藥物qt間期延長(zhǎng)潛在作用研究非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則及起草說(shuō)明(征求意見稿)

1、指導(dǎo)原則編號(hào):藥物qt間期延長(zhǎng)潛在作用研究非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則二0三年 月一、概述3二、基本原則3三、試驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本要求5四、研究?jī)?nèi)容7五、數(shù)據(jù)處理與綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估9六、附錄 試驗(yàn)方法七、參考文獻(xiàn)八、起草說(shuō)明%1. 概述心電圖中qt間期（從qrs波群開始到t波結(jié)束）反映心室去極 化和復(fù)極化所需的時(shí)間。當(dāng)心室復(fù)極化延遲和qt間期延長(zhǎng)時(shí)，尤其伴有其他風(fēng)險(xiǎn)因素（如 低血鉀、結(jié)構(gòu)性心臟病、心動(dòng)過(guò)緩）時(shí)，患者發(fā)生室性快速心律失常 的風(fēng)險(xiǎn)增加，包括尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過(guò)速（torsade de pointes, tdp ）。（一）研究目的本指導(dǎo)原則主要是關(guān)于評(píng)價(jià)受試物延遲心室復(fù)極化潛在作用的 非臨床研究策略

2、，以及對(duì)非臨床研究信息的分析和綜合風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估。qt間期研究結(jié)果可以和其他信息一起，用來(lái)闡明藥物作用機(jī)理, 以及人體的延遲心室復(fù)極化和延長(zhǎng)qt間期的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。（二）適用范圍本指導(dǎo)原則適用于指導(dǎo)中藥、天然藥物、化學(xué)藥物的qt間期延 長(zhǎng)潛在作用研究。%1. 基本原則（一）試驗(yàn)方法藥物安全藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中所述的關(guān)于研究設(shè)計(jì)的 基本原則和推薦方法，也適用于本指導(dǎo)原則。建議采用體內(nèi)和體外的 方法進(jìn)行研究。應(yīng)基于受試物的藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、安全性的特點(diǎn)來(lái)對(duì)研究方 法、風(fēng)險(xiǎn)性證據(jù)進(jìn)行個(gè)體化分析。（）執(zhí)行g(shù)lp的要求體外試驗(yàn)建議執(zhí)行g(shù)lp,其它試驗(yàn)遵循glp,追加研究應(yīng)在最大 可行限度內(nèi)遵循glp。（三

3、）受試物中藥、天然藥物：受試物應(yīng)能充分代表臨床試驗(yàn)樣品或上市藥品。 應(yīng)采用工藝路線及關(guān)鍵工藝參數(shù)確定后的工藝制備，一般應(yīng)為中試或 中試以上規(guī)模的樣品，否則應(yīng)有充分的理由。應(yīng)注明受試物的名稱、 來(lái)源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等，由于中藥的 特殊性，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，否則應(yīng)提供數(shù)據(jù)支持配制后受試物的質(zhì)量穩(wěn) 定性及均勻性。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進(jìn) 行試驗(yàn)。試驗(yàn)中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明名稱、標(biāo)準(zhǔn)、批號(hào)、規(guī)格 及生產(chǎn)單位?；瘜W(xué)藥物：受試物應(yīng)采用工藝相對(duì)穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能反映 臨床試驗(yàn)擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品。受試物應(yīng)注 明名稱、來(lái)源、批號(hào)、含量（或

4、規(guī)格）、保存條件及配制方法等，并 附有研制單位的自檢報(bào)告。試驗(yàn)中所用輔料、溶媒等應(yīng)標(biāo)明批號(hào)、規(guī) 格和生產(chǎn)單位，并符合試驗(yàn)要求。在藥品研發(fā)的過(guò)程中，若受試物的工藝發(fā)生可能影響其安全性的變化，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的安全性研究。化學(xué)藥物試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)進(jìn)行受試物樣品分析，并提供樣品分析報(bào) 告。成分基本清楚的中藥、天然藥物也應(yīng)進(jìn)行受試物樣品分析。三、試驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本要求（-）生物材料應(yīng)選擇合適的試驗(yàn)體系和動(dòng)物種屬。成年大鼠和小鼠復(fù)極化的離 子機(jī)制不同于包括人在內(nèi)的大動(dòng)物種屬（在成年大鼠.小鼠，復(fù)極化 的主要離子流是it0）.因此用這些種屬的組織或動(dòng)物是不合適的。體外研究可采用離體心肌細(xì)胞、培養(yǎng)心肌細(xì)胞系或克隆的人離子

5、 通道的異種表達(dá)體系、離體心臟標(biāo)本。用于體外研究的組織和細(xì)胞標(biāo) 本可來(lái)源于不同的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，包括兔、雪貂、豚鼠、犬、豬。當(dāng)采用 原代組織或細(xì)胞時(shí)，應(yīng)考慮所用標(biāo)本的特點(diǎn)及來(lái)源，因?yàn)榧?xì)胞離子通 道的分布因其所處的不同區(qū)域及細(xì)胞類型而不同。整體研究的動(dòng)物包括犬、猴、豬、兔、雪貂以及豚鼠。動(dòng)物應(yīng)符 合國(guó)家有關(guān)規(guī)定的等級(jí)要求，并具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證（動(dòng)物統(tǒng)一 寫）。（二）樣本量體外：體外樣本量每組不少于4個(gè)平行樣本，一般35個(gè)組。體內(nèi)試驗(yàn)：試驗(yàn)組的組數(shù)及每組動(dòng)物數(shù)的設(shè)定，應(yīng)以能夠科學(xué)合 理地解釋所獲得的試驗(yàn)結(jié)果，恰當(dāng)?shù)胤从秤猩飳W(xué)意義的作用，并符 合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求為原則。小動(dòng)物每組一般不少于10只，大動(dòng)物每

6、組一 般不少于6只。動(dòng)物一般要求雌雄各半。（三）劑量體外研究中，受試物的濃度要有較寬的范圍，應(yīng)涵蓋和超過(guò)預(yù)期 臨床最大治療血藥濃度。試驗(yàn)中逐步提高藥物濃度直到出現(xiàn)特征性的 濃度反應(yīng)曲線或達(dá)到因理化特性所限的最高濃度。除了受到細(xì)胞或 組織活性的限制外，理想狀態(tài)下應(yīng)有充分的藥物暴露時(shí)間以獲得穩(wěn)態(tài) 電生理效應(yīng)，應(yīng)注明藥物暴露時(shí)間的長(zhǎng)短。體外研究中應(yīng)使用合適的 陽(yáng)性對(duì)照藥，以明確該體外試驗(yàn)系統(tǒng)的敏感性。體外研究應(yīng)確定受試物的濃度效應(yīng)關(guān)系。無(wú)明顯影響作用時(shí)，應(yīng) 對(duì)濃度選擇的范圍進(jìn)行說(shuō)明。整體試驗(yàn)劑量范圍應(yīng)與安全藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中所討 論的內(nèi)容一致，如果可能，劑量范圍都應(yīng)包括和超過(guò)預(yù)期的人暴露水 平

7、。給藥劑量可能會(huì)因動(dòng)物的耐受性而受到限制，如動(dòng)物出現(xiàn)嘔吐、 震顫、活動(dòng)性過(guò)度等。當(dāng)研究用于評(píng)價(jià)延遲心室復(fù)極化程度與原藥及 代謝產(chǎn)物濃度關(guān)系時(shí)，可采用持續(xù)靜脈滴注的方式控制藥物暴露水平。監(jiān)測(cè)受試物及其代謝產(chǎn)物的暴露量有助于解釋藥物的量效關(guān)系或劑 量或濃度反應(yīng)，也為設(shè)計(jì)可能追加的試驗(yàn)提供信息。（四）對(duì)照體外離子通道和動(dòng)作電位時(shí)程試驗(yàn)中應(yīng)采用次最大有效濃度的 陽(yáng)性對(duì)照藥說(shuō)明試驗(yàn)系統(tǒng)的反應(yīng)性，并且應(yīng)用于每項(xiàng)試驗(yàn)。整體試驗(yàn) 研究中使用陽(yáng)性對(duì)照藥則是為了驗(yàn)證試驗(yàn)系統(tǒng)的敏感性，但不必在每 一項(xiàng)試驗(yàn)中都使用陽(yáng)性對(duì)照藥。如受試物在化學(xué)結(jié)構(gòu)/藥理分類上屬于與延長(zhǎng)人體qt間期有關(guān)的 藥物時(shí)，在體內(nèi)外研究中使用現(xiàn)有同

8、類藥物有利于比較受試藥物與參 比物的作用強(qiáng)度。（五）給藥途徑整體動(dòng)物試驗(yàn)，首先應(yīng)考慮與臨床擬用途徑一致，可以考慮充分 暴露的給藥途徑。對(duì)于在動(dòng)物試驗(yàn)中難以實(shí)施的特殊的臨床給藥途徑, 可根據(jù)受試物的特點(diǎn)選擇，并說(shuō)明理由。（六）觀察時(shí)間結(jié)合受試物的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特性、受試動(dòng)物、臨床研究方 案等因素選擇觀察時(shí)間點(diǎn)和觀察時(shí)間。%1. 研究?jī)?nèi)容（一）主要研究方法1、采用離體動(dòng)物或人心肌細(xì)胞、培養(yǎng)心肌細(xì)胞系或克隆的人離 子通道的異種表達(dá)體系測(cè)定離子流。2、測(cè)定清醒或麻醉動(dòng)物的ecg參數(shù)。3、在離體心臟標(biāo)本進(jìn)行動(dòng)作電位參數(shù)測(cè)定，或在麻醉動(dòng)物中進(jìn) 行能體現(xiàn)動(dòng)作電位時(shí)程的特異性電生理參數(shù)檢測(cè)。4、在離體心臟

9、標(biāo)本或動(dòng)物進(jìn)行致心律失常作用測(cè)定?？上冗M(jìn)行1、2研究，再進(jìn)行3、4研究（繼續(xù)在征求專家意見， 也請(qǐng)多反饋）。綜上所述，可采用體內(nèi)外方法從4個(gè)不同功能水平對(duì)藥物的qt 間期作用進(jìn)行研究，并且相互之間有互補(bǔ)作用。（）追加的研究（follow-up studies ）當(dāng)非臨床研究的結(jié)果不一致和/或臨床研究結(jié)果與非臨床研究結(jié) 果不一致時(shí)，可通過(guò)回顧性評(píng)價(jià)和追加的研究進(jìn)行分析。此種情況下, 追加的研究結(jié)果可能成為綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的重要組成部分。追加的研究是為了更深入地了解或提供更多的關(guān)于受試物潛在 的延遲人心室復(fù)極化和延長(zhǎng)qt間期的作用。這些研究可以提供更多 有關(guān)作用強(qiáng)度、作用機(jī)理、劑量反應(yīng)曲線的斜率或最大

10、反應(yīng)幅度的信 息。追加的研究可以針對(duì)某一特殊問(wèn)題設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，因此各種體外或體 內(nèi)的研究設(shè)計(jì)都可應(yīng)用。如藥物有蓄積、臨床長(zhǎng)期使用，需考慮多次給藥的觀察。追加的內(nèi)容:（繼續(xù)在征求專家意見，希望網(wǎng)上征求到更多信息）。1、選用冠狀動(dòng)脈灌注兔左心室肌楔形標(biāo)本進(jìn)行研究：本實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)是分析受試物是否延緩心臟復(fù)極、是否增大跨室壁 復(fù)極異質(zhì)性、以至產(chǎn)生早期后除極（ead）和觸發(fā)激動(dòng)，并直觀觀察 是否誘發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)型室速（tdp）。%1. 數(shù)據(jù)處理與綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估根據(jù)詳細(xì)的試驗(yàn)記錄，選用合適的統(tǒng)計(jì)方法，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行定性和 定量分析。綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估應(yīng)該是基于科學(xué)的、對(duì)受試物個(gè)性化的考慮。這種 綜合風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估有益于臨床研究設(shè)計(jì)

11、和其結(jié)果的解釋。應(yīng)結(jié)合藥效、 毒理、藥代以及其他研究資料進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，為藥物應(yīng)用于人體的安 全性提出建議。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估應(yīng)考慮受試物是否在化學(xué)結(jié)構(gòu)或藥理分類上屬于可延 長(zhǎng)人qt間期作用的藥物，如抗精神病類藥物，組胺h1受體拮抗劑、氟唾酮類等。這可能會(huì)影響參比制劑的選擇并會(huì)納入綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中。qt研究的非臨床研究的策略如下圖v化學(xué)/藥理分類體外ikr研究整體qt分析追加的研究綜合風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估v相關(guān)非臨床/臨 床研究信息風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估六、附錄試驗(yàn)方法（一）體外電生理ikr研究（電壓鉗電生理試驗(yàn)）體外ik試驗(yàn)是采用原代或表達(dá)的ik通道蛋白（如由herg編碼 的蛋白）評(píng)價(jià)藥物對(duì)離子電流的影響。（-）整體qt研究整體

12、qt研究主要是測(cè)定心室復(fù)極參數(shù)，如qt間期。該試驗(yàn)可 在安全性藥理學(xué)研究中同時(shí)進(jìn)行，這樣可減少動(dòng)物和其他資源的使用。qt間期和心率是相反的、非線性的關(guān)系，且二者之間的關(guān)系在 不同的種屬和動(dòng)物甚至同一種屬之間都不相同。因此心率改變會(huì)影響 qt間期，這會(huì)干擾對(duì)受試物影響心室復(fù)極化和qt間期的評(píng)價(jià)。動(dòng) 物心率的變化可能來(lái)自兩種重要的情況：一種是自主神經(jīng)張力改變所 致，一種是受試物對(duì)心率的影響。因此，在解釋整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí) 要充分考慮同時(shí)相伴的心率的變化。理想的qt間期數(shù)據(jù)獲得應(yīng)該是 在給予受試物后，與對(duì)照品和基線在相似的心率水平下進(jìn)行比較。如 果心率變化不是因?yàn)槭茉囄镆?，可通過(guò)訓(xùn)練動(dòng)物或采用麻醉

13、動(dòng)物來(lái) 減少心率因素的影響。當(dāng)心率變化是因?yàn)槭茉囄镆饡r(shí)，最常用的方 法是根據(jù)心率校正qt間期（qtc）,如bazett和fridericia法；心率 校正公式的選擇須根據(jù)試驗(yàn)系統(tǒng)得來(lái)的數(shù)據(jù)加以判斷，如果給藥組和 對(duì)照組心率差異較大，可能校正公式對(duì)于評(píng)價(jià)qt間期延長(zhǎng)風(fēng)險(xiǎn)是無(wú) 效的，此時(shí)可改用心臟起搏器來(lái)獲得固定的心率。對(duì)qt/rr關(guān)系進(jìn) 行分析可能更合適，包括用公式對(duì)個(gè)體動(dòng)物qt間期數(shù)據(jù)進(jìn)行校正。（三）追加的方法和備選：追加的內(nèi)容：（繼續(xù)在征求專家意見，希望網(wǎng)上征求到更多信息）。（1）冠狀動(dòng)脈灌注兔左心室肌楔形標(biāo)本試驗(yàn)方法：選用新西蘭 大耳兔雌雄各半，制備經(jīng)冠狀動(dòng)脈灌注左心室楔形標(biāo)本。選用受試

14、物 4個(gè)測(cè)試濃度，分別為游離血漿治療濃度（ftpc）的1、3、10、30 倍。并選用司帕沙星為陽(yáng)性對(duì)照藥，待藥物充分灌注標(biāo)本后，在刺激 頻率為0. 5hz條件下同步記錄和分析跨壁心電圖和心內(nèi)外膜側(cè)心肌 細(xì)胞跨膜動(dòng)作電位。觀察指標(biāo)包括：qt間期、tp-e間期及tp-e/qt 比值、ead的發(fā)生率及與ead相關(guān)的現(xiàn)象（r-on-t早搏和tdp）。并 采用tdp發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估叫表1評(píng)估tdp發(fā)生危險(xiǎn)性的評(píng)分系統(tǒng)-10123aqt間期（）<55v1010 v2020 w30>30atp-e/qt 比值<5> 5 v1010 v2020 w30>30(%)2468

15、2 相 ead±ead*ead不伴ead伴tdpw r-on-t w"r-on-t w期前興奮期前興奮bcl=2000ms； ±ead表示bcl為2000ms時(shí)不太明顯，但當(dāng)bcl為4000ms是則很明顯。最大tdp評(píng)分是14分。%1. 參考文獻(xiàn)1. ich. ich guidance for industry ich s7a: safety pharmacologystudies for human pharmaceuticals. 2001.2、ich. ich guidance for industry ich s7b: safety pharmacolog

16、ystudies for assessing the potential for delayed ventricular repolarization(qt interval prolongation ) by human pharmaceuticals. 2005.3、liu t, brown bs, wu y, antzelevitch. c, kowey pr, yan gx. blinded validation of the isolated arterially perfused rabbit ventricular wedge in preclinical assessment

17、of drug-induced proarrhythmias. heart rhythm 2006; 3: 948-956八、起草說(shuō)明(-)背景藥物qt間期延長(zhǎng)潛在作用研究非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則，在中 國(guó)以前沒有此指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則在起草過(guò)程中主要參考了人用藥 品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)的(international conference on harmonisation of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use,簡(jiǎn)稱ich )的指導(dǎo)原則，并結(jié)合我國(guó) 實(shí)際國(guó)情進(jìn)行修訂，希望本指導(dǎo)原則在實(shí)際應(yīng)用中能夠切實(shí)可行。(%1) 有