期葉皂苷對(duì)大鼠體外培養(yǎng)神經(jīng)元影響和其和TGF—β1關(guān)系

1、期葉皂昔對(duì)大鼠體外培養(yǎng)神經(jīng)元影響和其和tgf p 1關(guān)系【摘要】目的：探討七葉皂昔對(duì)sd大鼠大腦皮 質(zhì)體外培養(yǎng)神經(jīng)元生長(zhǎng)的影響及其與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 （transforming growth factor bl, tgf-bl）的關(guān)系。 方法：取新生sd大鼠胚胎大腦皮質(zhì)進(jìn)行神經(jīng)元原代培養(yǎng)， 隨機(jī)分為正常組（a組）、對(duì)照組（b組）、七葉皂昔組（c組）, c組加入20 mg/ml七葉皂昔（生理鹽水稀釋），b組加入等 量生理鹽水，a組不作任何處理，各組又分為24 h、48 h亞 組。采集各時(shí)間點(diǎn)圖像后采用rt-pcr檢測(cè)tgf-b 1 mrna的 表達(dá)。采用mtt檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果：a、b組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞

2、 數(shù)、胞體面積、突起長(zhǎng)度及細(xì)胞活力無明顯差異（p>0.05）, 但a、b組均有隨時(shí)間點(diǎn)延長(zhǎng)，四個(gè)指標(biāo)上調(diào)的時(shí)間點(diǎn)（p< 0. 05）, c組四個(gè)指標(biāo)均較a、b組升高（p<0. 05）o rt-pcr： tgf-bl mrna在a、b組各時(shí)間點(diǎn)之間無差異（p>0. 05）, c 組各時(shí)間點(diǎn)較a、b組上調(diào)（p<0. 05）,但隨時(shí)間延長(zhǎng)，組 內(nèi)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0. 05）.結(jié)論：七葉皂昔可促進(jìn) sd大鼠腦源性神經(jīng)元的存活、生長(zhǎng)，其機(jī)制可能是通過上調(diào) tgf-b 1的表達(dá).【關(guān)鍵詞】七葉皂昔；大鼠；神經(jīng)元；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子b 1 【中圖分類號(hào)】r651【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)

3、碼】a【文章編號(hào)】10047484 （2013） 11005402中藥是祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的瑰寶，在各種臨床治療中起到 了極大的作用。研究發(fā)現(xiàn)，七葉皂昔對(duì)中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng) 疾病有治療的作用，本實(shí)驗(yàn)擬通過體外原代培養(yǎng)sd大鼠大 腦皮質(zhì)神經(jīng)元，采用七葉皂昔進(jìn)行干預(yù)，同時(shí)調(diào)查tgf-b1 的變化及變化。1材料與方法1. 1所需的試劑注射用七葉皂昔鈉（批號(hào)：1302014,公司：山東綠葉 制藥股份有限公司）。mtt （貨號(hào):11684817910, roche）o revertaidtm first strand cdna synthesis kit、pcr master mix kit （貨號(hào)：k16

4、21, fermentas 公司）。dna marker dna 上樣緩沖液.trizol （molecular reseach center）等， 均由大連寶生物公司合成.1.2細(xì)胞培養(yǎng)及其分組懷孕sd大鼠購(gòu)自昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物科，取其胚胎大腦 皮質(zhì)，放入d12中，離心，棄上清。加500 ul木瓜蛋白酶 和500 ul dna酶，消化15 mine胎牛血清終止消化，離心 5 min。濾網(wǎng)過濾收集液，離心棄上清。換神經(jīng)元培養(yǎng)液， 放入包被好的培養(yǎng)板中（24孔板及96孔板），37°c, 5%c02 培養(yǎng)。調(diào)整細(xì)胞密度為0.5x109/l,改加b27無血清培養(yǎng)液（含 98%neurobas

5、al+2%b27+0. 5 mmol/l l-谷氨酰胺+0. 1 u/l 青、鏈霉素）。1.3神經(jīng)元生長(zhǎng)情況觀察隨機(jī)抽取5孔，在leica倒置顯微鏡成像系統(tǒng)20倍鏡 下采集圖片，每孔采集左上、右上、中、左下、右下方5個(gè) 視野.計(jì)數(shù)每個(gè)視野中神經(jīng)元數(shù)目。1.4 mtt法檢測(cè)神經(jīng)元生長(zhǎng)活力96孔板每孔加入10 ul mtt溶液（5 mg/ml,用生理鹽 水稀釋），繼續(xù)培養(yǎng)4 h。若藥物與mtt能夠反應(yīng)，可先離心 后棄去培養(yǎng)液，小心用pbs沖2-3遍后，再加入含mtt的培 養(yǎng)液。終止培養(yǎng)，準(zhǔn)備溶解結(jié)晶。同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、 mtt、dms0）,對(duì)照孔（神經(jīng)元、七葉皂昔、培養(yǎng)液、mtt、 dms0）o1. 5 rt-pcr擴(kuò)增目的基因采用triz0l消化神經(jīng)元，用triz0l試劑盒提取總rna, 1. 5%甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)rna的完整性，紫外線透 射分析儀上觀察電