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1、第九章細菌的培養(yǎng)與分離技術(shù)本章內(nèi)容一、基本條件二、細菌的接種與分離技術(shù)三、細菌培養(yǎng)的方法四、細菌的生長現(xiàn)象五、細菌L 型的檢查基本條件(一)細菌實驗室:生物安全柜。(二)無菌實驗室(三)基本設(shè)備和器具:溫箱、 CO2培養(yǎng)箱、厭氧培養(yǎng)設(shè)備;顯微鏡;高壓蒸汽滅菌器、干烤箱;接種環(huán)和接種針;火焰燈或酒精燈;平皿、試管、吸管等玻璃器皿,以及離心機、天平等。細菌的接種與分離技術(shù)平板劃線分離法:分散生長,各自形成菌落。連續(xù)劃線法:雜菌不多。分區(qū)劃線法:雜菌多。斜面接種法:單個菌落純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細菌的某些特性。液體接種法:多用于一些液體生化試驗管的接種。穿刺接種法:半固體培養(yǎng)基,接種針。傾注平板法:
2、測定牛乳、飲水和尿液等標(biāo)本細菌數(shù)。 將標(biāo)本適當(dāng)稀釋后,取一定量加入已滅菌的平皿內(nèi),再傾入已溶化并冷卻至 45左右的定量培養(yǎng)基,混勻,待凝固后倒置、培養(yǎng)。涂布接種法:常用于紙片法藥物敏感性測定,也可用于被檢標(biāo)本中的細菌計數(shù)。細菌的培養(yǎng)方法第 1 頁培養(yǎng)條件:根據(jù)臨床初步診斷及待檢細菌的種類,選用不同環(huán)境條件進行培養(yǎng)。細菌的生長現(xiàn)象分離培養(yǎng)基上菌落的生長現(xiàn)象觀察菌落的大小、形狀、突起、邊緣、顏色、表面、透明度等。血瓊脂上的溶血: 溶血:菌落周圍出現(xiàn)綠色環(huán)狀,紅細胞外形完整無缺。 溶血:菌落周圍形成一個完全清晰透明的環(huán),紅細胞溶解。 溶血:沒有溶血,紅細胞無溶解。雙環(huán):菌落周圍完全溶解的暈圈外有一個
3、部分溶血的第二圓圈。氣味液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象肉湯培養(yǎng)基的混濁度、沉淀、菌膜,氣味和色素等。細菌數(shù)量達106 107CFU/ml,培養(yǎng)肉湯才見混濁。血液培養(yǎng)的檢查和傳代培養(yǎng):肉眼觀察其生長現(xiàn)象,如溶血、產(chǎn)生氣體或混濁度等。半固體培養(yǎng)基中細菌的動力有動力的細菌除了在穿刺接種的穿刺線上生長外,在穿刺線的兩側(cè)均可見混濁或細菌生長的小菌落。細菌 L 型的檢查1. 標(biāo)本采集: 無雜菌污染的組織或體液標(biāo)本應(yīng)加 20%蔗糖無菌溶液保持高滲; 血液標(biāo)本應(yīng)接種高滲肉湯增菌培養(yǎng)。2. 分離培養(yǎng):標(biāo)本接種到高滲肉湯增菌培養(yǎng)1 7d,然后轉(zhuǎn)種 L 型平板和血平板 37培養(yǎng) 27d。3. 生長現(xiàn)象: 常有油煎蛋樣菌落(
4、典型 L 型菌落)、 顆粒型菌落( G型)和絲狀菌落( F 型)三種類型。平板分區(qū)劃線的目的A. 使細菌獲得充分的營養(yǎng)B. 減少細菌間的相互抑制C. 獲得足夠的單個菌落D. 利于細菌的大量生長E. 加快細菌的生長速度正確答案 C第 2 頁答案解析平板劃線分離法:分散生長,各自形成菌落。連續(xù)劃線法:雜菌不多。分區(qū)劃線法:雜菌多。在臨床細菌學(xué)檢驗中,含菌量較多的標(biāo)本如糞便,接種方法適宜用A. 平板傾注培養(yǎng)法B. 平板連續(xù)劃線法C. 平板分區(qū)劃線法D. 斜面接種法E. 半固體穿刺接種法正確答案 C答案解析對于含菌量較多的標(biāo)本適宜用平板分區(qū)劃線法。關(guān)于傾注平板法,錯誤的是A. 可用于尿液、牛乳等標(biāo)本的
5、計數(shù)B. 所用培養(yǎng)基預(yù)先滅菌后溶化C. 先取一定量標(biāo)本加入無菌平皿內(nèi),再加入培養(yǎng)基混勻D. 先取一定量標(biāo)本與培養(yǎng)基混勻后,再倒入無菌平皿內(nèi)E. 培養(yǎng)基溫度以 45左右為宜正確答案D答案解析傾注平板法應(yīng)先取一定量標(biāo)本加入無菌平皿內(nèi),再加入培養(yǎng)基混勻。不屬于細菌形態(tài)學(xué)觀察的是A. 平板分區(qū)劃線觀察單個菌落B. 革蘭染色觀察細菌染色性C. 鞭毛染色觀察細菌的動力D. 光鏡觀察細菌E. 暗視野顯微鏡觀察細菌動力正確答案A答案解析平板分區(qū)劃線觀察單個菌落屬于細菌生長現(xiàn)象,不是細菌形態(tài)學(xué)。平板劃線分離細菌成功的標(biāo)志是A. 區(qū)和區(qū)不相連B. 有明顯的三區(qū)劃線C. 培養(yǎng)出單個菌落D. 不能劃破培養(yǎng)基E. 不能有污染菌生長正確答案C答案解析平板劃線分離細菌成功的標(biāo)志是培養(yǎng)出單個菌落。觀察細菌動力最常使用A
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