試驗(yàn)1水質(zhì)毒性快速測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 水質(zhì)毒性快速測(cè)定水質(zhì)毒性快速測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)材料和儀器實(shí)驗(yàn)材料和儀器注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)12345目錄目錄1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆账|(zhì)毒性快速測(cè)定的原理和方法掌握水質(zhì)毒性快速測(cè)定的原理和方法了解水質(zhì)毒性評(píng)價(jià)了解水質(zhì)毒性評(píng)價(jià)2 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 發(fā)光細(xì)菌是一類可以發(fā)光細(xì)菌是一類可以自身發(fā)出藍(lán)綠色光自身發(fā)出藍(lán)綠色光的細(xì)菌，一旦遭遇的細(xì)菌，一旦遭遇外界不利因素，如有毒物質(zhì)，會(huì)很外界不利因素，如有毒物質(zhì)，會(huì)很“敏感敏感”地反應(yīng)，立即影地反應(yīng)，立即影響發(fā)光強(qiáng)度響發(fā)光強(qiáng)度; ; 抑制程度跟所受到的毒物的濃度及其毒性大小抑制程度跟所受到的毒物的濃度及其毒性大

2、小正相關(guān)正相關(guān)； 抑制程度可以用光電傳感器檢測(cè)，推算樣品毒性大小。抑制程度可以用光電傳感器檢測(cè)，推算樣品毒性大小。2 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 通過檢測(cè)通過檢測(cè)水質(zhì)綜合毒性水質(zhì)綜合毒性對(duì)發(fā)光細(xì)菌毒性對(duì)發(fā)光細(xì)菌毒性發(fā)光強(qiáng)度發(fā)光強(qiáng)度的的抑制率抑制率來確定水樣的毒性強(qiáng)弱。來確定水樣的毒性強(qiáng)弱。 發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)弱，能表示其生命力強(qiáng)弱。發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)弱，能表示其生命力強(qiáng)弱。 細(xì)菌熒光素酶細(xì)菌熒光素酶 (LE) 還原性的黃素單核苷酸還原性的黃素單核苷酸(FMNH2) 長鏈脂肪醛長鏈脂肪醛(RCHO) 2 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理l毒性抑制發(fā)光，變化程度與受試物濃度在毒性抑制發(fā)光，變化程度與受試物濃度在一定范圍內(nèi)線性相

3、關(guān)一定范圍內(nèi)線性相關(guān)抑制發(fā)光機(jī)理：抑制發(fā)光機(jī)理：A.A.直接抑制參與發(fā)光酶的活性直接抑制參與發(fā)光酶的活性B.B.抑制細(xì)胞內(nèi)與發(fā)光反應(yīng)有關(guān)的代謝過程抑制細(xì)胞內(nèi)與發(fā)光反應(yīng)有關(guān)的代謝過程 受試毒性發(fā)光強(qiáng)度3 實(shí)驗(yàn)材料和儀器實(shí)驗(yàn)材料和儀器便攜式水質(zhì)毒性分析儀便攜式水質(zhì)毒性分析儀發(fā)光菌劑發(fā)光菌劑自來水自來水池塘水池塘水4 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備 （活化）（活化）用500 l復(fù)蘇稀釋液使1小瓶發(fā)光細(xì)菌凍干粉試劑水合用50 l移液槍吹打試劑3-4次，使試劑混合均勻?qū)⑺系脑噭┓旁谑覝?21-25 oC)下15 min1234 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)試樣本準(zhǔn)備測(cè)試樣本準(zhǔn)備將試管A1、A2放到試管架的A1

4、和A2位置將待測(cè)樣品與滲透壓調(diào)節(jié)液按9:1的比例混合，手指夾住試管，手腕甩動(dòng)，使其充分混合均勻混合均勻4 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)量過程測(cè)量過程A1A21ml復(fù)蘇稀復(fù)蘇稀釋液（空白）釋液（空白）1ml滲透壓調(diào)節(jié)滲透壓調(diào)節(jié)后的樣本后的樣本4 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)量過程測(cè)量過程A1A250 ul水合后的試劑水合后的試劑（先放置（先放置15 min）加液間隔時(shí)間加液間隔時(shí)間15s，用，用1ml的移液槍吹打的移液槍吹打3-4次混勻次混勻（每管用一個(gè)（每管用一個(gè)Tip頭，避免交叉感染）頭，避免交叉感染）發(fā)光細(xì)菌菌液發(fā)光細(xì)菌菌液4 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)量過程測(cè)量過程 試劑反應(yīng)試劑反應(yīng)5 min，以，以A1管加入試劑

5、時(shí)刻開始計(jì)時(shí)；管加入試劑時(shí)刻開始計(jì)時(shí)； 4 min時(shí)，開機(jī)時(shí)，開機(jī) ； 5 min時(shí)，將時(shí)，將A1管讀完后，取出管讀完后，取出A1管；將管；將A2管放管放進(jìn)儀器中讀取進(jìn)儀器中讀取A2管的讀數(shù)，儀器自動(dòng)給出樣品的管的讀數(shù)，儀器自動(dòng)給出樣品的相對(duì)發(fā)光度和相對(duì)發(fā)光度和RLU值。值。4 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)量過程測(cè)量過程5 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1認(rèn)真準(zhǔn)備樣品認(rèn)真準(zhǔn)備樣品, 去除影響檢測(cè)的因素去除影響檢測(cè)的因素,如色、如色、pH、氯、濁度、氯、濁度2反應(yīng)試劑水合過程混勻必須反應(yīng)試劑水合過程混勻必須充分，充分，水合水合完全完全！3手手不應(yīng)接觸不應(yīng)接觸任何試管的任何試管的中下部中下部4必須熟練、準(zhǔn)確地使用移液槍吸取或混合樣品必須熟練、準(zhǔn)確地使用移液槍吸取或混合樣品5移液槍量程選擇移液槍量程選擇得當(dāng)，計(jì)量得當(dāng)，計(jì)量無誤無誤6吸取水合反應(yīng)試劑等有氣泡的液體吸取水合反應(yīng)試劑等有氣泡的液體時(shí)，移時(shí)，移液槍頭應(yīng)該放置于試液槍頭應(yīng)該放置于試 管底部吸取管底部吸取7樣品稀釋過程中避免飛濺、掛壁等樣品稀釋過程中避免飛濺、掛壁等現(xiàn)象，造成現(xiàn)象，造成樣品損失樣品損失8避免試劑、樣品污染（注意更換槍頭，