遺傳實驗02：果蠅唾腺染色體

1、遺傳學(xué)實驗二遺傳學(xué)實驗二果蠅唾腺染色體果蠅唾腺染色體的制備與觀察的制備與觀察一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康膐 1.練習(xí)剖取果蠅三齡幼蟲唾腺的方法；練習(xí)剖取果蠅三齡幼蟲唾腺的方法；o 2.掌握制作果蠅唾腺染色體標(biāo)本的技術(shù)；掌握制作果蠅唾腺染色體標(biāo)本的技術(shù)；o 3.觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征。觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征。二、實驗原理二、實驗原理o 雙翅類昆蟲雙翅類昆蟲(搖蚊、果蠅等搖蚊、果蠅等)幼蟲期的唾腺細(xì)幼蟲期的唾腺細(xì)胞很大，其中的染色體稱為胞很大，其中的染色體稱為唾腺染色體唾腺染色體(salivary chromosome)；o 這種染色體比普通染色體大得多，寬約這種染色體比普通染色體大得多，

2、寬約5m，長約長約400m，相當(dāng)于普通染色體的，相當(dāng)于普通染色體的100-150倍，因而又稱為倍，因而又稱為巨大染色體巨大染色體；o 唾腺染色體經(jīng)過多次復(fù)制而并不分開，大約唾腺染色體經(jīng)過多次復(fù)制而并不分開，大約有有1000-4000根染色體絲的拷貝，所以又稱根染色體絲的拷貝，所以又稱多線染色體多線染色體(polytene chromosome)；o 唾腺細(xì)胞中同源染色體互相靠攏呈現(xiàn)聯(lián)會唾腺細(xì)胞中同源染色體互相靠攏呈現(xiàn)聯(lián)會狀態(tài)狀態(tài)體聯(lián)會體聯(lián)會；o 各染色體的異染色質(zhì)多的著絲粒部分互相各染色體的異染色質(zhì)多的著絲粒部分互相靠攏形成靠攏形成染色中心染色中心(chromocenter)；o 唾腺染色體經(jīng)

3、染色后，出現(xiàn)深淺不同、密唾腺染色體經(jīng)染色后，出現(xiàn)深淺不同、密疏各別的疏各別的橫紋橫紋(band)，其數(shù)目和位置是恒定，其數(shù)目和位置是恒定的，代表著種的特征；的，代表著種的特征；o 如果染色體有缺失、重復(fù)、倒位、易位等如果染色體有缺失、重復(fù)、倒位、易位等畸變，很容易在唾腺染色體上識別出來，畸變，很容易在唾腺染色體上識別出來，因此唾腺染色體是因此唾腺染色體是研究染色體畸變的好材研究染色體畸變的好材料料。三、實驗材料三、實驗材料o 黑腹果蠅的三齡幼蟲黑腹果蠅的三齡幼蟲 為了得到更好的染色體標(biāo)本，需要在為了得到更好的染色體標(biāo)本，需要在2025和營養(yǎng)良好的條件下飼養(yǎng)幼蟲。選擇行和營養(yǎng)良好的條件下飼養(yǎng)幼蟲

4、。選擇行動遲緩、肥大，爬上管壁的三齡幼蟲（化蛹動遲緩、肥大，爬上管壁的三齡幼蟲（化蛹之前）做標(biāo)本最佳。之前）做標(biāo)本最佳。 三齡幼蟲照片三齡幼蟲照片四、實驗儀器與試劑四、實驗儀器與試劑 . 器具：器具： 雙筒體視解剖鏡、顯微鏡、鑷子、雙筒體視解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、吸水紙解剖針、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、吸水紙等。等。 . 試劑：試劑： 改良苯酚品紅溶液、生理鹽水、改良苯酚品紅溶液、生理鹽水、1N鹽酸。鹽酸。五、實驗步驟五、實驗步驟o 實驗前知識準(zhǔn)備：實驗前知識準(zhǔn)備： 果蠅三齡幼蟲的唾腺位于幼蟲的頭部附近，果蠅三齡幼蟲的唾腺位于幼蟲的頭部附近，可以看看顯微照片中的位置

5、可以看看顯微照片中的位置（點擊圖片觀察放大圖）（點擊圖片觀察放大圖）o 實驗開始實驗開始1.唾腺剖取唾腺剖取 把載玻片置于雙筒鏡下。載玻片上滴把載玻片置于雙筒鏡下。載玻片上滴加生理鹽水一滴，取三齡幼蟲放在其中，加生理鹽水一滴，取三齡幼蟲放在其中，操作者兩手各握一枚解剖針，左手的解剖操作者兩手各握一枚解剖針，左手的解剖針壓住幼蟲后端針壓住幼蟲后端1/3處，固定幼蟲。右手的處，固定幼蟲。右手的解剖針按住幼蟲頭部，用力向右拉，把頭解剖針按住幼蟲頭部，用力向右拉，把頭部從身體拉開，唾腺隨之而出，唾腺是一部從身體拉開，唾腺隨之而出，唾腺是一對透明的棒狀腺體對透明的棒狀腺體 。用針剔除脂肪組織。用針剔除脂

6、肪組織。圖示圖示2.解離：解離： 在載玻片上除去幼蟲其它部分，用吸在載玻片上除去幼蟲其它部分，用吸水紙吸去生理鹽水，然后在腺體上加水紙吸去生理鹽水，然后在腺體上加 1滴滴1NHCl溶液，作用溶液，作用2-3min。3.沖洗：沖洗： 用吸水紙吸去用吸水紙吸去HCl ，滴加蒸餾水于腺體，滴加蒸餾水于腺體上進行沖洗（兩次）。上進行沖洗（兩次）。4.染色：染色： 吸去蒸餾水，加吸去蒸餾水，加1滴改良苯酚品紅溶液，滴改良苯酚品紅溶液，染色染色30min。5. 壓片觀察：用鑷子加蓋玻片，壓片。鏡檢。壓片觀察：用鑷子加蓋玻片，壓片。鏡檢。六、實驗結(jié)果六、實驗結(jié)果1.1.先用低倍物鏡觀察，找到好的染色體圖像后

7、，先用低倍物鏡觀察，找到好的染色體圖像后，放到視野中心，再用高倍鏡觀察。放到視野中心，再用高倍鏡觀察。 2. 黑腹果蠅染色體是黑腹果蠅染色體是2n=24=8（圖一圖一），但，但由于體細(xì)胞配對，又因短小的第由于體細(xì)胞配對，又因短小的第4染色體和染色體和X染染色體的著絲粒在端部，所以染色體的一端在染色體的著絲粒在端部，所以染色體的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一條線狀和點色中心上，看上去，各自只形成一條線狀和點狀染色體。只有第狀染色體。只有第2和第和第3染色體的著絲粒在中染色體的著絲粒在中央，它們從染色中心以央，它們從染色中心以V字形向外伸出（字形向外伸出（2L，2R，3L，3R），因此共有

8、），因此共有6條條（圖二圖二）。 在顯微鏡下，短小的第在顯微鏡下，短小的第4染色體有時不易觀染色體有時不易觀察到，所以最容易識別的是察到，所以最容易識別的是5條條（圖三圖三）。 雄果蠅的雄果蠅的Y Y染色體幾乎包含在染色中心里，因染色體幾乎包含在染色中心里，因為是異染色質(zhì)，看起來染色可能淡為是異染色質(zhì)，看起來染色可能淡? ?深深些。有些。有經(jīng)驗的人可以發(fā)現(xiàn)雄果蠅的經(jīng)驗的人可以發(fā)現(xiàn)雄果蠅的X X染色體比雌果蠅染色體比雌果蠅X X染色體要細(xì)些，因為雄性只有一條染色體要細(xì)些，因為雄性只有一條X X染色體。染色體。 3.唾腺染色體上的橫紋寬窄、深淺是一定的，唾腺染色體上的橫紋寬窄、深淺是一定的，但在果

9、蠅的特定發(fā)育時期，它們會出現(xiàn)不但在果蠅的特定發(fā)育時期，它們會出現(xiàn)不連續(xù)的膨脹，這稱為疏松區(qū)（連續(xù)的膨脹，這稱為疏松區(qū)（puff），目前），目前人們認(rèn)為這是這部分基因被激活的標(biāo)志。人們認(rèn)為這是這部分基因被激活的標(biāo)志。 七、繪圖七、繪圖 繪制你所觀察到的清晰的果繪制你所觀察到的清晰的果蠅唾腺染色體的圖像。蠅唾腺染色體的圖像。八、實驗分析與討論八、實驗分析與討論1、根據(jù)實驗的觀察可以確定果蠅的染色體數(shù)目嗎？2、制備果蠅唾腺染色體需注意哪幾個關(guān)鍵步驟？3、利用果蠅唾腺染色體可以進行哪些遺傳學(xué)研究？九、參考文獻(xiàn)九、參考文獻(xiàn)o 張貴友，普通遺傳學(xué)實驗指導(dǎo)，張貴友，普通遺傳學(xué)實驗指導(dǎo)， 北京：清華大學(xué)出版社

10、，北京：清華大學(xué)出版社，2003o 盧龍斗、常重杰，遺傳學(xué)實驗技術(shù)，盧龍斗、常重杰，遺傳學(xué)實驗技術(shù)， 合肥：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，合肥：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，1996o 劉祖洞、江紹慧，遺傳學(xué)實驗，劉祖洞、江紹慧，遺傳學(xué)實驗， 北京：高等教育出版社，北京：高等教育出版社，1987果蠅三齡幼蟲果蠅三齡幼蟲下一張果蠅三齡幼蟲果蠅三齡幼蟲下一張果蠅三齡幼蟲果蠅三齡幼蟲返 回果蠅唾腺位于頭部附近果蠅唾腺位于頭部附近返 回果蠅唾腺位于頭部附近（放大圖）果蠅唾腺位于頭部附近（放大圖）返 回1、兩手各握一枚解剖針，、兩手各握一枚解剖針，左手解剖針壓住幼蟲后左手解剖針壓住幼蟲后端端1/3處，固定幼蟲；右處，固定幼蟲；右手的解剖針按住幼蟲的手的解剖針按住幼蟲的頭部用力向右拉，把頭頭部用力向右拉，把頭部從身體拉開，唾腺隨部從身體拉開，唾腺隨之而出。之而出。2、已剝離出的唾腺染、已剝離出的唾腺染色體色體一對透明