免疫比濁法PPT學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)1免疫比濁法免疫比濁法12材 料 和 方 法3實 驗 結(jié) 果實 驗 原 理第1頁/共11頁實驗原理 免疫球蛋白（Ig）是指一類具有抗體樣結(jié)構(gòu)或具有抗體活性的球蛋白，能與誘導(dǎo)其產(chǎn)生的抗原發(fā)生特異性結(jié)合，是體液免疫應(yīng)答的主要效應(yīng)分子。免疫球蛋白水平增高常見于各種慢性細(xì)菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺膿腫等。在多種自身免疫病、肝臟疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高：在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中以IgG、IgA或IgG 、IgM升高較多見；在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中則以IgM升高為主。免疫球蛋白水平降低多見于先天性體液免疫缺乏病、腎病綜合癥、吸收不良綜合癥、淋巴瘤、放射損傷和免疫抑制劑治療后等情況。第2頁/共

2、11頁實驗原理血漿蛋白分析技術(shù)經(jīng)歷了：試管沉淀反應(yīng)、瓊脂凝膠的擴(kuò)散實驗發(fā)展到現(xiàn)代免疫分析技術(shù)，其中很重要得一類就是免疫比濁法。 第3頁/共11頁實驗原理 抗體（Ab）與可溶性抗原（Ag）反應(yīng)，形成一定結(jié)構(gòu)的免疫復(fù)合物，在PEG作用下，成為懸浮于反應(yīng)溶液中的微粒，使樣品濁度發(fā)生變化。在沉淀反應(yīng)中形成的復(fù)合物微粒具有特殊的光學(xué)性質(zhì)，當(dāng)一定波長光線通過濁度發(fā)生變化的反應(yīng)混合物時，由于被不溶性免疫復(fù)合物吸收而減弱，故在一定范圍內(nèi)吸光度與免疫復(fù)合物量呈正相關(guān)。當(dāng)抗體濃度固定時，樣品的濁度與其中所含抗原量成正比。第4頁/共11頁實驗原理 聚乙二醇即PEG是中性、無毒且具有獨特理化性質(zhì)和良好的生物相溶性的高

3、分子聚合物，聚乙二醇具有高度的親水性，在水溶液中有較大的水動力學(xué)體積，并且沒有免疫原性。 在免疫反應(yīng)中，為增強抗原抗體反應(yīng)常使用增聚劑，如3-4的聚乙二醇等，利用其破壞抗原抗體的水化層，促進(jìn)其靠近反應(yīng)，但如濃度不適合，高了會影響其它溶質(zhì)或產(chǎn)生非特異性聚集影響結(jié)果。第5頁/共11頁優(yōu)點 穩(wěn)定性好，敏感性高(達(dá)ng/L)、精確度高，干擾因素少，結(jié)果判斷更加客觀、準(zhǔn)確。 快速、簡便，結(jié)果回報時間短，便于及時將各種信息向臨床反饋，又可節(jié)約大量人力物力，利于大批量樣品的處理。 能更好地避免標(biāo)本之間的污染及標(biāo)本對人的污染。1. 可利用多道計數(shù)器、測光儀，同一份樣品同時測定幾十種和臨床有關(guān)的分析項目，血清用

4、量少，具有明顯的應(yīng)用優(yōu)勢。免疫比濁法的特點：實驗原理第6頁/共11頁缺點當(dāng)抗體或抗原大量過剩時，出現(xiàn)可溶性的復(fù)合物，造成誤差。應(yīng)維持反應(yīng)管中的抗體蛋白量始終過剩，此值要預(yù)先測定。受血脂濃度影響。脂蛋白的小顆?？尚纬蓾岫?，造成假性升高。少量小抗原抗體復(fù)合物極難形成濁度，除非放置較長時間 。如要形成較大的的復(fù)合物，抗原抗體量應(yīng)較大。 實驗原理免疫比濁法的特點：第7頁/共11頁實驗材料1.免疫球蛋白A,M,G（IgA, IgM, IgG）測定試劑2.免疫球蛋白A,M,G （IgA, IgM, IgG）校準(zhǔn)品，蒸餾水， 血清樣本3.微量加樣槍、試管4.分光光度儀、水浴箱第8頁/共11頁實驗方法空白管校準(zhǔn)管樣本管+蒸餾水（10mL）+校準(zhǔn)品（10mL）+樣品血清（10mL）OD340+IgX試劑（1mL）375min37,10min混勻第9頁/共11頁Ig濃度（g/L）= Ig校準(zhǔn)濃度（g/L）樣本