(病原生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)) 白喉?xiàng)U菌、厭氧菌、分枝桿菌病毒及其它微生物

1、( (病原生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)病原生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)) )實(shí)驗(yàn)六白實(shí)驗(yàn)六白喉?xiàng)U菌、厭氧菌、分枝桿菌病毒及其喉?xiàng)U菌、厭氧菌、分枝桿菌病毒及其它微生物它微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 操作 白喉棒狀桿菌呂氏血清斜面：Albert染色法 病毒血凝試驗(yàn) 示教 破傷風(fēng)梭菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)特性 結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)特性 病原性真菌形態(tài)、培養(yǎng)特性 血凝抑制試驗(yàn) 示教片：觀察結(jié)核分枝桿菌、鉤端螺旋體、新型隱球菌和病毒包涵體的形態(tài)目的要求熟悉白喉棒狀桿菌的形態(tài)熟悉結(jié)核分枝桿菌的形態(tài)和培養(yǎng)特性熟悉破傷風(fēng)梭菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)特性了解病原性真菌形態(tài)和培養(yǎng)特性掌握鉤端螺旋體、病毒包涵體的根本形態(tài)了解恙蟲病立克次體的根本形態(tài)了解病毒血凝

2、試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)的方法，掌握根本原理Albert染色法制片同革蘭染色，甲液染5分鐘水洗再以乙液碘液染1分鐘 水洗印干油鏡檢 白喉棒狀桿菌白喉棒狀桿菌(C.diphtheriae)Albert染色：見異染顆粒，菌體藍(lán)綠色，異染顆粒藍(lán)黑染色：見異染顆粒，菌體藍(lán)綠色，異染顆粒藍(lán)黑色用于鑒定色用于鑒定病毒的血凝試驗(yàn) 血凝素hemagglutinin HA：由病毒基因編碼的糖蛋白刺突。與病毒吸附和傳入宿主細(xì)胞有關(guān)。HA能與人或其它動物多種紅細(xì)胞外表N乙酰神經(jīng)氨酸酶受體結(jié)合引起紅細(xì)胞凝集。 滴定病毒的血凝效價，采用一定的病毒量，通常采用4個血凝單位?？滋?23456789生理鹽水（ml）病毒液（ml）0

3、.9+0.10.5+0.50.5+0.50.5+0.50.5+0.50.5+0.50.5+0.50.5+0.50.50.5棄棄掉掉病毒稀釋度1 101 201 401 801 1601 3201 6401 1280對照雞紅血球細(xì)胞懸液（ml）各0.5ml血凝試驗(yàn)血凝效價的滴定)將有機(jī)玻璃板孔從19進(jìn)行編號，從第1孔起至第9孔，按下表加。將病毒液按下表進(jìn)行稀釋。自第9孔開始反方向向前每孔參加0.5%雞紅血球0.5ml，搖勻后放置室溫45分鐘 血凝試驗(yàn)結(jié)果判定 結(jié)果判定：薄層凝集 圓點(diǎn)不凝集 凝集特別顯著：“ 凝集現(xiàn)象次之：“ 凝集清楚可見：“ 稍顯凝集者：“ 血凝單位：呈“凝集時的最高稀釋度。此

4、時的稀釋度即為1個血凝單位。血平板庖肉培養(yǎng)基 牛奶培養(yǎng)基破傷風(fēng)梭菌37 48h，薄膜狀爬行生長物，邊緣不齊，伴輕度 溶血肉湯混濁，肉渣部分被消化，呈灰白色產(chǎn)氣莢膜梭菌菌落平整，光滑，邊緣齊。有雙層溶血環(huán)：內(nèi)層完全溶血( 毒素引起)，外層不完全溶血( 毒素引起)分解肉渣中糖類而產(chǎn)生大量氣體。分解乳糖產(chǎn)酸，指示劑變黃，培養(yǎng)基凝固,產(chǎn)生大量氣體,呈蜂窩狀,將液面凡士林上推,甚至沖走管口棉篩?！皼坝繘坝堪l(fā)酵發(fā)酵”示教：示教：破傷風(fēng)梭菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)特性的破傷風(fēng)梭菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)特性的培培 養(yǎng)養(yǎng) 特特 性性示教：結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)特性示教：結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)特性 專性需氧，最適37 ，營養(yǎng)要

5、求高，生長緩慢，18h分裂一代。羅氏羅氏(Lowenstein-Jensen)培養(yǎng)基含蛋黃、甘油、馬鈴薯、無機(jī)鹽、孔雀綠，26周可見菌落生長 菌落特點(diǎn)：菜花、顆?；蚪Y(jié)節(jié)狀菌落，乳白色或黃色，不透明。黃曲霉示教：真菌的真菌的培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性多細(xì)胞真菌：觀察氣生菌絲，營養(yǎng)菌絲，外表隆起，淺溝及菌落基底顏色。單細(xì)胞真菌： 酵母型菌落 新型隱球菌：菌落圓形，較大，濕潤呈蠟狀，乳白色 類酵母型菌落 白假絲酵母菌：菌落圓形，較大，白色菌落底層有假菌絲 原理 病毒引起的血凝現(xiàn)象能被相應(yīng)的抗血凝素抗體所抑制，稱血凝抑制。利用血凝素特異性抗體與病毒外表相應(yīng)的HA相互作用，使病毒血凝現(xiàn)象抑制的試驗(yàn)稱血凝抑制試驗(yàn)。 4個血凝單位的病毒液血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果判定 測定孔：圓點(diǎn) 不凝集 薄層凝集 血清對照孔： 圓點(diǎn)不凝集 病毒對照孔：薄層凝集 RBC對照孔：圓點(diǎn)不凝集 血凝抑制試驗(yàn)效價：呈完全血凝抑制的最高血清稀釋度。 結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌示教片F(xiàn)ontana鍍銀染色：鏡下可見棕褐色兩端有鉤的螺旋體