熒光定量PCR技術(shù)臨床應(yīng)用

1、會計學(xué)1熒光定量熒光定量PCR技術(shù)臨床應(yīng)用技術(shù)臨床應(yīng)用基因診斷免疫學(xué)診斷臨床診斷細(xì)胞膜細(xì)胞核DNA轉(zhuǎn)錄 mRNA翻譯蛋白質(zhì)臨床表現(xiàn)生化診斷熒光定量熒光定量PCRPCR在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用基基因因型型血清學(xué)亞型血清學(xué)亞型基因長基因長度度(nt)臨床突變率臨床突變率主要主要流行地域流行地域PC*(G1896A)BCP*(1762/1764)Badw2ayw1321550（常）（常）T185816東南亞、中國、東南亞、中國、日本日本Cayr;adrq+;Adrq-;adr;adw2321550（常）（常）T1858或或C185858（常）（常）東南亞、中國、東南亞、中國、日本、澳洲、

2、日本、澳洲、美國美國病原學(xué)病原學(xué)乙型肝炎檢測標(biāo)志物lHBsAg，抗-HBslHBeAg，抗-Hbel抗HBclHBV-DNA、人微小病毒B19等煮沸法煮沸法柱提取柱提取磁珠法磁珠法一步法一步法二步法二步法裂解方法裂解方法煮沸煮沸化學(xué)裂解化學(xué)裂解分離方法分離方法離心離心親和吸附吸附或雜交步驟步驟1.煮沸裂解2.離心，去除大分子的抑制物3.取上清擴增1.煮沸裂解2.離心棄上清，濃縮標(biāo)本并去除小分子抑制物3.離心，取上清擴增，去除大分子抑制物。1.化學(xué)裂解2.過柱吸附3.洗滌4.洗脫5.取洗脫液擴增1.化學(xué)裂解2.加磁珠吸附3.洗滌4.洗脫5.取洗脫液擴增抗干擾能力抗干擾能力差較差好最好提取物組分提

3、取物組分較小分子量的混合物與核酸相似分子量的混合物全核酸特定病原的核酸自動化程度自動化程度手工手工手工或自動半自動或全自動DNA/RNA 參考品（質(zhì)粒等）參考品（質(zhì)粒等）測量OD260的值得到mg/ml通過與分子量的計算，得到拷貝數(shù)/ml 不同實驗室得到的結(jié)果差別很大。HCVHCV國際單位與拷貝數(shù)換算國際單位與拷貝數(shù)換算NGI NGI SuperQuant:SuperQuant: 1 IU/mL = 3.4 copies/ml1 IU/mL = 3.4 copies/ml (NGI Product License Application to FDA ) (NGI Product Licens

4、e Application to FDA )Roche Roche Amplicor Monitor v2.0Amplicor Monitor v2.0 1 1 IU/mL = IU/mL = 0.9 copies/ml0.9 copies/ml (Roche Molecular Systems) (Roche Molecular Systems)Cobas Amplicor Monitor HCV v2.0Cobas Amplicor Monitor HCV v2.0 1 IU/mL = 2.7 copies/ml1 IU/mL = 2.7 copies/ml (Roche Molecula

5、r Systems) (Roche Molecular Systems)LCx HCV RNA Quantitative AssayLCx HCV RNA Quantitative Assay 1 IU/mL = 3.8 copies/ml1 IU/mL = 3.8 copies/ml (Abbott Diagnostics)(Abbott Diagnostics)Bayer bDNA 3.0:Bayer bDNA 3.0: 1 IU/mL = 5.2 copies/ml1 IU/mL = 5.2 copies/ml (Bayer Development Group)(Bayer Development Group) 未知未知HCV RNA 樣本樣本甲實驗室 5000拷貝/ml 乙實驗室 10000拷貝/ml 丙實驗室 50000拷貝/ml 丁實驗室 20000拷貝/ml 實驗室結(jié)果的互通性實驗室結(jié)果的互通性20000IU/mlHCV RNA 樣本樣本甲實驗室 40000拷貝/ml1IU/ml2拷貝/ml 乙實驗室 10000拷貝/ml 1IU/ml0.5拷貝/