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1、學(xué)士學(xué)位論文(設(shè)計)(類型:論文)墊江們分析與盼作者:封雪學(xué) 號:200906034012指導(dǎo)教師:蔣桂芳專 業(yè):生物科學(xué)(師范)提交日期:2013年5月4日答辯日期:2013年5月16日 學(xué)位授予單位:重慶文理學(xué)院中國重慶2013年5月摘要abstractii1引言12研究區(qū)自然狀況13材料與方法13. 1采樣的區(qū)域及方法13.2測定項目及方法錯誤!未定義書簽。3.3評價標(biāo)準(zhǔn)與評價方法錯誤!未定義書簽。錯誤!未定義書簽。3. 3. 1評價標(biāo)準(zhǔn) 3. 3. 2評價方法4結(jié)果與分析4.1 土壤重金屬測定結(jié)果4.2土壤重金屬評價55結(jié)論6參考文獻(xiàn):7致謝語8敕罐病歸放線菌f2鍛定生物科學(xué)1班封雪指
2、導(dǎo)教師蔣桂芳摘要:篩選拮抗活性茵株和尋找新的活性代謝產(chǎn)物,可為辣椒炭疽病防治提供新的資 源。此文主要研究永川地區(qū)的水果園和蔬菜地采集土壤6份并分離獲得放線菌。以辣椒炭疽 桿菌為目標(biāo)菌,采用抑菌帶測定法,篩選獲得具有拮抗活性的放線菌菌株f2,通過對菌株 f2形態(tài)觀察、培養(yǎng)特征觀察、生理生化反應(yīng)和16srdna鑒定,結(jié)果表明該菌株為鏈霉菌屬 吸水類群 (streptom)ceshygroscopicus )。關(guān)鍵詞:辣椒炭疽??;拮抗放線菌;形態(tài)鑒定;生理生化鑒定analysis and evaluation of soil environment quality ofpeony in dianji
3、ang county of chongqingbiological sciences class one zhou xiatutor li huiheabstract: objective to study the heavy metals in the chief soils of peony in dianjiang county of chongqing and provide a basis for the gap base establishment. methods according to the agricultural sector standard (ny 5010一200
4、1 )of china, 6 pollutants of soil were evaluated by means of single pollution index and synthetic pollution indices. results the result of the research indicated that the single pollution index of all sorts of pollution in the soil was less than 1, shows that soil is not overweight pollutant .the 5.
5、3 % synthetic pollution indices of all sorts of pollution in the soil arc greater than 0.7 and smaller than 1 , in the alert level, the rest of the 94.7 % comprehensive pollution index are all smaller than 0.7 ,shows that soil quality is good, reaching the “cleart and "safe" levels. conclu
6、sion the soil environment quality meets the requirement of the organic ding culture environment.key words: dianjiang; peony; soil environment quality;1引言辣椒炭疽病是半知菌亞門炭疽菌屬collctotrichuni cord)內(nèi)幾個種所引起的真菌 病害口役 辣椒炭疽病可為害辣椒葉片和果實,在病葉上表現(xiàn)出水浸狀褐色圓形斑,病 斑上輪生小黑點;病果上為水浸狀褐色圓形斑,病斑逐漸凸起,形成灰褐色、黑色或 橙紅色小粒點,對植株傷害很大,所以給生產(chǎn)造成重
7、大損失。日前對防治炭疽病有的主 耍方法有依靠化學(xué)藥劑防治和品種改良。近年來由于人們對環(huán)境問題的h益關(guān)注和對綠 色食品的需求,生物防治成為一個很有發(fā)展前途的領(lǐng)域,相關(guān)試驗表明對炭疽病的防治, 生防具有良好的防效。木實驗將已分離得到的對辣椒炭疽病具有拮抗作用的放線菌f2,通過對拮抗放線 菌f2的形態(tài)鑒定和生理生化鑒定,確定菌株的種屬,為進(jìn)一步研究辣椒生物防治提供 實驗條件。2材料與方法2.1材料2.1.1供試靶標(biāo)菌拮抗放線菌f2:分離口永川區(qū)黃瓜山菜園;病原菌:辣椒炭疽病菌 (colletotrichum gloeosporioides)。2丄2培養(yǎng)基放線菌培養(yǎng)用培養(yǎng)基:高氏一號瓊脂培養(yǎng)基;鑒定用
8、培養(yǎng)基:(1)高氏i號合成培養(yǎng)基(gau):可溶性淀粉20 g,硝酸鉀1.0 g,氯化鈉0.5 g,磷酸氫二鉀0.5 g,硫酸鎂0.5 g,硫酸亞鐵0.01 g,瓊脂粉10g, 蒸館水1000 ml,調(diào)節(jié)ph至7.27.4。配置時,先用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀,倒 入煮沸的水中,邊攪拌邊加入其它成分,溶化后,補足水分至1000 ml。121 °c滅菌20 min。(2)克氏 i 號培養(yǎng)基:葡萄糖 20 g, kno31.0g, nacl 0.2 g, k2hpo41 g, mgco30.3 g, cacoso.5 g, feso40.1 g,瓊脂粉 10 g,蒸鐳水 loooml,調(diào)節(jié)
9、 ph7.27.4。(3)蔗糖察氏培養(yǎng)基:蔗糖 30 g, nano33.0 g, k2hpo41.0 g, kc1 0.5g, mgso4 -7h2o 0.5 g, feso4 7h2o 0.01 g,瓊脂粉 10 g,蒸憾水 1000 ml,調(diào)節(jié) ph7.27.4。(4)燕麥片培養(yǎng)基:燕麥片20 g (水煮30 min,過濾取汁),瓊脂粉10g,蒸幗 水 1000 ml,調(diào)節(jié) ph7.2-7.4o(5)葡萄糖天門冬素培養(yǎng)基:葡萄糖10 g,天門冬素0.5 g, k2hpo4o.5 g,瓊脂粉10g,蒸飴水1000 ml,調(diào)節(jié)ph7.27.4。(6)馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(pda):去皮馬鈴薯2
10、00 g (切片沸水煮30 min,過濾 取汁),葡萄糖20 g,瓊脂粉10 g,蒸館水1000 ml,調(diào)節(jié)ph7.2-7.4o(7)明膠液化培養(yǎng)基:蛋白腺5.0 g,葡萄糖20 g,牛肉浸膏3.0 g,酵母浸膏1.0 g,明膠 120 g,蒸餾水 1000 ml,調(diào)節(jié) ph7.27.4, 115 °c滅菌 10 min。(8)牛奶凝固豚化培養(yǎng)基:牛奶(脫脂鮮牛奶)1000 ml,石蕊液(2.5%) 40 ml,115 °c滅菌10 min,間歇滅菌3次。(9)淀粉水解瓊脂:可溶性淀粉 10 g, nacl 0.5 g, kno31.0g, k2hpo40.3 g, mgs
11、o4*7h2o 0.5 g,瓊脂粉 10 g,蒸館水 1000 ml, 121 °c滅菌 20 min。(10)纖維素水解培養(yǎng)基:mgso4 7h2o 0.5 g, nacl 0.5 g, kno31.0g, k2hpo40.5 g,蒸徭水 1000 ml,調(diào)節(jié) ph727.4,濾紙條(0.8x5cm), 115 °c滅菌 10 min。(idh2s產(chǎn)生培養(yǎng)基:蛋白月東10g,胱氨酸0.1 g, na2so40.5 g,麴 水1000ml, 分裝試管后,121 °c滅菌20 mine(12)碳源利用培養(yǎng)基:(nh4)2so4 2.64g, kh2po4 0.5g,
12、 k2hpo40.5g, mgs04 7h2o 0.5g, cuso4 *5h2o 0.0064g, feso4 7出0 o.oollg, mnc" <h2o 0.0079g, znso4 -7h2o 0.0015g,瓊脂粉 15.0g,蒸鐳水 loooml(選用的碳源分別有1%碳源:l阿拉伯糖、d木糖、d葡萄糖、d果糖、l鼠李糖、 蔗糖、d甘露醇、l肌醇)2.2株鑒定2.2.1形態(tài)學(xué)觀察將菌株f2劃線接種于高氏一號培養(yǎng)基,28° c插片培養(yǎng)7天和14天,顯微鏡下 觀察菌休的形態(tài)特征。2.2.2培養(yǎng)特征的觀察將菌株f2分別接種在pda、高氏一號瓊脂、察氏瓊脂培養(yǎng)基、克
13、氏一號培養(yǎng)基、 葡萄糖天門冬素瓊脂培養(yǎng)基、燕麥粉瓊脂培養(yǎng)基、葡萄糖犬冬素瓊脂等培養(yǎng)基上, 28°c培養(yǎng)5天,觀察基內(nèi)菌絲、氣生菌絲的生長狀況和砲子鏈的形態(tài)及孑包子形狀。2.2.3生理生化特性測定測定菌株f2明膠液化、牛奶凝固與陳化、淀粉水解、纖維素的利用、h?s的產(chǎn) 生以及碳源利用等生理生化特性。2.2.4分子生物學(xué)鑒定進(jìn)行了 16srdna的序列分析,其中基因組dna采用堿裂解法14提取質(zhì)粒dma, pcr 擴增采用 16s rrna 通用引物 (16sl 5-' agagtttgat cctgg ctcag-3' ; 16sr 5' -aaggaggtga
14、tccag ccgca-3'), 每 50 u l 體系含 37.5 u lddh20. 10 倍 pcr-buffer5. 0 u i八 2. 5 mmol/l dntp4. 0 u i八 1 u mol/l 引物各 1.0 u i八 5u/ n l la taq dna 聚合酶 0. 5 ul和 110 ng/u l 模板 dna1. 0 ulopcr反應(yīng)條件為:94°c 5min,預(yù)變性;94°c變性os, 60°c退火45s,72°c延伸2 min,共30個循環(huán),最后72°c延伸10 min。取1%的瓊脂糖電泳分析。擴增序列 連
15、入pmd-18t載體,由上海英駿生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序。測得的16s rdna序列與 genbank數(shù)據(jù)庫中序列進(jìn)行blast分析,并利用bioedit和mega 3. 1軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn) 化樹。式屮:p綜一為土壤中綜合污染指數(shù);pmax-為單項污染指數(shù)最大值;一為單項污染 指數(shù)平均值。綜合污染指數(shù)法評價結(jié)杲的分級標(biāo)準(zhǔn)見表2o表2 土壤環(huán)境質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)等級劃分綜合污染指數(shù)污染指數(shù)污染水平1pw0. 7安全清潔207pw1.0警戒級尚清潔3l0pw2.0輕污級超過背景值視輕污染420pw30中污染作物受到中度污染53. 0<p重污染污染已相當(dāng)嚴(yán)重4結(jié)果與分析4.1 土壤重金屬測定結(jié)果各個樣
16、點的土壤屮的銅、鎘、珞、鉛、碑、汞單項指標(biāo)元素均有不同程度的檢出。根據(jù)具測定結(jié)果進(jìn)行了分析。土壤監(jiān)測分析結(jié)果見表3。表3牡丹土壤的重金屬監(jiān)測樣點phcu/mg. kg-1cd/mg. kg-1cr/mg. kg-1pb/mg. kg-1as/mg. kg-1hg /mg. kg-118. 1225. 360. 1754. 5429. 5416. 320. 0428.0521. 200.3051.2937.4817.400. 0238. 1522.200. 3051.9637. 6615.880. 0348. 3321. 190. 3243.993& 1313. 500. 0258. 1
17、415. 150. 5344. 9931.4312.420. 0268. 3223. 590. 3252.0535. 5915. 140.017& 3124. 950. 2852. 0934. 8815.600. 0286. 6422.860.0750. 4530. 489. 240. 0695. 7626. 340. 1244. 9929.011& 020.07107. 5128.990. 1046. 5332.9615. 640. 12118.2421.460. 1347.4038. 3514. 280. 03128. 1418. 340. 1348. 5934. 0916
18、.410. 03136. 3326. 010. 1050. 8637.9014. 800. 06147.9423.430. 1656. 8042.9421.820. 0615& 1216. 540. 1953. 2533. 1011. 340. 03168. 1524.680. 2855. 3441.0624. 200. 05178. 1926. 010. 2450. 7934.8620. 700. 0418& 226.990. 2854. 2434. 6019. 440. 02198. 0425. 040. 3052. 0834. 5016. 040.03平均值7. 8323
19、. 180. 2350. 6435. 1916. 220.04標(biāo)準(zhǔn)偏差0. 743. 590. 113.683. 733. 590.03變異系數(shù)0. 090. 150.490. 070. 110. 220.61從表3結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn),各采樣點的ph值相差不是很大;各采樣點土壤重金屬含量差異較明顯。各土壤重金屬的變異系數(shù)在0. 070.61,其含量高低相差懸殊,說明 污染源的存在及其對土壤重金屬含量所產(chǎn)生的影響人。cu的含量范|韋|在15. 1528. 99 mg. kg-1,平均值為23. 18 mg. kg-1,變異系數(shù)為0. 15,說明各地cu的含量差異不太大;cd的含量范圍在0. 070.
20、53 mg. kg-1,平均值為0.23 mg. kg1,變異系數(shù)為0. 49,說明 各采樣點cd含量的差異較大;cr的含量范圍在43. 9956. 80 mg. kg1,平均值為50. 64mg. kg-1,變異系數(shù)為0. 07,說明cr含量的差異不大;pb的含量范圍在29. 0142. 94 mg. kg-1,平均值為35. 19 mg. kg-1,變異系數(shù)為0. 11,說明pb含量的差異不太大;as 的含量范圍在9. 2424. 20 mg. kg1,平均值為16. 22 mg. kg1,其變杲系數(shù)為0. 22,各 地as的含量差異大;hg的含量范圍在0. 010. 12 mg. kg-
21、1,平均值為0. 04 mg. kg1, 其變異系數(shù)為0. 61,說明hg含量差異很大"°。4.2 土壤重金屬評價對牡丹主產(chǎn)區(qū)種植土壤重金屬含屋運用上述評價標(biāo)準(zhǔn)得到評價結(jié)果(見表4)。表4 土壤重金屬評價結(jié)果采樣地點單項污染指數(shù)綜合污染指數(shù)污染水平cucdcrpbashg10. 250. 280. 220. 080. 650. 040. 50清潔20. 210. 510. 210. 110. 700. 020. 53清潔30. 220. 500. 210. 110. 640. 030.49清潔40.210.530. 180. 110. 540. 020.43清潔50. 15
22、0.880. 180. 090. 500.020.65清沽60. 240. 540.210. 100. 610. 010.47清潔70.250.470. 210. 100. 620. 020.48清潔80.230. 240. 250. 100. 310. 120. 26清潔90. 530. 390. 300. 120.450. 240.44清潔100. 290. 170. 190. 090. 630. 120.48清潔110. 210. 210. 190. 110. 570. 030.43清潔120. 180.220. 190. 100. 660. 030.49清潔130. 520. 340.
23、 340. 150. 370.220.43清潔140.230.270.230. 120. 870. 060. 65清潔150. 170. 320. 210. 090. 450. 030. 35清潔160.250. 460. 220. 120. 970. 050. 73尚清 潔170.260. 390. 200. 100.830. 040. 62清潔180. 270. 470. 220. 100. 780. 020. 59清潔190. 250. 500.210. 100.640. 030. 50清潔平均值0. 260. 400. 220. 110. 620. 060. 50清潔從土壤覓金屬評價結(jié)
24、杲中可以看出,采樣點全汞、全偌、全鉛、全銅單項污染指數(shù) 均較低;汞的單項污染指數(shù)范i韋i為0.010.24,鎘的單項污染指數(shù)為0. 170. 88,珞 的單項污染指數(shù)范圍為0. 180. 34,鉛的單項污染指數(shù)范圍為0. 080.15,銅的單項 污染指數(shù)范圍為0. 150.53。但礎(chǔ)的單項污染指數(shù)范圍相對較高,為0.310.97,最 大值為0.97,接近1 了,應(yīng)引起注意。齊項重金屬的單項污染指數(shù)范圍單項污染指數(shù) 均小于1,表明土壤無超標(biāo)污染物。綜合污染指數(shù)評價結(jié)果顯示,94.7%±壤樣地的綜 合污染指數(shù)均小于0.7,污染等級為安全,處于“清潔”的水平;5.3%的土壤樣地的 綜合污染
25、指數(shù)大于0.7,處于警戒級,污染水平為“尚清潔”,雖然還未受到污染,但 已經(jīng)足夠引起我們的重視,在今后的施吧過程中尤其要謹(jǐn)慎。5結(jié)論牡丹在地生長時間較長,一般需要45年左右的時間才能采挖,因此土壤質(zhì)量對 于優(yōu)質(zhì)藥材的形成尤為重要。h前,牡丹主產(chǎn)區(qū)的土壤環(huán)境質(zhì)量狀況良好。土壤質(zhì)量的 平均綜合污染指數(shù)為0. 58,屬于清潔范圍,表明牡丹種植基地的土壤質(zhì)量符合屮藥 材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(gap)的相關(guān)要求,適合綠色藥材的栽培。在今斤的生產(chǎn)發(fā)展過程中,要注意牡丹藥材的施肥,農(nóng)藥噴灑應(yīng)堅持科學(xué)合理的原 則,既要保證藥材質(zhì)量,乂耍注意使具免受病蟲害威脅。藥材的肥料應(yīng)盡量選擇農(nóng)家肥, 減少使用化吧,避免重金屬
26、的污染帥保證產(chǎn)區(qū)優(yōu)質(zhì)生態(tài)環(huán)境的持續(xù)。并且應(yīng)定點、 定期對牡丹主產(chǎn)區(qū)基地的環(huán)境狀況進(jìn)行監(jiān)測,防治重金屬的富集,確保牡丹產(chǎn)地土壤環(huán) 境質(zhì)量符合綠色藥材生產(chǎn)需要,促進(jìn)墊江牡丹藥材生產(chǎn)健康、持續(xù)發(fā)展。參考文獻(xiàn):1 陸家云.植物病原真菌學(xué)m.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2001. 454 456.2 高必達(dá).園藝植物病理學(xué)m.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2005.179 -180.3 汪愛娥,丁克堅,馬珂辣椒炭疽病的研究進(jìn)展j.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005, 33 (3): 508 509.4 馬榮群,黃粵,宋正旭,等.辣椒炭疽病3病原核糖體基因its區(qū)的序列測定及分析j. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2007, 20 (6): 1234 - 1237.5 po po than, haryudian prihastuti, sitthisack phoulivong, et a 1 .chili anthracnose disease caused by col 1etotri
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