儀器分析筆記《高效液相色譜分析》

1、第二章高效液相色譜分析§ 2高效液相色譜法概述（掌握）2.1.1高效液相色譜法的特點(diǎn)1、與經(jīng)典液相色譜法比較經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜法色譜柱長(zhǎng)inm1002000100250柱內(nèi)徑/mm10 5036填料粒徑屮m75 600310柱刖壓力mpa0.001 0.1220柱效（理論塔板數(shù)）/m2502x1035x104進(jìn)樣量/g110106 10-2分析時(shí)間/h1200.05-1.02、與氣相色譜法比較氣相色譜法高效液相色譜法對(duì)樣品要求容易氣化或裂解有適當(dāng)?shù)娜軇┤芙饬鲃?dòng)相惰性氣體 動(dòng)力粘度10-pa-s 柱前壓力230mpa極性、非極性液體及緩沖溶液 動(dòng)力粘度10-3pas 柱前壓力0

2、.1-0.5mpa固定相種類較多 粒度 0.10.5mm種類較少 粒度310ym色譜柱（內(nèi)徑 xz）nnnxm填充柱14x 13 毛細(xì)管柱0.25 0.5x10100填充柱056x003 毛細(xì)管填充柱0 03 0.05x0.15 0一5柱效（理論塔板數(shù)）.，m103 1041(/io：柱溫/匸室溫300室溫60分離過(guò)程中的作用固定相組分固定相組分流動(dòng)相分曷機(jī)制吸附、分配吸附、分配、離子交換、凝膠阻影響分罔 的重要因 素組分在氣相中的擴(kuò)散系數(shù)大， 104cm2/s；柱溫影響很大溫300）； 柱外效應(yīng)及死體和影響較小組苓在液相中的擴(kuò)散系數(shù)很小，10?cm2 s；柱溫影響很小理溫60）；柱外效應(yīng)及死

3、體積影響很大檢測(cè)器通用型：tcd、fid 專用型：ecd、fpd、npd 最高靈敏度:io-ug通用型：elsd、rid專用型：uvd、pdad、ed、ecd 最高靈敏度：1042g應(yīng)用氾圍永久性氣休；350°c低沸點(diǎn)化合物（分 子量：110?）;易裂解的高分子化合物 （分子量：10210彳）； 可用于制備。曷子型化合物；高分子量、高沸點(diǎn)化合物（分子量：503 x 103）；高分子、生命活性化合物（分子量： 103 106）；難用于制備3、高效液相色譜法的發(fā)展a、固定相的變化填料粒度減小，粒型規(guī)整；鍵合型固定相；整體結(jié)構(gòu)固定相；親和固定相?？谇埃霈F(xiàn)使用 l.oym填料的超高壓液相色

4、譜。b. 流動(dòng)相變化目前，出現(xiàn)120220°c超熱水為流動(dòng)相、fid和fpd檢測(cè)器的hplc。c、全新方法剪切流路液相色譜；不同分離機(jī)制組合的多維液相色譜以及hplc與ms、nmr、ir聯(lián)用的 多維液相色譜法。4、高效液相色譜法的特點(diǎn) 高壓:采用高壓輸液設(shè)備，（150350） x 105 pa 高速：分析速度快； 高效：柱效很高。（n>30000）,可以在數(shù)分鐘內(nèi)完成數(shù)百種物質(zhì)的分離； 高靈敏度：10 9g （uv）； 10_,g （熒光檢測(cè)）。5、高效液相色譜法的局限 溶劑用量太大; 缺乏諸如氣相色譜使用的tcd、fid通用型檢測(cè)器; 不能替代氣相色譜法,難分離化合物（柱效1

5、0萬(wàn)以上），必須使用毛細(xì)管氣相色譜法進(jìn)行分離; 不能替代中、低壓柱色譜法，一些生物活性化合物不能承受200kpaimpa壓力。§ 2.2彰啊色避嵯礦度孚色港金賈駒亙賽（工解）高效液相色譜法的基本概念及理論基礎(chǔ)，與氣相色譜法是基本一致的，其區(qū)別主要在于 流動(dòng)相的不同?，F(xiàn)根據(jù)速率理論及色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的彫響討論如下：uc cl2 c a m p * smd5-mm高效液相色譜的范氏方程：/ = 2阿+少 +若將上式簡(jiǎn)化，可寫(xiě)作:h = a + + cuu這與氣相色譜的速率方程形式是基本一致的，主要區(qū)別在于縱向擴(kuò)散項(xiàng)可以忽略不計(jì)，影響柱效的主要因素是傳質(zhì)項(xiàng)。1、渦流擴(kuò)散項(xiàng)比=2祕(mì) 式中

6、2：填充不規(guī)則因子；dp：填料平均直徑。e它與載體流速無(wú)關(guān)；愆 若柱子填充均勻，填料的顆粒也均勻，則2t0=>h,t0=>柱效高；若填充不均勻， 幾產(chǎn)=> 巴/ =>柱效低。2、縱向擴(kuò)散項(xiàng)u式中cd：常數(shù)；2”：擴(kuò)散系數(shù)；流動(dòng)項(xiàng)的線速度。e由于分子在液體中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中要小45個(gè)數(shù)量級(jí)，因此在液相色譜中,當(dāng)流動(dòng)相線 速度大于0.5 cims"時(shí),這個(gè)縱向擴(kuò)散項(xiàng)對(duì)色譜峰擴(kuò)展的影響實(shí)際上是可以忽略的,而氣相色 譜法中這一項(xiàng)卻是重要的。3、傳質(zhì)阻力項(xiàng)（1）固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)式中c ：與k （容量因子）有關(guān)的系數(shù)；df：固定液厚度；ds：擴(kuò)散系數(shù)。固定相引起峰擴(kuò)展

7、解決辦法： 液液分配色譜：使用薄的固定相；吸附、排阻和離子交換色譜：使用小顆粒填料。（2）流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)流動(dòng)的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力項(xiàng)cdh貯%式中5 常數(shù)（與£有關(guān)，其值取決于柱直徑、形狀和填充的填料結(jié)構(gòu)）; % 流動(dòng)相中擴(kuò)散系數(shù)；dp：為填充物的平均直徑。滯留的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力項(xiàng)hsin“原因：多孔固定相造成的部分流動(dòng)相滯留。% =2式中常數(shù)（與顆粒微孔中被流動(dòng)相所山據(jù)部分的分?jǐn)?shù)及容量因子有關(guān)）。固定相的粒度to =其微孔孔徑too =傳質(zhì)途徑to =傳質(zhì)效率t8 =柱效= too。2. 2.2 液相色譜的h-u曲線1、液相色譜與氣相色譜h-u1 .b/u 2.cu 3.a 4.

8、hplc 的"初 5.gc 的 hplc板高h(yuǎn)比gc小一個(gè)數(shù)量級(jí)，說(shuō)明hplc柱效高； 對(duì)于hplc,為了取得良好的柱效，流速不一定要很高。2、降低h,提高柱效的方法 減小填料粒度； 減小填料孔穴深度； 用低粘度溶劑作流動(dòng)相； 釆用低速流動(dòng)相（通常：=1 ml.min）。§2.3高效液相色譜法的主要類型及其分離原理（理解）糧駆固麺和曲機(jī)錘的不面廠浚廂笆譜法可芬乳1、液液分配色譜法（llc）2、液固吸附色譜法（lsc）3、離了對(duì)色譜法（ipc）4、離子交換色譜法（iec）5、離子色譜法（ic）6、空間排阻色譜法（sec）2. 3.1液一液分配色譜及化學(xué)鍵合相色譜全多孔型擔(dān)體

9、表面多孔型擔(dān)體1、液一液分配色譜基于組分在兩相間的分配容量因子力的差異而實(shí)現(xiàn)分離的。 a、固定相：載體+固定液 0,嚴(yán)氧二丙月青聚乙二醇異三十烷（角鯊?fù)椋゜、c、載體：硅膠；分類：根據(jù)固定液和流動(dòng)相（溶劑）的極性不同，可分為正相液液分配色譜和反相液液分配色譜。e為了避免固定相流失，固定相和流動(dòng)相極性要相差大。（與gc不同，gc：極性相似相溶）愆分析對(duì)象與固定液極性一致;/正相色譜：固定液為極性，流動(dòng)相為非極性（固定邏極性流動(dòng)相極性）；z反f片色豎丄保書(shū)普經(jīng)21丄“廠比0、甲醇等使用方便；價(jià)格便宜固定液為非極性，流動(dòng)j由于液一液分配色譜固定相易流失，現(xiàn)已被化學(xué)鍵合相色譜所替代。d、原理:由于試樣

10、組分在固定相和流動(dòng)相之間的相對(duì)溶解度存在差異，因而溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。當(dāng) 達(dá)到平衡時(shí)，物質(zhì)的分配同樣服從下式：c v«=厶=2g vs式中k：分配系數(shù)；k：容量因子；c,：溶質(zhì)在固定相屮的濃度；c,j溶質(zhì)在流動(dòng)相屮的濃度；%：流動(dòng)相體積；%固定相體積。e分離的順序決定于分配系數(shù)的大小，分配系數(shù)大的組分保留值大，后岀峰；e液相色譜法中，流動(dòng)相的種類對(duì)分配系數(shù)有著較大的影響。e、應(yīng)用：液一液色譜能分離多種類型化合物，如烷怪、烯怪、芳怪、染料、番族化合物等。2、化學(xué)鍵合固定相色譜通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)基團(tuán)鍵合到硅膠（載體）表面上，代替機(jī)械涂漬的液體固定相。這種固定 相避免了固定相流失，大大改

11、善了固定相功能，適用于梯度洗脫，分離選擇性大大增加。e 化學(xué)鍵合相色譜的出現(xiàn)，是hplc的重大突破；e 化學(xué)鍵合色譜是hplc最常用的固定相，大約占hplc固定相的四分之三；愆它適用于分離幾乎所有類型的化合物。2.3.2 液一固吸附色譜法流動(dòng)相：液體，固定相：吸附劑1、原理：基于組分在固體吸附劑表面上具有不同吸附能力而分離的。組分分子結(jié)構(gòu)與吸附劑幾何結(jié)構(gòu)相適應(yīng)時(shí)，易于吸附。2、固體 極性的硅膠（應(yīng)用最廣）； 氧化鋁； 分子篩； 非極性的活性炭。3、應(yīng)用： 分離幾何異構(gòu)體； 分離含極性基團(tuán)相同但數(shù)目不同的試樣，但不能用于分離同系物; 分離具有屮等分子量的非極性或極性的、非離子型的油溶性樣品。4、

12、缺點(diǎn):由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現(xiàn)象2. 3. 3 離子對(duì)色譜法分離強(qiáng)極性的有機(jī)酸、堿存在的問(wèn)題:用正相色譜：保留值太大、峰拖尾, 用反相色譜：保留太小其至不出峰!口離子對(duì)色譜法1、定義：將一種（或多種）與溶質(zhì)分子電荷相反的離子（稱為對(duì)電子或反電子）加入到流動(dòng)相或同定相中，使其于溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對(duì)化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行 為。2、分離機(jī)理離子對(duì)色譜的分離機(jī)理有不同的假說(shuō)，現(xiàn)以離子對(duì)分配機(jī)理說(shuō)明：在色譜分離過(guò)程中，流動(dòng)相待分離的有機(jī)離子x（也口j以是帶負(fù)電荷的離子）與固定相或流 動(dòng)相中帶相反電荷的對(duì)離子y結(jié)合，形成離子對(duì)化合物x+y ,然后在兩相中分配：e由于離子對(duì)疏水性

13、質(zhì)不同，導(dǎo)致各組分保留時(shí)間不同； 愆離子對(duì)試劑：分析堿t烷基磺酸鈉；分析酸一四丁基季胺鹽。2. 3.4 離子交換色譜法1、固定相：離子交換樹(shù)脂流動(dòng)相：水緩沖溶液；甲醇；乙醇+水緩沖溶液2、原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時(shí)間長(zhǎng)；陽(yáng)離了交換：rso3h+m' =rso3m+ h +陰離子交換：rnr40h+x= rnr4x+oh-3、適合于分析： 在溶液中能形成離子的組分 有機(jī)物和生物物質(zhì)，如：蛋口質(zhì)、氨基酸、核酸等的分離。2. 3. 5 離子色譜法離子色譜以無(wú)機(jī)、特別是無(wú)機(jī)陰離子混合物為主要分析

14、對(duì)象,近30年有了迅速發(fā)展。1、離子交換色譜存在問(wèn)題：用電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)，流動(dòng)相是強(qiáng)電解質(zhì)，強(qiáng)背景完全掩蓋待測(cè)離子信號(hào)。2、抑制柱：使高背景電導(dǎo)的流動(dòng)相轉(zhuǎn)變?yōu)榈捅尘暗牧鲃?dòng)相。nrh淋洗液陰h養(yǎng)子» 交換樹(shù)脂 1975年small提出在離子交換柱后，再串結(jié)一根抑制柱。抑制柱裝填與分離柱電荷完全相反的離子交換樹(shù)脂。如：分析陰離子樣品br, naoh為流動(dòng)相；抑制柱為rh+；為窓母陽(yáng)黴陰）離子交換樹(shù)脂t亟聲ml通過(guò)抑制柱后：naoh +rh* ->h2o +rnanabr +rh+ -> hbr +rna“由于h十淌度為na+的7倍，捉高了檢測(cè)的靈敏度；/ ic述可以分析氨基酸、

15、糖類及冇機(jī)陽(yáng)離子；/由于抑制柱要定期再生，現(xiàn)代ic中，多采用在離子交換柱后接抑制器來(lái)實(shí)現(xiàn)以上目的。3、陰離子分析示例：七種陰離子在20分鐘內(nèi)基本上得到完全分離各組分含量：350 ppm；05(a)10圖1520 min 04812 bin（b）七種標(biāo)準(zhǔn)陰離子分離譜圖|2. 3. 6 空間排阻色譜法（凝膠色譜法）根據(jù)試樣分子的尺寸進(jìn)行分離的色譜技術(shù)1、分離原理：“固定相凝膠內(nèi)有一定大小的孔穴；/分子體積犬的不能滲入孔穴而被排阻，較早被淋洗出來(lái)；2、分離范圍:/小分子則完全滲透，最后流出色譜柱。相對(duì)分子質(zhì)量20002000000之間合成高分子的分子量（分布）的測(cè)定。3、空間排阻色譜的特點(diǎn)： 可提供

16、分子尺寸、結(jié)構(gòu)信息;易檢測(cè)保留時(shí)間短，峰窄，可采用低靈敏度檢測(cè)器; 柱壽命長(zhǎng)固定相與分子間作用力弱; 分了質(zhì)量差別大于10%才能分離。g總結(jié)：選擇色譜分離方法的一般原則易揮發(fā)、分子量v 200的樣品：gc ； 分子量在2002000的樣品：hlpc ； 分子量 >2000 : gfco；§2.4液相色譜固定相（了解）2.4.1 液一液色譜、鍵合相色譜及離子對(duì)色譜固定相1、擔(dān)體（1）全多孔型擔(dān)體4由直徑為510屮n的硅膠微粒凝聚而成；丄顆粒細(xì)，孔較淺，傳質(zhì)速率快，柱效高；4是目前應(yīng)用最廣泛的擔(dān)體。（2）表層多孔型擔(dān)體丄 實(shí)心玻璃球（3040pm ）外面覆蓋一層多孔活性材料； 丄

17、孔層厚度小、孔淺，出峰迅速、柱效高；多孔層厚度薄，容量低。2、化學(xué)鍵合相固定相：/硅氧烷型鍵合相應(yīng)用最廣泛。/ 十八烷基鍵合硅膠（octadecylsilanc, ods , c18）最常用 制備:sic18h37-si oh-si-oh + ci8h37sicl3一 si oh正和色譜代表性固定相：改性硅膠、鼠基柱；反相色譜代表性固定相：c18； c8；反相色譜是當(dāng)今液相色譜的最主要分離模式。探 化學(xué)鍵合固定相特點(diǎn)： 固定相傳質(zhì)很快。表面沒(méi)有液坑，比一般液體固定相傳質(zhì)快得多 固定液不易流失，柱壽命長(zhǎng)。由于鍵合到載體上的基團(tuán)不易被剪切而流失，增加色譜柱穩(wěn)定 性和壽命。 可以鍵合不同官能團(tuán)，提高

18、了應(yīng)用范圍和選擇性。 特別適合于梯度洗脫，有利于高靈敏檢測(cè)和收集館分。2. 4. 2 液一固吸附色譜、離子交換色譜、空間排阻色譜固定相1、液一固吸附色譜法固定相/硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等。/常用510微米的硅膠微粒。2、離子交換色譜固定相（1）薄層型離子交換樹(shù)脂（2）離子交換鍵合固定相3、空間排阻色譜固定相（1）軟休凝膠（2）半硬質(zhì)凝膠（3）硬質(zhì)凝膠§2.5液相色譜流動(dòng)相（了解）hplc流動(dòng)和是液體，選擇余地大；它參與固定和對(duì)組分的競(jìng)爭(zhēng)（與gc不同）。1、對(duì)流動(dòng)相溶劑的要求是:（1）能溶解樣品，但不與樣品反應(yīng)。（2）與固定相不互溶，也不發(fā)生不可逆反應(yīng)。（3）粘度要盡可能?。ūＷC

19、高的滲透性和柱效）（4）與所用檢測(cè)器相匹配。（5）高純度、易精制、價(jià)格盡量便宜。e正相色譜代表性流動(dòng)相：正己烷。愆 反相色譜代表性流動(dòng)相：甲醇/水、乙月青/水、水和無(wú)機(jī)鹽的緩沖液2、在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)常用溶劑的極性順序：水（最大）甲酰胺乙睛里蟹乙醇丙醇內(nèi)酮二氧六環(huán)四氫咲喃甲乙酮正丁醇 乙酸乙酯乙瞇異內(nèi)儲(chǔ) 1氯甲烷氯仿渙乙烷菲四氯化碳二硫化碳環(huán)己烷己 烷 煤油（最?。┰谶x擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。例如，采用正相液液分配分離時(shí)：首先選擇 中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增 加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。19高

20、噴權(quán)相色譜儀結(jié)悔肓址圏:§2.6高效液相色譜儀（了解）貯液器 咼壓泵 梯度洗提裝置進(jìn)樣器色譜柱檢測(cè)器恒溫器 色譜工作站2.6. 1 高壓泵1、作用：將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜柱hplc柱徑較細(xì)，所填固定相粒度很小，對(duì)流動(dòng)相的阻力較大，高壓泵可使流動(dòng)相能較 快地流過(guò)色譜柱。2、工作壓力:150x10m50x 105pa,流量可調(diào)3、分類：恒流泵和恒壓泵（1）往復(fù)式柱塞泵;（2）氣動(dòng)放大泵。2. 6. 2梯度洗提1、原理：用兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續(xù)改變它們之間的比例，使流動(dòng)相的強(qiáng)度、極 性、ph值或離子強(qiáng)度相應(yīng)地變化，達(dá)到提高分離效果，縮短分析時(shí)間的目的。梯度

21、洗提裝置所起的作用與gc中的程序升溫十分相似。區(qū)別： 梯度洗脫：通過(guò)改變流動(dòng)相極性、ph值和離子強(qiáng)度等改變k值； 程序升溫：通過(guò)改變溫度達(dá)到改變&值的目的。2、梯度洗提特別適合復(fù)雜樣品的分離2. 6. 3 進(jìn)樣裝置1、注射器進(jìn)樣裝置（停留進(jìn)樣，性麻煩；不準(zhǔn)，重現(xiàn)性差）2、高壓定量進(jìn)樣閥通過(guò)六通閥直接向壓力系統(tǒng)進(jìn)樣，不必停止流動(dòng)相流動(dòng)。 由于進(jìn)樣量可由樣品管控制，因此進(jìn)樣準(zhǔn)確，重復(fù)好。進(jìn)裝入樣品譜柱采樣環(huán)3、六通閥工作原理:(體積小于進(jìn)樣器)采樣狀態(tài)誑祥狀態(tài)對(duì)檢測(cè)器的要求：靈敏度高，重復(fù)性好、線性范寬、死體積小、噪聲小、響應(yīng)快。2. & 4 色譜柱 色譜柱一般用內(nèi)部拋光的不銹鋼制

22、成；為了使工作壓力不致過(guò)高，柱長(zhǎng)比較短。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm,長(zhǎng)25cm。柱內(nèi)裝有510pm的填料填充方式：干法填充、濕法填充2. 6. 5檢測(cè)記錄系統(tǒng)hplc常用的檢測(cè)器有:紫外檢測(cè)器熒光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(1)紫外檢測(cè)器檢測(cè)原理同uvvis方法一樣。采用微量吸收池：光程為210mm,體積約為110)il。 hplc中約有80%的物質(zhì)可在254nm或280nm處產(chǎn)生紫外吸收。要求：溶劑必須能讓所選擇的光透過(guò)。i接色譜柱光電倍增管廢液i二極管陣列檢測(cè)器(diodearray detector, dad,或 pda) 二極管陣列檢測(cè)器快速、方便，近

23、些年應(yīng)用普及。 dad無(wú)需停留掃描，可觀察色譜流出物的動(dòng)態(tài)光譜。 經(jīng)計(jì)算機(jī)處理可以得到三維色譜一光譜圖。光電二極管陣列檢測(cè)所獲得的三維色譜光譜圖(2)熒光檢測(cè)器(fluorescence detector)利用試樣的熒光特性來(lái)檢測(cè)。靈敏度比uv檢測(cè)器高23個(gè)數(shù)量級(jí)。特別適合的物和生物化學(xué)樣品分析：稠環(huán)芳坯、氨基酸、蛋口質(zhì)、酶局限性：應(yīng)用范圍窄(3) 示差折光檢測(cè)器(ri) 依據(jù)樣品組分與流動(dòng)相對(duì)光的折射率不同來(lái)檢測(cè) 特點(diǎn)'是-種通用型檢測(cè)器；靈敏度低(低uv等13個(gè)數(shù)量級(jí))；溫度要求嚴(yán)格，不能用于梯度洗提；應(yīng)用：無(wú)紫外吸收的有機(jī)物、高分了化合物、糖類、脂肪烷姪凝膠色譜必備的檢測(cè)器，也常

24、用在制備色譜屮。不鐫鋼底板光源i液休 流動(dòng)相(4) 電導(dǎo)檢測(cè)器(electrical conductivity detector)離子色譜必備的檢測(cè)器根據(jù)物質(zhì)電離后產(chǎn)生電導(dǎo)變化來(lái)測(cè)定電離物質(zhì)含量。主要部件：電導(dǎo)池特點(diǎn)和要求： 需恒溫，不能用于梯度洗提 ph>7,不靈敏，(5) 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(elsd) 基于溶質(zhì)的光散射性質(zhì)的檢測(cè)器構(gòu)成：霧化器、加熱漂移管、激光光源和光檢測(cè)器原理： 色譜柱流出液霧化后通過(guò)加熱漂移管; 流動(dòng)相屮溶劑被蒸發(fā)，留下溶質(zhì)； 激光束照在溶質(zhì)顆粒上產(chǎn)生散射光； 散射光信號(hào)t電信號(hào)。 特點(diǎn)和應(yīng)用：/ 屬通用型檢測(cè)器?！?適合于無(wú)紫外吸收、無(wú)電活性和無(wú)熒光發(fā)射樣品的檢

25、測(cè)。/ 優(yōu)于ir：信噪比高，可梯度洗提hplctt蒸發(fā)激光散射檢測(cè)器工作原理示意圖表2-6-1 hplc中常見(jiàn)檢測(cè)器的基本特性檢測(cè)器檢測(cè)下限/（0ml）線性范圍選擇 性梯度 淋洗主要特點(diǎn)紫外可見(jiàn)光io-10l(p-104有可對(duì)流速和溫度變化敏感；池體 積可制作得很?。粚?duì)溶質(zhì)的響 應(yīng)變化大。熒光10上103103有可選擇性和靈敏度高；易受背景、示差折光l(h7104無(wú)水口可檢測(cè)所有物質(zhì)； 不適合微量分析； 對(duì)溫度變化敏感物質(zhì)電導(dǎo)10103有不可離子性物質(zhì)通用檢測(cè)器, 受溫度和流速彩響,田>ti-紜發(fā)光散 射io-9無(wú)可可檢測(cè)所有物質(zhì)。§2.7高效液相色譜分離類型的選擇（了解）2.

26、 7.1 色譜分離類型的選擇1、根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量選擇 200以下-氣相色譜法 2002000-液固吸附、液液分配和離子交換色譜法。高于2000 ->凝膠色譜法2、根據(jù)溶解度選擇水溶性樣品-> 離子交換和液液分配色譜法；微溶于水、易電離樣品-用離子交換色譜法;油溶性或相對(duì)非極性樣品-液固色譜法。3、根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)選擇異構(gòu)體的分離-液固色譜法；同系物和具有不同官能i才i化合物-> 液一液分配色譜;生物大分子或高分子聚合物-> 凝膠色譜法；離子基團(tuán)和能電離基團(tuán)組分-> 離子交換色譜。表2-7-1液相色譜分離類型選擇參考表分子量水溶性>2000可溶不涪不溶<20

27、00可溶但不解離可溶且不解離可溶離子或非藹子方法流動(dòng)相排阻色譜水排阻色譜水分配色譜（同系物）各種吸附色譜（異構(gòu)物）各種排阻色譜（分子大?。└鞣N反相液液色譜各種排阻色譜水陽(yáng)離子交換色譜（堿）緩沖液陰離子交換色譜（酸）緩沖液反相蠱子色譜緩沖液；§2.8高效液相色譜應(yīng)用實(shí)例（了解）2. 8.1高效液相色譜應(yīng)用領(lǐng)域與分析對(duì)象舉例領(lǐng)域分析對(duì)象舉例環(huán)境常見(jiàn)無(wú)機(jī)陰陽(yáng)咼子、多環(huán)芳姪、多氯聯(lián)苯、硝基化合物.有害重金屬 及其形態(tài)、除草劑.農(nóng)藥、酸沉降成分。衣業(yè)土壤礦物成分.肥料.飼料添加劑、茶葉等農(nóng)產(chǎn)品中無(wú)機(jī)和有機(jī)成分。石油姪類族組成、石油中微量成分。化工無(wú)機(jī)化工產(chǎn)品、合成高分子化合物、表面活性劑、洗滌

28、劑成分.化妝 品、染料。材料液晶材料.合成高分子材料。食品無(wú)機(jī)陰陽(yáng)禺子、有機(jī)酸.氨基酸.糖.維生素.脂肪酸.香料、甜味 劑.防腐劑.人工色素.病原微生物.霉菌毒素.多核芳坯。生物氨基酸.多肽、蛋白質(zhì)、核糖融.生物胺.多糖、酶、天然高分子 化合物。醫(yī)藥入休化學(xué)成分、各合成藥物成分.各種天然植物和動(dòng)物藥物化學(xué)成分。§2.9液相制備色譜（了解）冇機(jī)復(fù)雜樣品的組成、結(jié)構(gòu)分析時(shí)常需要純化=制備色譜成為最冇力的手段 制備色譜：以色譜技術(shù)來(lái)分離、制備較大量的純組分2. 9.1液相制備色譜的特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)1、與分析色譜的區(qū)別:柱容量大 冇組分收集器2、用hplc制備的優(yōu)勢(shì):分離條件溫和 一般不破壞試樣

29、有利于試樣收集2. 9. 2 液相色譜制備的幾個(gè)主要問(wèn)題1、色譜柱容量制備柱比與分析型柱柱容量要大。 分析型柱：內(nèi)徑：4.6 mm 制備柱： 內(nèi)徑：10mm, 20 mm , 50 mm. 一次可以制備0.1lmg純品e 制備色譜主要限制之一：進(jìn)樣量 w柱效t0 =分離度t0 ;2、液相制備色譜方法：在分析型hplc試驗(yàn)，優(yōu)化，試出最大允許量。3、液相制備色譜儀檢測(cè)器后增加自動(dòng)幗分收集器；可將試樣組分按順序收集在玻璃管內(nèi)。§2.10毛細(xì)管電泳（ce） （了解）2.10.1 毛糾9管電泳的基本原理與儀器裝置1、基本原理電泳：在電場(chǎng)作用下，帶電粒子在介質(zhì)屮定向移動(dòng)。毛細(xì)管電泳：利用被分析離子在電場(chǎng)作用下移動(dòng)速率不同而達(dá)到分離目的。 ce分析對(duì)象：在毛細(xì)管緩沖溶液中能離解為離子的物質(zhì)。它有多種分離模式可以分離離子和中性分子可以采用hplc中的各種檢測(cè)方法（1）經(jīng)典電泳的局限性電場(chǎng)強(qiáng)度低：離子遷移速度慢，分離吋間長(zhǎng)，組分?jǐn)U散嚴(yán)重，分離效果差。焦耳熱使組分?jǐn)U散嚴(yán)重（電泳電流大）。（2）高效毛細(xì)管電泳在技術(shù)上的兩項(xiàng)重要改進(jìn)：采用了極細(xì)內(nèi)徑的毛細(xì)管（2575pm）,減小了焦耳熱導(dǎo)致峰擴(kuò)展（毛細(xì)管散熱效率高）采用了數(shù)