高效液相色譜法測定奶粉中三聚氰胺的含量

1、LOGO測定奶粉中三聚氰胺的含量測定奶粉中三聚氰胺的含量高效液相色譜法高效液相色譜法生物工程生物工程1001班班目錄目錄三鹿毒奶粉事件1液相色譜法簡介2樣品檢測方案3結(jié)論與反思4毒奶粉事件回顧毒奶粉事件回顧v2008年年7月，舉國上下正在為剛剛過去的月，舉國上下正在為剛剛過去的汶川大地震默哀紀(jì)念的時(shí)候，正在為即將到汶川大地震默哀紀(jì)念的時(shí)候，正在為即將到來的北京奧運(yùn)會(huì)而歡慶的時(shí)候，一則新聞報(bào)來的北京奧運(yùn)會(huì)而歡慶的時(shí)候，一則新聞報(bào)道了大量嬰兒因喝了某品牌奶粉而患上了腎道了大量嬰兒因喝了某品牌奶粉而患上了腎結(jié)石。隨后三鹿集團(tuán)被推上了風(fēng)口浪尖，一結(jié)石。隨后三鹿集團(tuán)被推上了風(fēng)口浪尖，一時(shí)間包括蒙牛、伊利

2、在內(nèi)的全國各大品牌奶時(shí)間包括蒙牛、伊利在內(nèi)的全國各大品牌奶粉均被查出粉均被查出“毒奶粉毒奶粉”，引起了全國恐慌，引起了全國恐慌，三鹿集團(tuán)因此也破產(chǎn)倒閉。而這一毒奶粉事三鹿集團(tuán)因此也破產(chǎn)倒閉。而這一毒奶粉事件的罪魁禍?zhǔn)准淖锟準(zhǔn)兹矍璋芬搽S之為大眾知三聚氰胺也隨之為大眾知曉。曉。高效液相色譜法原理高效液相色譜法原理 高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論，高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論，在技術(shù)上，流動(dòng)相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達(dá)在技術(shù)上，流動(dòng)相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達(dá)4.9107Pa）;色譜色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從

3、而使柱效大大高于經(jīng)典柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜（每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬）；同時(shí)柱后連有高靈敏度的液相色譜（每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬）；同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測。檢測器，可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測。 高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣虼瞬皇芨咝б合嗌V法，只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣虼瞬皇茉嚇訐]發(fā)性的限制。對于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對分子量的有機(jī)物試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對分子量的有機(jī)物，原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進(jìn)行分離、分析。原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進(jìn)行分離、

4、分析。 三聚氰胺是一種低毒的化工原料，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其在動(dòng)物體內(nèi)三聚氰胺是一種低毒的化工原料，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其在動(dòng)物體內(nèi)代謝很快且不會(huì)存留，主要影響泌尿系統(tǒng)。乳制品中添加三聚氰胺會(huì)使代謝很快且不會(huì)存留，主要影響泌尿系統(tǒng)。乳制品中添加三聚氰胺會(huì)使得食品的蛋白質(zhì)測試含量偏高，從而使劣質(zhì)食品通過食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的測得食品的蛋白質(zhì)測試含量偏高，從而使劣質(zhì)食品通過食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的測試，就送檢的奶粉樣品，采用高效液相色譜法（試，就送檢的奶粉樣品，采用高效液相色譜法（HPLC）測定其中的三）測定其中的三聚氰胺的含量。聚氰胺的含量。 因此，在該對奶粉樣品的檢測實(shí)驗(yàn)中，由于樣品不耐高溫，宜采用此因此，在該對奶

5、粉樣品的檢測實(shí)驗(yàn)中，由于樣品不耐高溫，宜采用此法分析。法分析。高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn) 高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。 高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 高靈敏度：紫外檢測器可達(dá)高靈敏度：紫外檢測器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在，進(jìn)樣量在L數(shù)量數(shù)量級。級。 應(yīng)用范圍

6、廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。 分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在多，通常分析一個(gè)樣品在1530分鐘，有些樣品甚至在分鐘，有些樣品甚至在5分分鐘內(nèi)即可完成，一般小于鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)。小時(shí)。樣品檢測方案樣品檢測方案高效液高效液相色譜相色譜法檢測法檢測樣品的來樣品的來源和預(yù)處源和預(yù)處理

7、方法理方法確定儀器確定儀器配置配置確定初始確定初始操作條件操作條件定性鑒定定性鑒定與與定量分析定量分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果及判定及判定樣品的來源和預(yù)處理方法v高效液相色譜法要求試樣能制成溶液。這樣，我們在接到一個(gè)未知樣品時(shí)，就必須了解的來源，從而估計(jì)樣品可能含有的組分，以及樣品的溶解度范圍。如果樣品體系簡單，試樣組分可溶解則可直接分析。如果樣品中有不能用HPLC直接分析的組分，或樣品濃度太低，就必須進(jìn)行必要的預(yù)處理，如采用吸附、解析、萃取、濃縮、稀釋、提純、衍生化等方法處理樣品。v原理：以三聚氰胺為原料制作的成型品經(jīng)4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色譜分離、測定，以保留時(shí)間定性、峰高或峰面

8、積定量。確定儀器配置1、主要儀器與設(shè)備v a高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器v b分析天平：感量為0.0001g和0.01gv c離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/minv d超聲波水浴v e固相萃取裝置v f氨氣吹干儀v 渦旋混合器2、材料與方法：以三聚氰胺為原料制作的成型品經(jīng)4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色譜分離、測定，以保留時(shí)間定性、峰高或峰面積定量。確定初始操作條件1 1、色譜條件、色譜條件 色譜柱：色譜柱：C18 4.6150mm，5m流動(dòng)相：己烷磺酸鈉（流動(dòng)相：己烷磺酸鈉（5mmol/L）-磷酸（磷酸（0.1%）溶液）溶液+甲醇（甲醇（90+10）；）； 流速

9、流速1.0mL/min。柱溫：柱溫：35紫外檢測器：波長為紫外檢測器：波長為235nm。進(jìn)樣體積：進(jìn)樣體積：10L2、測定、測定將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)后，分別將濃度為將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)后，分別將濃度為0.05g/mL，0.1g/mL，0.5g/mL，1g/mL，2g/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液和中樣品處理后的浸泡液的標(biāo)準(zhǔn)工作液和中樣品處理后的浸泡液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以色譜峰面積或峰高定量。注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以色譜峰面積或峰高定量。 3、精密度、精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的的15

10、%。1000100SVcX1000100SVcX三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖min0246810mAU00.20.40.60.81.01.21.41.6三聚氰胺 7.401定性鑒定與定量分析定性鑒定與定量分析v 待測樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超出線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。兩次進(jìn)樣圖譜兩次進(jìn)樣圖譜第一次進(jìn)樣第一次進(jìn)樣第二次進(jìn)樣第二次進(jìn)樣實(shí)驗(yàn)結(jié)果及判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果及判定 按照上述步驟進(jìn)行檢測，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論，如：按照上述步驟進(jìn)行檢測，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論，如：v在符合要求的條件及規(guī)范的操作步驟的前提下，經(jīng)檢驗(yàn)該樣品的三聚氰胺含量為6.90mg/khv根據(jù)GB/T 22388-2008規(guī)定，該樣品三聚氰胺含量6.90mg/kg，大于規(guī)定的2mg/kg,產(chǎn)品不及格。結(jié)論與反思v 檢測是手段，乳制品的質(zhì)量安全才是最終的目的。一旦發(fā)生食品質(zhì)量安全事故，首先受害的是消費(fèi)者。在受到傷害的情況下，消費(fèi)者對食品質(zhì)量安全事故做出的第一反應(yīng)就是拒絕繼續(xù)消費(fèi)問題產(chǎn)品。于是就造成了一系列的食品安全“傷害效應(yīng)”，表現(xiàn)為對消費(fèi)者的傷害效應(yīng)，對加工企業(yè)和奶站生產(chǎn)的傷害效應(yīng)和對廣大奶農(nóng)產(chǎn)生了傷害效應(yīng)。v 在總體