畢業(yè)論文《兒康寧藥渣發(fā)酵研究》

1、chongqing industry & trade polytechnic畢業(yè)論文論文題目: 兒康寧中藥渣發(fā)酵的研究學(xué)生姓名:學(xué)生學(xué)號：0803010253專業(yè)班級：生物制藥 2班本組人員：指導(dǎo)老師：羅老j年11月兒康寧中藥渣發(fā)酵的研究（重慶工貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物化學(xué)工程系生物制藥技術(shù)專業(yè)）梅針對約廠里對兒康寧藥渣的主要成分，選用em菌對其進(jìn)行發(fā)酵，以 發(fā)酵產(chǎn)品的蛋白含量、還原糖、總糖以及粗纖維含量為指標(biāo)，考察了發(fā)酵溫度， 發(fā)酵時間，含水量，蛋白質(zhì)含量，還原糖和總糖含量，粗纖維含量，接種量的影 響，結(jié)果表明：屮藥渣經(jīng)em菌發(fā)酵后，發(fā)酵產(chǎn)物的蛋白質(zhì)含量可以達(dá)到8. 772%, 粗纖維的

2、含量由11.35%降低到了 8. 535%,由此可見，用凱氏定氮法、費林試劑 熱滴定法、化學(xué)法、劃線分離培養(yǎng)法可以使中藥渣得到合理的應(yīng)用，其發(fā)酵產(chǎn)物 就可以作為蛋白飼料的資源。光鍵詢：兒康寧em菌發(fā)酵中藥廢渣erkangning in liquid fermentation of research(chongqing industry &trade vocational technical college of biological chemistry engineering biopharmaceutical professional technology)abstract： acc

3、ording to the couple, corning liquid pharmaceutical the main component, choose em bacteria on the fermentation, fermentation product protein content, reducing sugar, total sugar and coarse fiber content as index, inspects the fermentation temperature, water content, fermentation time, protein conten

4、t, reducing sugars and total sugar content, crude fiber content, ino culati on quantity, the result shows that the influe nee of the liquid to em bacterium after fermentation, fermented product protein can achieve 8.772%, crude fiber content by 11.35% drop to 8.535%, therefore, use kieldahl method,

5、feilin reagent hot titration method, chemical method, lineation separation culture method can make the liquid to get reasonable application of its fermented product can serve as protein feed resources.key words： erkangning em bacteria fermentation liquid隨著中醫(yī)藥事業(yè)的迅速發(fā)展，最近十年我國的醫(yī)藥行業(yè)得到了迅猛的發(fā)展, 但是隨即而來的問題也不少

6、；比如生產(chǎn)藥品，廢棄藥渣對環(huán)境和居民生活的影響 h益突岀。按照國家環(huán)保部辦公廳關(guān)于開展抗生素藥渣等危險廢物產(chǎn)生及處置 專項檢查的通知(環(huán)控函(2009) 143號)要求，明確的指出了藥渣對環(huán)境影響 的整改要求。中國是中藥生產(chǎn)大國，每年產(chǎn)生中藥藥渣約2000多萬噸，因其對環(huán) 境有不同程度的污染，故一直采用填埋的方法進(jìn)行處理，這不僅占用了人量的土 地資源，污染了土地及地下水，而且還造成資源的浪費，屮藥渣屮含有豐富的有 機質(zhì)、糖類和粗蛋白質(zhì)等屮量及微量元素營養(yǎng)物質(zhì)，用生物技術(shù)對其進(jìn)行無害的 處理，發(fā)酵促其腐熟，就能生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的有機肥，但是藥渣屮含有蛋白質(zhì)，纖維 素，多糖等可以利用的成分，及時對具進(jìn)行

7、綜合的利用，不僅可以解決污染問題, 還可以帶來一些經(jīng)濟(jì)效益。由于現(xiàn)在提取t藝比較單一，中藥中的部分成分仍殘留在屮藥渣屮。但在屮 藥渣的處理和利用方面，研究者主要集中在中藥渣培養(yǎng)食用菌、中藥渣造紙等方 面,有關(guān)于這方面的研究不多，尤其是對藥渣中次生藥用物質(zhì)的研究尚耒見報道。 例如兒康寧藥渣在國內(nèi)外h前還沒有研究，它具有節(jié)能排泄的功能，因此我們用 兒康寧藥渣發(fā)酵生成蛋白質(zhì)研究對剛生下來的小豬斷奶以后所衣用的飼料，這種 飼料可以提高小豬斷奶以后的排泄問題，利用這種藥渣可以生產(chǎn)一種新型的具有 保健功能的小豬飼料。1材料和方法：1. 1菌種em菌：稱取5g紅糖加入到裝有100ml無菌水的三角瓶中，然后包

8、裝好在 121°c高溫滅菌20min,取岀冷卻后加入菌種培養(yǎng)即可。1.2實驗原料屮藥熬制后干燥粉碎后備用，該藥渣是經(jīng)煎熬浸取后的紅棗，白術(shù)，桑枝， 惹及仁黨參，山楂，紅參，麥芽，蓮子，山藥，黃茂，茯苓，制何首烏，麥冬, 炒麥芽。2分析方法2. 1蛋白質(zhì)含量:凱氏定氮法，所有的試劑均用不含氨的蒸倔水配制，所用到的試劑有硫酸銅, 硫酸鉀，濃硫酸，2%的硼酸，混合指示劑，有0. 1%的甲基紅乙醇溶液與5份0.1% 溟甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。40%氫氧化鈉溶液。0.05mol / l硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 或0.05mol/l的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。2. 1.1消化液：稱取lg藥渣，1.5g硫酸銅，1.5g

9、硫酸鉀，20迅濃硫酸于凱氏燒瓶中，稍 搖勻后于瓶口放一小漏斗，將瓶以45度角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上，小火 加熱，待內(nèi)溶物全部炭化，泡沫完全停止后，加強火力，并保持瓶內(nèi)液體 微沸，注意藥品的顏色變化（藥品的顏色由黑色一紅色一黃色一亮綠色）， 至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱0.5小時。取下放冷，小心加入 20ml水，放冷后，移入looml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入 容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫 酸鉀、濃硫酸同一方法做試劑空白試驗。2.1.2蒸懈先安裝定氮蒸倔裝置，于水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水至約2/3處，加甲基紅指示液 數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，以保持水呈酸性

10、，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸，用調(diào)壓器控制, 加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水。向接收瓶內(nèi)加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示 液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml樣品消化稀釋液由小玻杯 流入反應(yīng)室，并以10ml水洗滌小燒杯使流入反應(yīng)室內(nèi)，塞緊小玻杯的棒狀玻塞。 將10ml40%氫氧化鈉溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其緩緩流入反應(yīng)室，立即將 玻塞蓋緊，并加水于小玻杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始蒸憎。蒸氣通入反應(yīng)室 使氨通過冷凝管而進(jìn)入接收瓶內(nèi)，蒸t®5mino移動接受瓶，使冷凝管下端離開 液而，再蒸cimino然后用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05mol /l硫酸或0

11、.05mol / l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至灰色或藍(lán)紫色為終點。還得做一組 對h實驗，然后記錄數(shù)據(jù)。2. 2粗纖維含量的測定：稱取藥渣2g置于50ml離心管中，加入5%的氫氧化鈉溶液30ml, 90°c水浴 90min,取出調(diào)平衡，直至洗液ph呈屮性或是微酸性，瀝干后加入ph2. 00的鹽酸 溶液30ml,再次90°c水浴90min,調(diào)平衡，離心清洗5次，瀝干后送至干燥箱 80°c烘干至恒重，稱重，計算每個做三個平行實驗。2. 3還原糖和總糖的測定：所要用到的試劑有：斐林試劑（1）甲液：稱取15g硫酸銅及0. 05g亞甲基藍(lán)，溶于蒸憎水中病稀釋至1000ml定容(2)

12、乙液:稱取50g灑石酸鉀鈉及75g氫氧化鈉，溶于蒸徭水屮，再加入 宓亞鐵氧化鉀，完全溶解后，用蒸憎水稀釋到1000ml貯存于具有橡皮塞的玻璃 瓶中然后再配置0. 1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：用分析天平準(zhǔn)確稱取1. 000g經(jīng)98100 度干燥至恒重的無水葡萄糖，加入蒸館水溶解后移入1000ml容量瓶屮，加入5ml 濃鹽酸防止微生物生長，用蒸徭水稀釋到1000ml待用6mol / l的鹽酸：取250ml濃鹽酸(35%39%)用蒸憾水稀釋500ml碘-碘化鉀溶液：取一顆碘，log碘化鉀溶于蒸謂水中，定容到100ml的容 量瓶屮6mol/l氫氧化鈉：稱取120g氫氧化鈉溶于蒸館水屮定容到500ml的容量 瓶

13、中0. 1%的酚瞅指示劑材料：藥渣lg所用到的器材有：試管，移液管，燒杯，錐形瓶，調(diào)溫電爐，滴定管操作步驟：精確稱取藥渣5%的lg,放在100ml的燒杯中，先以少量蒸館水 調(diào)成糊狀，然后加入約40ml蒸謂水，混勻，于50°c恒溫水浴中保溫20min,不 時攪拌，使還原糖浸岀，過濾，將濾液全部收集在50ml的容量瓶屮，用蒸憎水 定容到刻度，即為還原糖提収液(即為v5%),然后根據(jù)相同的方法稱収10%的藥 渣，提取液為v10%,相同的方法得出v15%準(zhǔn)確稱取藥渣lg,放在大試管屮，加入6mol / l鹽酸10ml,蒸館水15ml, 在沸水浴中加熱0.5小時，取出兩滴置于門瓷板上，加入一滴

14、碘-碘化鉀溶液檢 查水解是否完全，如果已水解完全，則不顯藍(lán)色，水解完畢則呈藍(lán)色。冷卻至室 溫后加入一滴酚駄指示劑，以6mol/l氫氧化鈉溶液中和至溶液呈微紅色，并 定容到100ml,過濾取濾液10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度，混勻,即為 稀釋1000倍的總糖水解液，用于總糖的測定空門滴眾準(zhǔn)確吸取菲林試劑甲液和乙液5. 00ml, sf 250ml錐形瓶屮，加蒸鐳水10ml, 從滴定管滴加約9nil的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，加熱使其在2min內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s, 趁熱以2s/滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好退去為終點，記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積。平行操作3次取其平均值計算公

15、式為：還原糖（以葡萄糖計）%=（菲林甲液和乙液10ml乘以還原糖 樣品溶液的總體積）除以（樣品重量乘以標(biāo)定時平均消耗還原糖樣品溶液的總體 積乘以1000）乘以100注意事項：（1）菲林試劑甲液和乙液應(yīng)該分別貯存，用時才混合，否則酒石 酸鈉銅絡(luò)合物長期在堿性條件下會慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度 降低。（2）滴定必須在沸騰條件下進(jìn)行，其原因一是加快還原糖與cu2+的反應(yīng) 速度，二是亞屮基藍(lán)的變色反應(yīng)是可逆的，還原型的亞甲基藍(lán)遇空氣屮的氧時會 被氧化為氧化型，此外，氧化亞銅也極不穩(wěn)定，易被空氣中的氧所氧化，。保持 反應(yīng)液沸騰町防止空氣進(jìn)入，避免亞甲基藍(lán)和氧化亞銅被氧化而增加消耗量。（3）

16、滴定時不能隨意的搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上去下了滴運, 以防空氣進(jìn)入反應(yīng)液中。2. 4水分含量的測定：就是稱取不同種類的藥渣2g,每一樣各自做三份平行試驗，放于100c恒溫 干燥箱中干燥24小時，再精密稱取各份藥渣的重量，求得平均值之后再計算出 藥渣是含水量。3工藝流程三角瓶搖床培養(yǎng)劃線分離紫外線菌種復(fù)壯活化純培養(yǎng)誘變菌種擴大培養(yǎng) r優(yōu)良菌種接種中藥渣脫水添加輔料厭氧發(fā)酵檢測分析（包括還原糖、蛋白質(zhì)、纖維素、灰分、水分等）陳化翻轉(zhuǎn)藥渣 再發(fā)酵 質(zhì)檢 結(jié)論4結(jié)果分析4. 1原料的蛋白質(zhì)含量經(jīng)過一系列的平行試驗得岀：原料藥屮的蛋白質(zhì)含量為8. 563%,原料藥屮的粗纖維含量為12. 54%

17、4. 2發(fā)酵結(jié)果及研究分析4. 2. 1將em菌按照藥渣重量的比例加入em菌加入比例5%10%15%藥渣重屋(g)180180180加入量(ml)918274.2.2發(fā)酵期間對藥渣中的成分改變的研究(1) 藥渣的種類5%的發(fā)酵藥渣藥渣量(g)180水分 含量65%接種量(ml)9發(fā)酵溫度30 °c發(fā)酵 形式厭氧發(fā)酵1：012345678項目水 分(% )6554.6152.6450.2147.8744.5741.8940.7640.135粗纖維()&7728.989.4710.55513.6314.5617.6417.9719.38總 糖()11.35211.1310.751

18、0.229.979.268.898.648.535蛋口 質(zhì)含 量( )2.2432.1322.0041.5721.2630.9850.3750.2110.021(2) 藥渣的種類:10%的藥渣藥渣量（g）180水分 含量65%接種量（ml）9發(fā)酵溫度30 °c發(fā)酵 形式厭氧 發(fā)酵012345678項口水分（）55.3454.9353.3650.2248.4246.2743.1241.1140.20粗纖維（）12.3211.3511.0210.3410.049.259.078.458.31總 糖（）2.54342.1051.9741.8331.5891.2291.0860.8370.3

19、27蛋口 質(zhì)含 量（）&5798.7748.9789.53111.98614.2316.3417.8920.24（3）藥渣的種類:15%的藥渣藥渣量<g）180水分 含量65%接種量（ml）9發(fā)酵 溫度30 °c發(fā)酵 形式厭氧 發(fā)酵乂）012345678項目水 分（）54.9854.1750.2748.3947.5645.6044.6242.3740.78粗纖維（）13.2111.2910.3910.059.738.998.79&3258.03總 糖（）2.4322.0421.9351.4311.0940.8370.6380.4320.218蛋白 質(zhì)含 量（）&7949.43911.23413.7814.4316.9817.491&am