘液久存或受光作用后易失去煤染作用，涂片積水過多會改變?nèi)疽簼舛龋绊懭旧Ч?。抗酸染色?.細(xì)菌制片：同革蘭染色（但需厚涂片）。2.抗酸染色初染：將固定好的涂片置于染色架上，滴加飽和石炭酸復(fù)紅染液，并于載玻片下方以弱火加熱至出現(xiàn)蒸汽（勿煮沸或煮干）隨時補(bǔ)充染液以防止干枯，持續(xù)5min, 水洗。脫色：3%鹽酸酒精脫色，直至涂片無紅色染液脫下為止，然后水洗。復(fù)染：美藍(lán)染液復(fù)染1min，水洗，印干（印干用的濾紙只能使用一次，以防止假陽性）。印干后，在涂片菌

19、膜上滴加香柏油，置油鏡下檢查。3.細(xì)菌基本形態(tài)觀察革蘭染色后的細(xì)菌涂片可在普通光學(xué)顯微鏡的油鏡下觀察細(xì)菌具體形態(tài)。普通光學(xué)顯微鏡由光學(xué)方法系統(tǒng)和機(jī)械裝置兩部分組成，光學(xué)放大系統(tǒng)一般包括目鏡、物鏡、聚光器、光源等，機(jī)械裝置一般包括底座、鏡臂、鏡臺、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡筒等。普通光學(xué)顯微鏡油鏡使用方法普通光學(xué)顯微鏡的接物鏡一般有3種，即低倍鏡、高倍鏡和油鏡。檢查微生物形態(tài)時常用的是油鏡。油鏡的標(biāo)志是：透鏡直徑最小；油鏡長度大于低倍鏡和高倍鏡；油鏡頭的下緣有一圈黑線或白線有放大倍數(shù)100X的標(biāo)記。當(dāng)接目鏡倍數(shù)為10X，接物鏡用油鏡時，顯微鏡放大倍數(shù)為1000倍，可觀察到細(xì)菌的形態(tài)。油鏡觀察的原理：油鏡的透

20、鏡很小，自標(biāo)本片透過的光線，因玻片和空氣介質(zhì)密度不同，而使部分光線經(jīng)載玻片和空氣折射后而不能進(jìn)入接物鏡，致使射入光線較少，物象不清晰。在油鏡和標(biāo)本之間滴加與玻璃折光率相近的香柏油，則使進(jìn)入油鏡的光線增多，視野光亮度增強(qiáng)，物象清晰。1) 顯微鏡在使用時應(yīng)平放在實(shí)驗(yàn)臺適宜的位置。用油鏡時，勿使鏡臂和載物臺傾斜，以免鏡油流出，影響觀察。2) 油鏡檢查染色標(biāo)本時，光線宜強(qiáng)，可將聚光器上升到最高位置，將光圈全部打開，以獲得最佳光度。3) 將染色后待檢查的標(biāo)本置于載物臺上，用標(biāo)本推進(jìn)器固定，將待檢標(biāo)本的菌膜移于接物鏡下。4) 標(biāo)本欲檢部位滴一滴香柏油，然后轉(zhuǎn)換成油鏡，緩慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭浸沒在油滴中

21、，當(dāng)油鏡頭幾乎接觸玻片時停止轉(zhuǎn)動。觀察接物鏡，緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)器，使鏡筒上升（不能下降，以免壓碎標(biāo)本片和損傷油鏡），待看到模糊物象使，再調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器，直至清晰看到細(xì)菌。調(diào)節(jié)過程中若油鏡末端已離開油面，應(yīng)按上述過程重復(fù)操作。5) 觀察標(biāo)本時應(yīng)兩眼同時睜開，以減少眼睛疲勞，同時調(diào)節(jié)兩個目鏡之間的距離直至獲得最佳視覺效果。 注意事項(xiàng)1) 顯微鏡是精密的光學(xué)儀器，使用時應(yīng)注意愛護(hù)，各部分結(jié)構(gòu)不得隨意拆卸，以免損壞。2) 取送搬移顯微鏡時，要一手持鏡臂，一手托鏡底，平端在胸前，輕拿輕放。3) 避免強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、氯仿、乙醇、乙醚等化學(xué)藥品與顯微鏡接觸。顯微鏡光學(xué)部分必須保持清潔，避免陽關(guān)直接照射。細(xì)調(diào)節(jié)器是顯

22、微鏡精細(xì)而脆弱的部分，不要向同一方向連續(xù)轉(zhuǎn)動數(shù)周，應(yīng)輕微地來回旋轉(zhuǎn)。4) 鏡頭必須保持清潔，只能用軟且無毛的擦鏡紙擦拭。油鏡使用后應(yīng)立即用擦鏡紙拭去鏡油，若油鏡頭的油跡未擦干凈，應(yīng)先將二甲苯滴在擦鏡紙上擦拭鏡頭，再用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上殘留的二甲苯。5) 顯微鏡擦凈后，接物鏡轉(zhuǎn)成“品”字形，下降聚光器，套上顯微鏡套，放入實(shí)驗(yàn)柜中。 細(xì)菌的基本形態(tài)觀察經(jīng)革蘭染色后油鏡觀察：細(xì)菌染色可分為兩種：革蘭陽性（紫色）、革蘭陰性（紅色）；細(xì)菌形態(tài)可分為3種：球形、桿形、螺形。經(jīng)抗酸染色后油鏡觀察： 在淡藍(lán)色背景下可見染成紅色細(xì)長或略帶彎曲的桿菌，并有分枝生長趨向，此為抗酸染色陽性菌。其他細(xì)菌和細(xì)胞均被染成

23、藍(lán)色。細(xì)菌的生化反應(yīng)不同的細(xì)菌具有不同的酶系統(tǒng)，對底物的分解能力及代謝產(chǎn)物都不同。這些代謝產(chǎn)物具有不同的生物化學(xué)特性，可利用生物化學(xué)的方法測定這些代謝產(chǎn)物以鑒定細(xì)菌，稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)。生化反應(yīng)的分類：1.碳水化合物的代謝試驗(yàn)（糖、苷、醇類發(fā)酵試驗(yàn)；氧化-發(fā)酵試驗(yàn)；七葉苷水解試驗(yàn)；甲基紅試驗(yàn)；V-P試驗(yàn)）2.蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)；硫化氫試驗(yàn)；尿素分解試驗(yàn)；苯丙氨酸脫羧酶試驗(yàn)；氨基酸脫羧試驗(yàn)）3.碳源和氮源利用試驗(yàn)（枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)）4.細(xì)菌酶試驗(yàn)（凝固酶試驗(yàn)、過氧化氫酶試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、CAMP試驗(yàn)、膽汁溶菌試驗(yàn)）5.抑菌試驗(yàn)（桿菌肽試驗(yàn)、0/129試驗(yàn)）。今天示

24、教一下細(xì)菌常見的生化反應(yīng)接種方法和結(jié)果。 1.糖發(fā)酵試驗(yàn)組成：培養(yǎng)基+糖（苷、醇）+指示劑（溴甲酚紫）原理：各種細(xì)菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，對糖（苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的分解僅產(chǎn)酸，有的分解產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，故可用來鑒別細(xì)菌。方法：將待檢菌接種糖發(fā)酵管（液體培養(yǎng)基接種法），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824小時，觀察結(jié)果。結(jié)果：見示教管。2.甲基紅試驗(yàn)組成：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基+指示劑（甲基紅）原理：某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步分解為甲酸、乙酸等酸性物質(zhì)，故培養(yǎng)基PH在4.5以下，加入甲基紅試劑呈紅色（陽性）。某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為醇、酮等非酸性物質(zhì)，

25、使培養(yǎng)基PH在6.2以上，加入甲基紅試劑呈黃色（陰性）。方法：將待檢菌接種到葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中（液體培養(yǎng)基接種法），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824小時，加入甲基紅指示劑2-3d，立即觀察結(jié)果。結(jié)果：見示教管。3.V-P試驗(yàn)組成：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基+NaOH+-萘酚-乙醇原理：某些細(xì)菌分解葡萄糖生成丙酮酸，丙酮酸可進(jìn)一步脫羧生成乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性環(huán)境下被氧化成二乙酰，后者與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色胍縮二乙酰，為V-P試驗(yàn)陽性。不變紅色為陰性。方法：將待檢菌接種到葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中（液體培養(yǎng)基接種法），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448小時，加入V-P試驗(yàn)甲液和乙液各1d

26、，立即觀察結(jié)果（紅色為陽性、不變色為陰性）。結(jié)果：見示教管。4.吲哚試驗(yàn)（靛基質(zhì)試驗(yàn)）組成：蛋白胨水培養(yǎng)基+吲哚試劑。原理：細(xì)菌具有色氨酸酶，分解蛋白胨水中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，與吲哚試劑形成紅色化合物。方法：將待檢菌接種到蛋白胨水培養(yǎng)基中（液體培養(yǎng)基接種法），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時，加入吲哚試劑數(shù)滴，靜置半分鐘，觀察結(jié)果（培養(yǎng)物液面上層呈玫瑰紅色為陽性，不變色者為陰性）。結(jié)果：見示教管。5.苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)組成：苯丙氨酸培養(yǎng)基+三氯化鐵。原理：某些細(xì)菌具有苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫氨生成苯丙酮酸，加入三氯化鐵試劑螯合成綠色化合物。方法：將待檢菌接種到苯丙氨酸培養(yǎng)基中（液體培養(yǎng)基接種法

27、），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時，加入三氯化鐵試劑，觀察結(jié)果（綠色為陽性，不變色為陰性）。結(jié)果：見示教管。6.尿素酶試驗(yàn)組成：尿素培養(yǎng)基+指示劑（酚紅）。原理：具有尿素酶的細(xì)菌能分解尿素產(chǎn)氨，使培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑變紅色。方法：將待檢菌接種到尿素培養(yǎng)基中（半固體培養(yǎng)基接種法），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時，觀察結(jié)果（培養(yǎng)基變紅為陽性，反之為陰性）。結(jié)果：見示教管。7.枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)組成：枸櫞酸鹽+指示劑（溴麝香草酚藍(lán)）原理：當(dāng)細(xì)菌可以利用銨鹽作為唯一的氮源，同時利用枸櫞酸鹽為唯一碳源，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基生長，并分解枸櫞酸鹽為碳酸鹽，使培養(yǎng)基產(chǎn)堿，指示劑溴麝香草酚藍(lán)變色。方法：將將待檢

28、菌接種到尿素培養(yǎng)基中（半固體培養(yǎng)基接種法），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時，觀察結(jié)果（培養(yǎng)基由綠色變成藍(lán)色，則為陽性，不變色則為陰性）。結(jié)果：見示教管。8.氧化發(fā)酵（O/F）試驗(yàn)組成：無氧的葡萄糖發(fā)酵管。原理：根據(jù)細(xì)菌在有氧和無氧情況下對葡萄糖代謝情況，確定細(xì)菌的代謝類型。O型（有氧情況下分解糖），F(xiàn)型（有氧和無氧情況下分解糖），K型（無氧和有氧情況下均不分解糖）。方法：取2支含葡萄糖培養(yǎng)管，置沸水中，驅(qū)除培養(yǎng)基中的氧氣。冷卻后，2只培養(yǎng)管均接種待檢菌，1管加滅菌石蠟置于培養(yǎng)基上層隔絕空氣，1管不加石蠟，35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時，觀察細(xì)菌在有氧和無氧情況下對葡萄糖分解能力。結(jié)果：見示教管

29、。9.硝酸鹽還原試驗(yàn)組成：硝酸鹽培養(yǎng)基+醋酸+對氨基苯磺酸+-萘胺。原理：某些細(xì)菌還原硝酸鹽生成亞硝酸鹽，與醋酸生成亞硝酸，與對氨基苯磺酸生成重氮苯磺酸，加入-萘胺生成偶氮苯磺酸，形成紅色化合物。方法：將待檢菌接種到硝酸鹽培養(yǎng)基中，35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時，加入硝還試驗(yàn)甲和乙試劑，觀察結(jié)果（紅色為陽性，不變紅為陰性）。結(jié)果：見示教管。注意事項(xiàng)：本試驗(yàn)陰性結(jié)果可能有兩種情況：真陰性和假陰性，通常要用Zn粉還原試驗(yàn)驗(yàn)證是否是假陰性。10.氧化酶試驗(yàn)組成：氧化酶試劑（鹽酸二甲基對苯二胺或鹽酸四甲基對苯二胺）。原理：細(xì)菌具有氧化酶，可與氧化酶試駕反應(yīng)生成紅色化合物。方法：用濾紙條沾取待檢菌，吸管

30、滴加氧化酶試劑，變紅色為陽性，不變色為陰性。結(jié)果：見操作。11.觸酶試驗(yàn)組成：觸酶試劑（H2O2）。原理：細(xì)菌具有觸酶（過氧化氫酶），能分解H2O2，產(chǎn)生氧分子，出現(xiàn)氣泡。方法：挑取待檢菌培養(yǎng)物于潔凈玻片上，滴加3% H2O2數(shù)滴，觀察結(jié)果，出現(xiàn)氣泡為陽性，不出現(xiàn)氣泡為陰性。結(jié)果：見操作。12.凝固酶試驗(yàn)組成：新鮮抗凝血漿。原理：金黃色葡萄球菌具有游離型凝固酶，可使新鮮抗凝血漿重新發(fā)生凝固。方法：將待檢菌接種到1：4稀釋的新鮮抗凝血漿，置37水浴3-4h，觀察結(jié)果，血漿凝固為陽性，不凝固為陰性。結(jié)果：見示教管。13.KIA復(fù)合試驗(yàn)（克氏雙糖鐵）組成：培養(yǎng)基+底物乳糖、葡萄糖（1/10）、酚紅、

31、硫代硫酸鈉、FeSO4。原理：該培養(yǎng)基使用酚紅作為指示劑，酸性呈黃色，堿性呈紅色。細(xì)菌若能發(fā)酵乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則斜面與底層呈黃色，且有氣泡。若只發(fā)酵葡萄糖不發(fā)酵乳糖，則斜面呈紅色，底層呈黃色。若分解硫代硫酸鈉產(chǎn)生硫化氫與鐵生成黑色硫化鐵，培養(yǎng)基變黑。方法：將待檢菌接種KIA培養(yǎng)基（固體斜面培養(yǎng)基接種法），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824小時，觀察結(jié)果。結(jié)果：見示教管。14.MIU復(fù)合試驗(yàn)組成：半固體培養(yǎng)基+底物色氨酸、尿素、酚紅原理：細(xì)菌具有脲酶可分解尿素產(chǎn)堿酚紅變色；細(xì)菌具有色氨酸酶分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，加入吲哚試劑培養(yǎng)基變紅，有動力的細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中沿穿刺線擴(kuò)散生長）。方法：將待檢菌接種M

32、IU培養(yǎng)基（穿刺接種），35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824小時，觀察動力和脲酶反應(yīng)后，再滴加吲哚試劑。結(jié)果：見示教管。消毒滅菌消毒滅菌即是用物理或化學(xué)方法來抑制或殺死外環(huán)境中及機(jī)體體表的微生物，以防止微生物污染或病原微生物傳播的方法。實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌方法主要為：紫外線殺菌和高壓蒸汽滅菌。1.紫外線殺菌試驗(yàn)原理：波長240-300nm的紫外線具有殺菌作用，其中以波長266nn紫外線殺菌作用最強(qiáng)。紫外線作用生物細(xì)胞的DNA，使DNA鏈上兩個相鄰的T以共價鍵結(jié)合，形成二聚體，干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌的變異或死亡。特點(diǎn)：殺菌效果受紫外線照射波長、距離、時間的影響；殺菌效果的穿透力弱，易被物品遮擋；殺菌

33、效果無選擇性（生物核酸亦受影響）。方法：將待檢菌接種到無菌培養(yǎng)基（連續(xù)密集劃線），使細(xì)菌均勻涂布于平板的表面，在紫外線燈下，開啟平板蓋的一半，距離紫外燈管1米以內(nèi)，接受紫外線照射30min，蓋好平板，35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824小時，觀察結(jié)果。結(jié)果：見示教平板。2.藥物敏感性試驗(yàn)（K-B法）所需物品：細(xì)菌菌種、MH瓊脂、無菌生理鹽水、0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管（1.5X108CFU/ml）、抗菌藥物紙片、無菌棉拭、鑷子、毫米尺、接種環(huán)。原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周圍擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌

34、的生長受到抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物敏感程度，并與該藥對測試菌的最小抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈越大，MIC越小。 方法：（1） 挑取孵育16-24h的血平叛上數(shù)個菌落置于生理鹽水管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。（2） 無菌棉拭蘸取菌液，在試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60度，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周。（3） 平板在室溫下干燥3-5min，用無菌鑷子將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片據(jù)平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm，35孵育16-18h，量取抑菌圈直徑。結(jié)果：（1） 結(jié)果解釋：用毫米尺量取抑菌圈直徑，

35、參照藥敏試驗(yàn)紙片結(jié)果解釋表的標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果，按敏感（S）、中介（I）、耐藥（R）報告。（2） 質(zhì)量控制：使用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)藥物的抑菌圈直徑大小影落在質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌圈預(yù)期值范圍內(nèi)。若超出該范圍，應(yīng)視為失控而不發(fā)出報告，須及時查找原因，予以糾正。（3） 影響因素：多種因素影響試驗(yàn)結(jié)果。1. 培養(yǎng)基的質(zhì)量（不同培養(yǎng)基營養(yǎng)成分差距頗大，不同的細(xì)菌需要不同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，非苛養(yǎng)菌常用的培養(yǎng)基為MH瓊脂）2. 藥敏紙片的質(zhì)量（藥敏紙片含有定量的抗菌藥物，需避光冷藏，具有一定的有效期）3. 接種菌量（必須定量，定量的抗菌藥物抑菌效果有限，試驗(yàn)結(jié)果才能具有可比性）4. 試驗(yàn)操作質(zhì)量（平板的涂

36、布、紙片的貼布）5. 孵育條件（依據(jù)細(xì)菌生長需不同培養(yǎng)條件而有所不同）6. 抑菌圈測量工具的精度（測量尺的精度應(yīng)至少達(dá)到毫米）（4） 注意事項(xiàng)1. 細(xì)菌對抗菌藥物的敏感性常常發(fā)生變異，藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果僅供臨床上選用藥物參考。2. 藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用臨床治療可能會出現(xiàn)體外敏感，體內(nèi)無效的情況。3. 藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用臨床治療亦可出現(xiàn)體外中介，體內(nèi)可能有效的情況。常用儀器設(shè)備使用說明1.高壓蒸汽滅菌器使用說明1.1構(gòu)造 高壓蒸汽滅菌器是一個雙層的金屬圓筒，兩層之間盛水，外層堅(jiān)厚，其上或前方有金屬厚蓋。蓋旁附有螺旋，借以緊閉蓋門，使蒸汽不能外溢。通過加熱或通電的方式，使內(nèi)部的蒸汽壓力和溫度

37、升高，繼而筒內(nèi)的壓力和溫度也會升高。高壓蒸汽滅菌器上裝有排氣閥、安全閥，以調(diào)節(jié)滅菌器內(nèi)壓力，裝有的溫度計(jì)及壓力表以示內(nèi)部溫度和壓力。滅菌器內(nèi)裝有帶孔的金屬擱板，用以放置帶滅菌的對象。1.2 使用方法（1）加水至鍋內(nèi)達(dá)規(guī)定的水平面，放入欲滅菌物品，把鍋蓋按對稱的螺旋先后對稱用力扭緊（切勿單個依次扭緊），使鍋蓋確實(shí)均勻密閉。（2）用煤氣爐或通電加熱，見壓力表指針打34kPa時，打開排氣閥門，使器內(nèi)冷空氣逸出，保證器內(nèi)溫度和壓力表一致（冷空氣若不全部排出，壓力表上指示壓力和溫度均不正確，影響滅菌效果）。待冷空氣全部排出后，關(guān)閉排氣閥。（3）繼續(xù)加熱，同時注視壓力表，器內(nèi)壓力又逐步升高，直至壓力表指在

38、所需數(shù)字（103.43kPa），調(diào)節(jié)安全閥，使滅菌器內(nèi)的壓力維持在該值上下，維持20-30min。滅菌時間到達(dá)后，停止加熱，待壓力自行下降至零時，然后徐徐開放排氣閥，使滅菌器內(nèi)的壓力與外界壓力完全一致，打開滅菌器蓋，取出滅菌后的物品。1.3. 適用范圍 高壓蒸汽滅菌法是最可靠的滅菌方法之一，凡耐高溫和潮濕的物品均可采用本法進(jìn)行滅菌，常用于手術(shù)器械、培養(yǎng)基、生理鹽水、敷料等棉制品、玻璃制品、傳染性廢棄物等物品滅菌。1.4 注意事項(xiàng)（1）檢查排氣活塞及安全閥門，特別是壓力表的性能是否正常，以免發(fā)生危險。（2）滅菌物品不應(yīng)放置過擠，妨礙蒸汽流通，影響滅菌效果。（3）滅菌開始時必須將器內(nèi)冷空氣完全排除

39、，否則壓力表上所示壓力并非全部是蒸汽壓力（否則部分是冷空氣），滅菌將不徹底。（4）滅菌過程中及滅菌完畢，切不可突然打開排氣閥放氣加壓，以免瓶內(nèi)液體外溢。2.干熱滅菌器（干烤箱）使用說明構(gòu)造 干烤箱是由雙層鐵板制成的長方形金屬箱，外壁內(nèi)層裝有隔熱石棉板，箱頂有孔，供放置溫度計(jì)及空氣流通的用途。箱底有加熱的電爐，另有鼓風(fēng)機(jī)可加速箱內(nèi)的冷熱空氣的對流，使箱內(nèi)溫度短時間內(nèi)即可達(dá)到一致。箱內(nèi)有金屬板架數(shù)個，可將干烤箱分隔呈數(shù)層，供放置滅菌物品用。箱的旁邊有控制系統(tǒng)，用以調(diào)節(jié)和控制箱內(nèi)的溫度。方法 將待滅菌的耐熱物品包裝后放入箱內(nèi)，關(guān)閉箱門，打開通氣孔，通電加熱，使箱內(nèi)溫度升高至160后，保持2h，即可達(dá)

40、到滅菌的目的。滅菌結(jié)束后，關(guān)閉電源停止加熱，待箱內(nèi)溫度自然下降至40以下時，方可開門取物。注意事項(xiàng)1. 箱內(nèi)溫度不可超過180，否則棉塞和包裝紙將會被烤焦，甚至燃燒。2. 滅菌后，必須等箱內(nèi)溫度下降至與外界溫度相差不大時，方可開門取物，否則冷空氣突然進(jìn)入，易引起玻璃炸裂和熱空氣外溢傷害取物者。3. 本法適用于耐高溫、耐干燥的物品的滅菌（如玻璃、陶瓷器皿），對不耐高溫和不耐干燥的物品不可使用該法滅菌。 3.除菌濾器適用說明原理 濾過除菌是利用機(jī)械作用除去液體中細(xì)菌的方法。用于除菌的器具稱為除菌濾器，有用濾板過濾，如蔡氏濾器，玻璃濾器；用用濾膜過濾?，F(xiàn)在較多采用的是濾膜過濾器，濾膜允許通過的最大直

41、徑有0.1、0.2、0.4等規(guī)格。濾器種類較多，可分為正壓濾器和負(fù)壓濾器兩種。正壓濾器的原理是在濾膜上方施加壓力，使液體通過濾膜，除去細(xì)菌，如常用的針頭濾器。負(fù)壓濾器的原理是在濾膜下方抽取空氣，造成負(fù)壓，使濾膜上方的液體在負(fù)壓得作用下通過濾器，除去細(xì)菌。方法 （針頭濾器法）取注射器一支，吸取一定量的細(xì)菌液體培養(yǎng)物，將以滅菌的針頭濾器的前端與注射器相連，推動注射器的內(nèi)筒，施加壓力，使液體通過濾膜，用無菌的試管接觸濾液，然后將濾液接種于肉湯培養(yǎng)基中，37過夜培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長，判斷濾過除菌的效果。注意事項(xiàng)1. 過濾時用力要均勻，不可過大，亦不可回抽注射器，以免濾膜受損，影響除菌效果。2. 本法

42、適用于某些不能用加熱方法進(jìn)行滅菌的液體物品的除菌（如血清、蛋白質(zhì)、酶等）。3. 本法只能除去液體中的細(xì)菌，不能除去比細(xì)菌小的其他微生物（如病毒、四體等）。PCR儀的使用方法點(diǎn)擊次數(shù)：821 發(fā)布時間：2011-3-18步驟：   1、開機(jī)：打開開關(guān)，視窗上顯示“SELF TEST”,顯示10秒中后，顯示RUN-ENTER菜單：   準(zhǔn)備執(zhí)行程序。       2、放入樣本管，關(guān)緊蓋子。   3、如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序，則直接按Proceed，用箭頭鍵選擇已儲存的程序，按Proceed，則屏幕顯示：  按

43、Proceed選擇ENABLE，則開始執(zhí)行程序。   4、如果要輸入新的程序，則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按Proceed，屏幕顯示  按Proceed，1)選擇NEW,命名新的程序，最多8個字母，輸入后按Proceed確認(rèn)(如何輸入字母、數(shù)字)。   2)輸入程序步驟：名字輸入后，顯示  按Proceed則可以輸入溫度(0100)，按Proceed確認(rèn)后，則可以輸入孵育時間，用Select鍵移動光標(biāo)，輸入數(shù)字，完成后按Proceed確認(rèn)，跳到下一步，輸入方式同上。  3)選擇GOTO，輸入循環(huán)步驟時鏈接

44、到第幾步(循環(huán)數(shù)最多可達(dá)9999次)(為實(shí)際循環(huán)數(shù)1)。   4) 選擇option,顯示  再選擇increment,按Proceed確認(rèn)，輸入初始的溫度，確認(rèn)后輸入時間，按Proceed確認(rèn)，然后輸入每個循環(huán)增加或減少的溫度，增加用正值，減少用負(fù)值(0.16)，按Proceed確認(rèn)。  選擇extend, 按Proceed確認(rèn),輸入每個循環(huán)增加或減少的時間(6060秒)，按Proceed確認(rèn)。   選擇slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(0.11.5)按Proceed確認(rèn)，然后輸入加熱或致冷的速度，按Proceed確認(rèn)。 

45、 4)選擇End,輸入結(jié)束步驟。   5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開始運(yùn)行。   6、其它：用pause可以暫停一個運(yùn)行的程序，再按一次繼續(xù)程序。   用stop或Cancel可停止運(yùn)行的程序。   編輯程序：   1、可以用Cancel鍵刪除輸錯的值，輸入新的值后按Proceed確認(rèn)。   2、對于未輸完的程序，要先輸入END，按Proceed將程序儲存后才能刪除。   3、刪除已經(jīng)儲存的程序：從RUN-ENTER菜單中選擇RUNPROGRAM，按Proceed，顯示主菜單，選擇DELET,用Select選擇刪除。  4