常用緩沖液配置.

1、實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案1)1 M Tris-HCI (pH7.4, 7.6, 8.0) 組份濃度：1 M Tris-HCI配制量：1 L配制方法：1. 稱量 121.1 g Tris 置于 1 L 燒杯中。2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙釶H 值值濃濃 HCI7.4約約 70ml7.6約約 60ml8.0約約 42 ml值。4. 將溶液定容至 1 L。5. 咼溫咼壓火菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的pH 值隨溫度的變 化差異很大，溫度每升咼lMTris- HCi Buffer (PH7.4, 76 8.0)100ml500

2、mM EDTA(PH8.O20ml1C,溶液的 pH 值大約降低 0.03 個(gè)單位。2) 10XE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L配制方法：2. 向燒杯中加入約 800 ml 的去離子水，均勻混合。3. 將溶液定容至 1 L 后，咼溫咼壓火菌。4. 室溫保存。3) 1.5 M Tris-HCl (pH8.8)組份濃度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 稱量 181.7 g Tris 置于 1 L 燒杯中。2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 用濃鹽酸調(diào)

3、節(jié) pH 值至 8.8。4. 將溶液定容至 1 L。5. 咼溫咼壓火菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的pH 值隨溫度的變 化差異很大，溫度每升高 C,溶液的 pH 值大約降低 0.03 個(gè)單位。4) 3 M 醋酸鈉(pH5.2)組份濃度：3M 醋酸鈉配制量：100ml配制方法：1. 稱量40.8g NaAc 3H2O置于100-200ml燒杯中， 加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?. 加入冰醋酸調(diào)節(jié) pH 值至 5.23. 加去離子水將溶液定容至 100ml4 咼溫咼壓火菌后，室溫保存。5) PBS Buffer組份濃度： 137 mM NaCl

4、, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mMKH2PO4配制量：1 L配制方法：應(yīng)】sgKCIP P 2g2gNa2HPO4L42gD.27g2. 向燒杯中加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加濃鹽酸將 pH 值調(diào)節(jié)至 7.4，然后加入去離子水將溶液定容至 1 L04. 咼溫咼壓火菌后，室溫保存。注意：上述 PBS Buffer 中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和 0.5 mM MgCl2。6)10 M 醋酸銨組份濃度：10 M 醋酸銨配制量：100 ml配制方法：1. 稱量 77.1 g 醋酸銨置于 100200 ml 燒杯

5、中，加入約 30 ml的去離子水?dāng)嚢枞?解。2. 加去離子水將溶液定容至 100 mlo3. 使用 0.22 mm 濾膜過濾除菌。4. 密圭寸瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7) 苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)配制方法：1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離， 而異戊醇則有助于消除抽提過 程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配制方法： 將 Tris-HCI 平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24 :1)混合均勻 后，移入棕色玻璃瓶中 4C保存。8)10% (W/V) SD

6、S組份濃度：10% (W/V)SDS 配制量：100ml配制方法：1.稱量 10g 高純度的 SDS 置于 100-200ml 燒杯中，加入約80ml 的去離子水，68C加入溶解2滴加濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值至 7.23將溶液定容至 100ml 后，室溫保存。9)2 N NaOH組份濃度：2 N NaOH 配制量：100 ml配制方法：1. 量取 80 ml去離子水置于 100200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放 熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2. 稱取 8 g NaOH 小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3. 待 NaOH 完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100ml。4. 將溶

7、液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。10) 2.5 N HCl組份濃度：2.5 N HCl 配制量：100 ml配制方法：1. 在 78.4 ml 的去離子水中加入 21.6 ml 的濃鹽酸(11.6 N)，均勻混合。2. 室溫保存。11) 5 M NaCl組份濃度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1. 稱取 292.2 g NaCI 置于 1 L 燒杯中，加入約 800 ml 的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至 1 L 后，適量分成小份。3. 高溫高壓滅菌后，4C保存。11) 20% (W/V) Glucose組份濃度：20% (W/V) Glucose配制量：100 m

8、l配制方法：1. 稱取 20 g Glucose 置于 100200 ml 燒杯中，加入約 80 ml的去離子水后，攪拌 溶解。2. 加去離子水將溶液定容至 100 ml。3. 高溫高壓滅菌后，4C保存。12) Solution 1(質(zhì)粒提取用)組份濃度：25 mM Tris-HCl (pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mMGlucose 配制量：1 L配制方法：IM Tris-HCI( PH8.0)25ml(K5M EDTA (PH8.0)20ml20 % Glucose ( LHM)45mJdH2O910ml3.使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml

9、的 RNase A (20mg/ml)。13) Solution 11(質(zhì)粒提取用)組份濃度：200mM NaOH，1% (W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于KOAcI47gCH3COOH57.5mf500ml 燒杯中 10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2加滅菌水定容至 500ml，充分混勻3.室溫保存， 此溶液保存時(shí)間最好不要超過一個(gè)月 注意： SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?4) Solution III(質(zhì)粒提取用)組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：2. 加入 300 ml 去離子水后攪拌溶解。3

10、. 加去離子水將溶液定容至 500 ml。4. 咼溫咼壓火菌后，4 C 保存。15) 0.5 M EDTA(pH8.0)組份濃度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：稱取 186.1 g Na2EDTA2H2O，置于 1 L 燒杯中。2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至 8.0 (約 20 g NaOH)。注意：pH 值至 8.0 時(shí)，EDTA 才能完全溶解。4. 加去離子水將溶液定容至 1 L。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。16) 1 M DTT組份濃度：1 M DTT 配制量：20 ml 配制方法：1. 稱取

11、3.09 g DTT，加入到 50 ml 塑料離心管內(nèi)。2. 加 20 ml 的 0.01 M NaOAc (pH5.2)，溶解后使用 0.22 mm濾器過濾除菌3. 適量分成小份后，-20C保存。17) 10 mM ATP組份濃度：10 mM ATP 配制量：20 ml配制方法：1. 稱取 121 mg Na2ATP 3H2O， 加入至U50 ml 塑料離心管內(nèi)。2. 加 20 ml 的 25 mM Tris-HCl (pH8.0)，攪拌溶解。3. 適量分成小份后，-20C保存。一.常用貯液與溶液1mol/L 亞精胺 （Spermidine） :溶解 2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體積

12、為10ml。分裝成小份貯存于-20C。1mol/L 精胺（Spermine）:溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使終體積為 10ml。分 裝成小份貯存于-20C。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate :將 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至 1L 后，用 0.22um 孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml 牛血清蛋白（BSA）:力卩 100mg 的牛血清蛋白（組分 V 或分子生物學(xué)試 劑級(jí)，無 DNA 酶）于 9.5ml 水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清 蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml， 然后

13、分裝成小份貯存于-20C。1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT）:在二硫蘇糖醇 5g 的原裝瓶中加32.4ml 水，分成小 份貯存于-20C?；蜣D(zhuǎn)移 100mg 的二硫蘇糖醇至微量離心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫蘇糖醇溶液。8mol/L 乙酸鉀（potassium acetate :溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中， 加水定容 到 100ml。1mol/L 氯化鉀 （KCl） :溶解 7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容 到 100ml。3mol/L 乙酸鈉（sodium acetate :溶解 40.8g 的三水乙酸鈉于約90ml 水中， 用冰 乙酸調(diào)溶液的 pH

14、至 5.2， 再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L），混合后形 成 EDTA 的三鈉鹽?；蚍Q取 186.1g的 Na2EDTA 2H2O 和 20g 的 NaOH， 并溶于 水中， 定容至 1L。1mol/L HEPES: 將 23.8gHEPES 溶于約 90ml 的水中，用NaOH 調(diào) pH （6.8- 8.2），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl :力卩 8.6ml 的濃鹽酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT :溶解 250mg 的 IPGT （異丙基硫代-&D-半乳

15、糖苷）于 10ml 水 中，分成小份貯存于-20C。1mol/LMgCI2:溶解 20.3g MgCI2 6H2O 于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF :溶解 174mg 的 PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20Co20mg/ml 蛋白酶 K （proteinase K）：將 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中，輕 輕搖動(dòng)，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝 成小份貯存于-20C。10mg/mlRnase （無 DNase）（ DNase free

16、RNase :溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml的 10mmol/L 的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解 后于水浴中煮沸 15min，使 DNA 酶失活。用 1mol/L 的 Tris HCl 調(diào) pH至 7.5, 于-20C貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/L 氯化鈉（NaCI）:溶解 29.2g 氯化鈉于足量的水中，定容至 100ml。10N 氫氧化鈉（NaOH）:溶解 400g 氫氧化鈉顆粒于約 0.9L 水的燒杯中（磁力攪 拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。10% SDS （十二烷基硫酸鈉）：稱取 100gSDS 慢慢轉(zhuǎn)移到約含 0.9L 的水的燒杯 中

17、，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）:溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使終體積 為 100ml。100%三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA 的試劑瓶中加入 100ml 水, 用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5% X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚&半乳糖苷）：溶解 25mg的 X gal 于 1ml 的 二甲基甲酰胺（DMF ），用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20Co成分及終濃度成分及終濃度配制配制 100 同溶液各成分的出雖同溶液各成分的出雖2% 聚旗糖聚旗糖（Rcoll* 400 型）

18、型） 工聚工聚乙烯毗咯垸酗乙烯毗咯垸酗 （PVP-4O）2%BSA（組組分分 V水水2g2g加水至恿體積為加水至恿體積為 100ml-20C貯存。成分及裟濃度成分及裟濃度配制配制 10ml 溶液徐溶液徐成分的用量成分的用量.5mol/LTrisClOOmmot 兒兒 MgC12I00mnioi/L DTT2mmot/L ATPSmmol/L 鹽酸收精胺（可選）鹽酸收精胺（可選）0.5mg/ml BSA 組分組分 V ）（可選）（可選） 水水5ml 1 nial/L 貯液貯液Lml 1 nicl/L 貯液貯液 Ind lnkd/L 貯液貯液200ul 100 mmol/L 貯液貯液 50ul 1

19、miDDRU 貯液貯液 0.5ml 10 mg/mL 貯貯液液 2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20C。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以購買到 100mmol/L 純 dNTPs 貯液，-80C可貯存至少 6 個(gè)月。 10mmol/L dNTP 混合液成分及終濃度成分及終濃度配制溶液丼成分的出鯉配制溶液丼成分的出鯉lOmmol/L dATP2ul 100 mniol/L dATP 貯液貯液lOmmol/L dCTP2ul IOOinmol/LdCTP 貯液貯液lOnunoVL dGTP2ul K)O inmol/LdGTP 貯液貯液lOm

20、mol/LdTTP2u1 100 mmol/L dTTP 貯液貯液水水12ul成分厘終濃度成分厘終濃度配制配制 Wml 溶液於咸分的用量溶液於咸分的用量質(zhì)呈濃度為質(zhì)呈濃度為 20%聚乙二醇聚乙二醇2.5mol/L 氯化訥氯化訥 水水50J111 5 mol/L嵐化油嵐化油 威威處處 1 川休川休航化航化補(bǔ)足補(bǔ)足 lOOmi成少及終濃度成少及終濃度配制配制【L 溶液各成分的用量溶液各成分的用量3OOmmol/L 檸機(jī)酸檸機(jī)酸：鈉鈉（】水水3mol/L 氯化鈉氯化鈉水水88.2g I753g 補(bǔ)足補(bǔ)足 1L加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積 100ml，用磁力攪拌器攪拌溶 解。溶解檸檬酸

21、三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L 水中，加幾滴 10N NaOH 溶液 調(diào) pH 為 7.0,用水補(bǔ)足體積至 1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）處理水加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的體積分?jǐn)?shù)為 0.1%。在 37C溫浴至少 12h,然后在 15 psi 條件下高壓滅菌 20min，以使殘余的 DEPC 失活。DEPC 會(huì)與 胺起反應(yīng)，不可用 DEPC處理 Tris 緩沖液。甲酰胺（deionized formamide）直接購買或加 Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器 輕輕攪拌 1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1 號(hào)濾

22、紙過濾除去樹脂后分成 小份，充氮?dú)庥?80C貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate buffe）按照下表所給定的體積，混合 1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二 鈉（雙堿）貯液，獲得所需 pH 的磷酸緩沖液。配制 1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4 H2O）貯液：溶解 138g 于足量水中，使終體積為 1L;1mol/L 磷酸氫 二鈉（Na2HPO4）貯液:I mol/L磷酸磷酸二氫鈉二氫鈉 Uni）1 mol/L磷酸磷酸氫二鈉氫二鈉（訕）（訕）最終最終 pH值值87712300K501506J8151856.2溶解 142g 于7752256373

23、52656.4685315t,56253756.6565435675104906.845055063906107.03306707.12807207.2成分及終濃度圈制limniJ各成分的用量lOrnrtxjVL Trii UC1 litimoLL EDTA*1!1L Ltml/L Trii HCi tplf7.4 ti.U 251?) )200ul 0.5JUOIALEDTA (pEi 8.09&呂mlTris 緩沖液（Tris-HCI buffer）將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中， 再根據(jù)所要求的pH （25C下）加一定量的 濃鹽酸濃鹽酸的體積濃鹽酸的體積(ml)pH8

24、+6142128J3S46566671376908-68+48.28.07+87.67.47.2(11.6N),用水調(diào)整終體積至 1L 二電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液 電泳緩沖液成分股終濃息成分股終濃息配制配制 IL溶液卜成分的用就溶液卜成分的用就2mol/LTris 堿堿JLmcVL乙酸乙酸100 nimcl/l-liDTA 水水24空空57J ml 的的冰乙嚴(yán)冰乙嚴(yán)(17-4 mol/L) 200ml 的的 0.5molZLEDTA (pH 8.0) 補(bǔ)足補(bǔ)足 IL成分及終濃度成分及終濃度配制配制 IL 涪液各戰(zhàn)分的用星涪液各戰(zhàn)分的用星445 mmoI/LTris 堿堿445 mniol/

25、L 硼酸鹽硼酸鹽10 nimol/L EDTA 水水54g27.5g 硼酸硼酸20 ml 的的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 補(bǔ)足補(bǔ)足 IL染料1%溴酚藍(lán)(bromophenol blue)加 1g 水溶性鈉型溴酚藍(lán)于 100ml 水中， 攪拌或渦旋混合直到完全溶解1%二甲苯青 FF (xyle ne cyan ole FF)溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 100ml010mg/ml 的溴化乙錠(ethidium bromide)小心稱取 1g 溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml 水， 用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于 4C貯存。凝膠上樣液（gel loading solutions）成分及終諛度成分及終諛度配制配制 10ml 溶液各成分用輦?cè)芤焊鞒煞钟幂?.3 N 氫氧化鈉氫氧化鈉6 mmol/L EDTA貽聚蕊糖貽聚蕊糖（400型）型）叮叮 5%渙甲酚緑渙甲酚緑0.25%二二甲苯青甲苯青 FF水水300ul 10N氮嶽化鈉氮嶽化鈉1 120ul