浮游菌及表面菌檢測

1、浮游菌（浮游菌（Airborne Microbe）工作流程備料單 123456 此處添加目錄標題7菌落計數(shù) 潔凈室污染源浮游菌表面菌培養(yǎng)基成分接受指令結果觀察、記錄填寫記錄寫報告采樣菌落計數(shù)恒溫箱培養(yǎng)制作平板滅菌備料制定計劃查閱依據(jù)工作流程 備料單備料單v平皿平皿 2套套v消毒劑消毒劑(75%酒精酒精)v采樣儀采樣儀v棉花棉花v鑷子鑷子v大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)1520ml/皿皿X2污染物種類v通常所指的空氣污染物主要有以下三類通常所指的空氣污染物主要有以下三類 懸浮在空氣中的固態(tài)、液態(tài)微粒 霉菌、致病菌等懸浮在空氣中的微生物； 各種對人體或生產過程有害的氣體。由于空

2、氣凈化的目的與對象不同，凈化的內容、方法和衡量標準也不同。以潔凈室為對象的空氣凈化的目的，就是最大可能地把空氣介質中的懸浮微粒除掉，對于生物潔凈室，還要控制有生命微粒。 2.2 污染物傳播途徑 v危害生產工藝的主要污染源主要有： 人員；送風；機器及其他生產設備； 原材料與經(jīng)過加工的原材料；包裝材料； 生產工藝用各種介質及潔凈用化學品； 服裝與其他設備中的紡織物； 辦公設備與辦公材料；參觀人員； 維修人員，特別是那些來自潔凈區(qū)外部的人員。v與產品接觸的污染物有兩種來源 生產工藝之內產生； 從外部環(huán)境傳入生產環(huán)境之中。 污染源 潔凈室污染源潔凈室污染源 新風帶入的塵粒和微生物； 作業(yè)人員發(fā)塵和散菌

3、； 建筑圍護結構、設施的產塵； 設備及產品生產過程的產塵。室內空氣的主要污染物質 污染發(fā)生源污染發(fā)生源 粒狀污染物粒狀污染物 有害氣體有害氣體 人體人體粉塵、皮屑、污垢、細菌、纖維、粉塵、皮屑、污垢、細菌、纖維、化妝品化妝品 體臭、體臭、CO2、氨、水蒸氣、氨、水蒸氣吸煙吸煙粉塵（焦油、尼古丁等）、二甲粉塵（焦油、尼古丁等）、二甲硝酸銨等硝酸銨等 CO、CO2、NO、NO2、甲醛、丙烯醛、甲醛、丙烯醛、碳氫化合物碳氫化合物 辦公設備辦公設備 紙張、家具的纖維肌塵粒紙張、家具的纖維肌塵粒 臭氧、氨、溶劑類（臭氧、氨、溶劑類（VOC） 機械運轉設備機械運轉設備 轉動設備磨損的粉塵、纖維、碳轉動設備

4、磨損的粉塵、纖維、碳化油脂等化油脂等 潤滑油揮發(fā)物潤滑油揮發(fā)物 燃燒器具燃燒器具 煙塵煙塵 CO、CO2、NO、NO2、SO2、甲醛、甲醛、碳氫化合物碳氫化合物 建筑材料建筑材料 細菌、霉菌、璧虱、石棉纖維、細菌、霉菌、璧虱、石棉纖維、玻璃纖維、粉塵等玻璃纖維、粉塵等 甲醛、氡氣、溶劑、粘接劑中的有機溶劑甲醛、氡氣、溶劑、粘接劑中的有機溶劑揮發(fā)物揮發(fā)物 清洗和滅菌清洗和滅菌噴射劑（氟化碳氫化合物）、殺菌劑、防噴射劑（氟化碳氫化合物）、殺菌劑、防霉劑、溶劑、洗滌劑的揮發(fā)物霉劑、溶劑、洗滌劑的揮發(fā)物 人體各部位的帶菌數(shù)人體各部位的帶菌數(shù)身體部位身體部位細菌細菌身體部位身體部位細菌細菌手手10010

5、00個個/2鼻液鼻液107g/ml額額104105個個/2尿液尿液約約108g/ml頭發(fā)頭發(fā)約約106個個/2糞便糞便108個個/g液下液下106107個個/2著無菌服時的人體散發(fā)細菌量動作動作溫度溫度/濕度濕度/%浮游浮游菌數(shù)菌數(shù)沉降沉降菌數(shù)菌數(shù)附著附著菌數(shù)菌數(shù)人體散發(fā)菌量人體散發(fā)菌量個個(人人min) -1 平均值個平均值個(人人min)-1踏步踏步29.827.425.825.426.070856784651573275317701750137650938940715632918833021223216522703472238921381870239121.420.03029982255

6、616047911830612603341起立起立坐下坐下26.025.223.421.420.0686365312817978674039313751821348431286141941404471651502101496475216271172抬臂抬臂25.225.220.06263285894086096311476705560722577745681GB/T 162931996 潔凈室（區(qū)）潔凈室（區(qū)）clean room (area) 對塵粒對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結構、裝備及其使用均具有減少對域。其建筑結構、裝

7、備及其使用均具有減少對該區(qū)域內污染源的介質、產生和滯留的功能。該區(qū)域內污染源的介質、產生和滯留的功能。潔凈室的定義潔凈室的定義潔凈室是指空氣潔凈度達到規(guī)定級別的可供工作的空潔凈室是指空氣潔凈度達到規(guī)定級別的可供工作的空間。其功能是控制各種微粒（主要是塵埃粒子）的污間。其功能是控制各種微粒（主要是塵埃粒子）的污染，染，來達到滿足精密產品的生產與科學實驗活動。來達到滿足精密產品的生產與科學實驗活動。潔潔凈室絕不是僅限于凈室絕不是僅限于“潔凈潔凈”，不同的行業(yè)與部門對溫，不同的行業(yè)與部門對溫度、濕度、照明、噪聲、靜電、微振都有相當要求，度、濕度、照明、噪聲、靜電、微振都有相當要求，是集建筑裝飾（與大

8、氣相對隔斷的密閉裝修）、凈化是集建筑裝飾（與大氣相對隔斷的密閉裝修）、凈化空調、動力電、照明電、工藝管道等多種專業(yè)技術于空調、動力電、照明電、工藝管道等多種專業(yè)技術于一體的多功能的綜合整體產物一體的多功能的綜合整體產物.浮游菌（浮游菌（Airborne Microbe）懸浮在空氣中的活微生物粒子，懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。數(shù)。本標準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中本標準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中浮游菌測試條件、測試方法。浮游菌測試條件、測試方法。本標準適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)，本

9、標準適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)，無菌室或無菌區(qū)域（包括潔凈工作臺）的浮游無菌室或無菌區(qū)域（包括潔凈工作臺）的浮游菌的測定和環(huán)境的驗證。菌的測定和環(huán)境的驗證。參考標準：參考標準：2.4 潔凈室分類 v2.4.1 按用途分類 工業(yè)潔凈室； 生物潔凈室一般生物潔凈室；生物安全潔凈室。一般生物潔凈室；生物安全潔凈室。v2.4.2 按氣流流型分類 單向氣流潔凈室； 非單向流潔凈室； 混合流潔凈室； 輻（矢）流潔凈室。 采樣器原理采樣器原理撞擊法撞擊法 impacting method撞擊式空氣微生物采樣器采樣，撞擊式空氣微生物采樣器采樣，通過抽氣動力作用，使空氣通過狹縫通過抽氣動力作用，使空氣通過狹縫

10、或小孔而產生高速氣流，從而使懸浮或小孔而產生高速氣流，從而使懸浮在空氣中的帶菌粒子撞擊到瓊脂平板在空氣中的帶菌粒子撞擊到瓊脂平板上，經(jīng)上，經(jīng) 35 ，48 h培養(yǎng)后，計算每培養(yǎng)后，計算每立方米空氣中所含的細菌菌落數(shù)的采立方米空氣中所含的細菌菌落數(shù)的采樣測定方法。樣測定方法。最小采樣量最小采樣量潔凈度級別潔凈度級別采樣量（采樣量（L/次）次）100級級100010000級級500100000級級100300000級級100采樣點的位置采樣點的位置v 采樣點位置可以同懸浮粒子測試點。采樣點位置可以同懸浮粒子測試點。v 工作區(qū)測點位置離地工作區(qū)測點位置離地0.81.5m左右（略高于工作面）。左右（略

11、高于工作面）。v 送風口測點位置離開送風面送風口測點位置離開送風面30cm左右。左右。v 可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點?？稍陉P鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。v 采樣注意事項采樣注意事項v 對于單向流或送風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方對于單向流或送風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。向；對于非單向流，采樣管口向上。v 布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口1m以上以上v 采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側,并盡量少走動并盡量少走動v 采取一切措施防止采樣過程

12、的污染和其他可能對樣本的污采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。染。 采樣點布置采樣點布置臺臺臺陰性對照臺采樣超凈臺每個測點的浮游菌平均濃度的計算每個測點的浮游菌平均濃度的計算v浮游菌平均濃度（個浮游菌平均濃度（個/m）=菌菌落數(shù)落數(shù)/采樣量采樣量v示例示例1：某測點采樣量為：某測點采樣量為400L,菌落數(shù)為菌落數(shù)為1，則：，則：v浮游菌平局濃度浮游菌平局濃度=1/0.4=2.5個個/mv示例示例2：某測點采樣量為：某測點采樣量為2m，菌落數(shù)為菌落數(shù)為3，則：，則：v浮游菌平局濃度浮游菌平局濃度=3/2=1.5個個/m測試規(guī)則測試規(guī)則測試條件在測試之前，要對潔凈室（區(qū)）相關參數(shù)

13、進行預先測試，這類測試將會提供懸浮粒子的環(huán)境條件，例如：這種預先測試可包括：溫度和相對濕度的測試，潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時），溫度在1826，相對濕度在45%65%為宜室內送風量或風速的測試，或壓差的測試高效過濾器的泄漏測試GB/T 162931996 單向流單向流unidirectional air flow（曾稱（曾稱為層流為層流laminar flow）沿著平行流線，以）沿著平行流線，以單一通路以一定流速向單一方向流動的單一通路以一定流速向單一方向流動的氣流。氣流。GB/T 1629319963.9 非單向流非單向流nonunidirectio

14、nal air flow（曾稱為亂流（曾稱為亂流turbulent flow） 具有多具有多個通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的，個通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的，不滿足單向流定義的氣流。不滿足單向流定義的氣流。大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）v酪蛋白胰酶消化物酪蛋白胰酶消化物 15g 提供氮源、維生素和生提供氮源、維生素和生長因子長因子v大豆粉木瓜蛋白酶消化物大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5g 提供氮源、維生素和生提供氮源、維生素和生長因子長因子v氯化鈉氯化鈉 5g 調節(jié)滲透壓調節(jié)滲透壓v瓊脂瓊脂 15g 凝固劑凝固劑v純化水純化水 1000mL3035 48h 測試步驟u 測試前

15、儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。u采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜一直放在被測房間內。u用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。u 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。u 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干。u采樣者應穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。u 狹縫式采樣器的采樣程序u儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并調好流量、轉盤轉速

16、。u 關閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調節(jié)采樣器縫隙高度。u置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉動定時器，根據(jù)采樣量設定采樣時間。沉降菌和浮游菌的區(qū)別是什么？只是捕捉時的形態(tài)差異。只是捕捉時的形態(tài)差異。沉降菌指落在地面或物體表面的灰塵中攜帶的細菌；沉降菌指落在地面或物體表面的灰塵中攜帶的細菌；浮游菌指在空氣中漂浮的塵埃所攜帶的細菌浮游菌指在空氣中漂浮的塵埃所攜帶的細菌 。見相關國家標準見相關國家標準沉降菌沉降菌 GB/T 16294-2010浮游菌浮游菌 GB/T 16293-2010表面菌附在人體表皮或設備表面的微生物附在人體表皮或設備表面的微生物接受指令結果觀察、記錄填寫記錄寫

17、報告采樣與制作平板菌落計數(shù)恒溫箱培養(yǎng)實驗準備滅菌備料制定計劃查閱依據(jù)工作流程查閱依據(jù)：表面微生物表面微生物v微微 生生 物物 在表面附著的程度受表面特性、微生物在表面附著的程度受表面特性、微生物自身和存在的其他材料自身和存在的其他材料(如潤滑劑如潤滑劑)的影響。污染的影響。污染源也會影響到附著程度。源也會影響到附著程度。v為獲取微生物，所進行的處理包括漂洗為獲取微生物，所進行的處理包括漂洗(同時施以同時施以物理力物理力)或直接表面取樣。表面活性劑可以用于提或直接表面取樣。表面活性劑可以用于提高回收，但應認識到，較高濃度的表面活性劑可高回收，但應認識到，較高濃度的表面活性劑可能會抑制微生物能會抑

18、制微生物v在在 相相 當當 一部分材料中，有些微生物可能以一部分材料中，有些微生物可能以生物生物膜膜的形式出現(xiàn)，在生物膜的結構中，微生物在牢的形式出現(xiàn)，在生物膜的結構中，微生物在牢固附著于材料表面上的被囊狀包圍。生物膜狀微固附著于材料表面上的被囊狀包圍。生物膜狀微生物可能會表現(xiàn)更強的抗滅菌性生物可能會表現(xiàn)更強的抗滅菌性采樣方法：采樣方法：袋蠕動超聲洗脫攪動(帶或不帶?，樦?渦旋式混合 沖洗攪切(碎解)擦拭一步到位型一步到位型接觸板 、 瓊脂覆蓋擦拭擦拭含有可吸收取樣材料的棉拭子通常被固定于桿或把手上。含有可吸收取樣材料的棉拭子通常被固定于桿或把手上。樣品材料是不是可溶性的都行。樣品材料是不是可

19、溶性的都行。通常的使用方法是用緩沖液或液體培養(yǎng)基濕潤棉拭，用通常的使用方法是用緩沖液或液體培養(yǎng)基濕潤棉拭，用棉拭擦拭界定好的取樣表面。在有些情況下，可以先濕棉拭擦拭界定好的取樣表面。在有些情況下，可以先濕潤樣品表面，然后用干棉拭擦拭，這樣可以提高回收效潤樣品表面，然后用干棉拭擦拭，這樣可以提高回收效率。隨后將棉拭放至緩沖溶液或液體培養(yǎng)基中，并攪動率。隨后將棉拭放至緩沖溶液或液體培養(yǎng)基中，并攪動以從棉拭上取下微生物。另外，有時也可用可溶性棉拭，以從棉拭上取下微生物。另外，有時也可用可溶性棉拭，使棉拭溶解于緩沖液或液體培養(yǎng)基中。則用過濾、平板使棉拭溶解于緩沖液或液體培養(yǎng)基中。則用過濾、平板計數(shù)或其

20、他方法分析所得到的懸液計數(shù)或其他方法分析所得到的懸液擦拭擦拭 是是 從不規(guī)則形狀產品或相對難以接近的區(qū)從不規(guī)則形狀產品或相對難以接近的區(qū)域取樣的有效方法，該方法對取樣面積必須大時域取樣的有效方法，該方法對取樣面積必須大時也有效也有效但但 該該 方方 法因擦拭方式的不同而更易出錯。而且，法因擦拭方式的不同而更易出錯。而且，通過擦拭不太可能將樣品上所有的微生物都收集通過擦拭不太可能將樣品上所有的微生物都收集到。有些微生物可能會被棉拭本身吸附，從而不到。有些微生物可能會被棉拭本身吸附，從而不會被測到。會被測到。棉棉 拭拭 中中 不應有微生物殺滅劑或微生物抑制劑不應有微生物殺滅劑或微生物抑制劑在在 生生 物物 負載估計過程中，洗脫液可用于從產負載估計過程中，洗脫液可用于從產品上取下微生物品上取下微生物;傳送培養(yǎng)基可用于將取下的傳送培養(yǎng)基可用于將取下的微生物移去計數(shù)微生物移去計數(shù);稀釋液可用于獲得含有可計稀釋液可用于獲得含有可計數(shù)微生物的懸液。數(shù)微生物的懸液。洗洗 脫脫 液液 和稀釋液的特性對所用方法的效率有和稀釋液的特性對所用方法的效率有顯著影響。顯著影響。在選擇稀釋液或洗提液時，應注意它們的成分在選擇稀釋液或洗提液時，應注意它們的成分(如組成、濃度、滲透性和如組成、濃度、滲透性和pH) 這些成分不應這些成分不應使微