CCK8法檢測細(xì)胞增殖預(yù)實驗

1、SRT-1720, EX527一定要應(yīng)用在白血病細(xì)胞株起作用的濃度方可比較對293T細(xì)胞和白血病細(xì)胞株的不同影響，請重復(fù)實驗。實驗日期：2021/08/22-2021/08/27實驗項目：CCK8法檢測細(xì)胞增殖實驗地點：廣西醫(yī)科大學(xué)藥基樓14樓生物靶向中心實驗人員：高宗燕、寧海萍、李登峰實驗?zāi)康模簷z測SRT-1720/EX527刺激293T細(xì)胞后對細(xì)胞增殖的影響主要試劑：SRT-1720, EX527,CCK8試劑盒主要儀器：酶標(biāo)儀實驗步驟：一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細(xì)胞具體數(shù)量時）1、先用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞至96孔板。2、設(shè)置4個細(xì)胞濃度梯度：0，2022，

2、4000，8000，每組4個復(fù)孔。3、接種后培養(yǎng)24小時使細(xì)胞貼壁，然后加CCK試劑培養(yǎng)4小時后測定OD值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X軸），OD值為縱坐標(biāo)（Y軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時間。）圖一、標(biāo)準(zhǔn)曲線二、細(xì)胞增殖檢測1、在96孔板中配置100L的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（在37，5% CO2的條件下）。2、向培養(yǎng)板加入10L SRT-1720（終濃度3um）, EX527（終濃度100um）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育約24h4、每孔加入10L CCK

3、溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2小時。6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。圖二、3um SRT1720刺激293T細(xì)胞后的細(xì)胞增殖曲線。該曲線呈S形，符合細(xì)胞正常生長情況。圖三、100um EX527刺激293T細(xì)胞后的細(xì)胞增殖曲線。該曲線前部分呈S形，符合細(xì)胞正常生長情況，但在進(jìn)入對數(shù)期之后曲線有下滑，之后進(jìn)入平臺期。分析：SRT1720為SIRT1特異性活化劑，在前期實驗中對白血病細(xì)胞株的生長表現(xiàn)出抑制作用，此次實驗中SRT1720對正常細(xì)胞（293T）的生長無明顯抑制作用。暗示SIRT1的活化對正常細(xì)胞的生長可能無明顯影響。小劑量E

4、X527為SIRT1特異性抑制劑，在前期實驗中大劑量EX527對白血病細(xì)胞株的生長表現(xiàn)出抑制作用，而小劑量EX527無此效應(yīng)，此次實驗中大劑量EX527對正常細(xì)胞（293T）的生長可能有輕度抑制作用。但不能以一次實驗結(jié)果做出肯定的結(jié)論，該實驗還需重復(fù)。精品 Word 可修改 歡迎下載 親愛的用戶：煙雨江南，畫屏如展。在那桃花盛開的地方，在這醉人芬芳的季節(jié)，愿你生活像春天一樣陽光，心情像桃花一樣美麗，感謝你的閱讀。1、最困難的事就是認(rèn)識自己。21.12.612.6.202121:4621:46:4912月-2121:462、自知之明是最難得的知識。二二一二二一年十二月六日2021年12月6日星期

5、一3、越是無能的人，越喜歡挑剔別人。21:4612.6.202121:4612.6.202121:4621:46:4912.6.202121:4612.6.20214、與肝膽人共事，無字句處讀書。12.6.202112.6.202121:4621:4621:46:4921:46:495、三軍可奪帥也。星期一, 十二月 6, 2021十二月 21星期一, 十二月 6, 202112/6/20216、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無力。9時46分9時46分6-12月-2112.6.20217、人生就是學(xué)校。21.12.621.12.621.12.6。2021年12月6日星期一二二一二二一