微生物分離與純化技術(shù)ppt課件

1、微生物分別與純化技術(shù)微生物分別與純化技術(shù)環(huán)境學(xué)院朱紅力環(huán)境學(xué)院朱紅力 環(huán)境微生物課程實驗環(huán)境微生物課程實驗一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?掌握從土壤中分別培育微生物的方法，從而獲掌握從土壤中分別培育微生物的方法，從而獲得假設(shè)干種微生物純培育技藝。得假設(shè)干種微生物純培育技藝。二、實驗器材及設(shè)備二、實驗器材及設(shè)備1、無菌培育皿直徑、無菌培育皿直徑90毫毫米、無菌吸管米、無菌吸管1毫升、盛有毫升、盛有90毫升無菌水的錐形瓶、盛毫升無菌水的錐形瓶、盛有有9毫升無菌水的試管毫升無菌水的試管5支。支。 2、培育基已滅菌的、土、培育基已滅菌的、土壤顆粒。壤顆粒。3、接種環(huán)、酒精燈、接種環(huán)、酒精燈、恒溫箱培育箱、恒

2、溫箱培育箱、超凈任務(wù)臺等。超凈任務(wù)臺等。三、微生物分別純化的操作方法三、微生物分別純化的操作方法1、取樣、取樣 取土樣取土樣10g2、稀釋土壤懸濁液、稀釋土壤懸濁液引見兩種方法：稀釋混合平板法和平板劃線法引見兩種方法：稀釋混合平板法和平板劃線法一稀釋混合平板分別法以分別真菌為例一稀釋混合平板分別法以分別真菌為例稀釋土壤懸濁液操作留意：稀釋土壤懸濁液操作留意：依次編號：按依次編號：按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及及10-6錐形瓶中的玻璃珠將顆粒狀樣品打散錐形瓶中的玻璃珠將顆粒狀樣品打散無菌操作：超凈任務(wù)臺、酒精燈、無菌吸無菌操作：超凈任務(wù)臺、酒精燈、無菌吸管管移液管移液后多余

3、的液體處置移液管移液后多余的液體處置試管中懸濁液須持移液管吹洗三次攪勻試管中懸濁液須持移液管吹洗三次攪勻3、平板的制造、平板的制造每組預(yù)備兩套無菌培育皿，在皿底注明稀釋液濃度每組預(yù)備兩套無菌培育皿，在皿底注明稀釋液濃度10-4、10-5、10-6 中中任選兩種濃度、菌名如黑曲霉、班級、組別。任選兩種濃度、菌名如黑曲霉、班級、組別。融化錐形瓶中的培育基，放在融化錐形瓶中的培育基，放在45-50 恒溫水浴鍋中備用恒溫水浴鍋中備用制備混合液平板：無菌操作下，翻開培育皿在無菌培育皿一邊加兩滴鏈霉制備混合液平板：無菌操作下，翻開培育皿在無菌培育皿一邊加兩滴鏈霉素液，另一邊加素液，另一邊加mL土壤稀釋液留

4、意不要讓兩液相混，倒入土壤稀釋液留意不要讓兩液相混，倒入45-50融融化的真菌培育基約化的真菌培育基約1/4-1/3培育皿高度。培育皿平放在桌上順時針、逆時針悄培育皿高度。培育皿平放在桌上順時針、逆時針悄然轉(zhuǎn)動，混勻皿中物質(zhì)。培育基冷凝后即成平板。然轉(zhuǎn)動，混勻皿中物質(zhì)。培育基冷凝后即成平板。 恒溫培育恒溫培育:平板倒置于平板倒置于28-30恒溫箱中恒溫箱中,培育培育5-6天后天后察看真菌菌落形狀。察看真菌菌落形狀。 轉(zhuǎn)接純化轉(zhuǎn)接純化:挑取單個菌落挑取單個菌落,接種接種到新穎平板上到新穎平板上,培育察看培育察看,直至直至純化。純化。平板制造的操作留意：平板制造的操作留意：融化培育基時不要溢出燒瓶

5、或糊底融化培育基時不要溢出燒瓶或糊底無菌操作下，翻開培育皿的操作無菌操作下，翻開培育皿的操作一根一根mL移液管屢次移液先移低濃度懸濁液，再移高濃度懸濁液。移液管屢次移液先移低濃度懸濁液，再移高濃度懸濁液。移液管可以用稀釋懸濁液的那根在無菌操作下接著做，也可另取一根無菌的。移液管可以用稀釋懸濁液的那根在無菌操作下接著做，也可另取一根無菌的。為什么培育皿要倒置培育為什么培育皿要倒置培育二平板劃線分別法以分別細(xì)菌為例二平板劃線分別法以分別細(xì)菌為例 每組預(yù)備兩套無菌培育皿每組預(yù)備兩套無菌培育皿,在皿底菌名、班級、組別。在皿底菌名、班級、組別。融化培育基，在融化培育基，在45-50 恒溫水浴鍋中備用恒溫

6、水浴鍋中備用制備平板：無菌操作下，翻開培育皿，倒入制備平板：無菌操作下，翻開培育皿，倒入45-50融化的融化的細(xì)菌培育基約細(xì)菌培育基約1/4-1/3培育皿高度。培育皿平放在桌上，培育培育皿高度。培育皿平放在桌上，培育基冷凝后即成平板?；淠蠹闯善桨濉?平板劃線平板劃線:無菌操作下無菌操作下,用接種環(huán)挑取一環(huán)用接種環(huán)挑取一環(huán)10-1土壤懸濁液土壤懸濁液,在平板上悄然劃線切勿劃破培育基劃線的方式可取以在平板上悄然劃線切勿劃破培育基劃線的方式可取以以下圖以下圖 恒溫培育恒溫培育:平板倒置于平板倒置于28-30恒溫箱中恒溫箱中,培育培育-天后察天后察看細(xì)菌菌落形狀?？醇?xì)菌菌落形狀。轉(zhuǎn)接純化轉(zhuǎn)接純化:挑取單個菌落挑取單個菌落,接種到新穎平板上接種到新穎平板上,培育察看培育察看,直至直至純化純化平板劃線的操作留意：平板劃線的操作留意： 接種換環(huán)的運(yùn)用接種換環(huán)的運(yùn)用 分區(qū)域劃線，劃完第一個區(qū)域，燒掉接種環(huán)上的剩余物，分區(qū)域劃線，劃完第一個區(qū)域，燒掉接種環(huán)上